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文档简介

1、营养与食品卫生学学系2014.4实验一 食品中维生素C的测定1一、实验目的 食品中的总抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式。当食物放置时间较长或经过烹调处理后，其中有相当一部分抗坏血酸转变为脱氢型，脱氢型的抗坏血酸仍有85作用的维生素C活性，因此对这类食物常常测定总抗坏血酸。2二、测定方法2,4二硝基苯肼法 样品中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸，在一定条件下，脱氢型抗坏血酸与2,4二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的生成量与总抗坏血酸含量成正比，将脎溶解在硫酸中进行比色测定。3（一）绘制标准曲线 抗坏血酸标准液（1mg/ml）：溶解100mg纯抗坏血酸于100ml 1草酸溶液中。 标准曲线

2、绘制：加1g活性炭于50ml标准溶液中，摇动1min，过滤。取10ml滤液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度为20g/ml。取10、20、40、60、80ml稀释液，分别放入7个100ml容量瓶中，用1硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为2、4、8、12、16、20g/ml。 4按样品测定步骤形成脎并比色。 以吸光度为纵坐标，以抗坏血酸浓度（g/ml）为横坐标绘制标准曲线。5（二）样品操作步骤 1.样品制备： 称取100g鲜样和100g 2草酸溶液，倒入打碎机中打成匀浆，取1040g匀浆（含12mg抗坏血酸）倒入100ml容量瓶中，用

3、1草酸溶液稀释至刻度，混匀。62.氧化处理： 取25ml上述滤液，加入0.5g活性炭，振摇1min，离心5min，取上清夜过滤。取10ml此氧化提取液，加入10ml 2硫脲溶液，混匀。7 3.成色反应： （1）于3个试管中各加入4ml稀释液。一个试管作为空白，在其余试管中加入1.0ml22，4二硝基苯肼溶液，将所有试管放入（370.5）恒温箱或水浴中，保温1小时。8 （2）1小时后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷却到室温，然后加入1.0ml 22，4二硝基苯肼溶液，在室温中放置1015min后放入冰水中。其余步骤同样品。 9 （3）85硫酸处理：当试管放入冰水后，向每

4、一试管中加入5ml 85硫酸，滴加时间至少需要1min，需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置30min后比色。 （4）比色：用1cm比色杯，以空白液调零点，于500nm波长测吸光值。，10三、计算式中 x 样品中抗坏血酸的含量，mg/100g；由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液 浓度，g/ml；m 试样质量，g；f 样品溶液的稀释倍数；V 样品由1草酸定容后的容积，ml。11四、注意事项1大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。2加85硫酸溶解形成脎时应边加边摇动试管，防止样品中的糖类成分碳化而使溶液变黑。123加入硫酸30min后应立刻比色，因为颜色会继续加深。4硫脲

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