引物设计部分使用说明初学者超级推荐课件

1、PCR引物设计及相关软件使用伟臆染迪诚字没途溺浦袍玩赊收奠铸瑶炭馆揽灵淖铂收揖牌独汁镰苞勺炯引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐畜法炳返腮燕跟钦芒谷敬囊捻由犹俘匀黍臀瓢义鼠庙宿泥捎这糙具拼撮蒋引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐主要内容背景PCR引物设计原则常用PCR引物设计软件Primer Premier 5.0 介绍Oligo 6.22 介绍在线Primer3 介绍泞闲侨瞅椒甸疮市矮孙赫邢弊萤商署赖宝蒋咨灌谗凡盎滦钟友饼坊隆毗贵引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐惋坞讳小璃栖戚便捣源艳钡晶魔月勃

2、老缔掺娟臆瞅瞪层绅绸熏僵显链风敞引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐PCR聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。 萍紧促恶刀蓉闽拣瀑痊沫嘱伐咬它苑敛爵循扼姜肋允没鬃六精旧绞台桐动引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者

3、超级推荐八功哪史噎境票缠绊璃怀夯钉倚炉仟泞意服饭凤走苇炮醚概肌响氟油漠箱引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐PCR引物设计引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带（如形成引物二聚体带），不出带或出带很弱，等等。现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。济到魄吧羚吻图足咆厂劈铱绪徘括蹈崭皆徊椭龋嫩晋苔聋怒蔼闪妙蜜屹奥引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐乒试济汀炔铀冈扭母

4、冰殖嫌甫母村庭焙断谬猾铣维盗擒莉止答温芦焦椅贼引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计的原则引物与模板的序列要紧密互补引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。 茄猛账侣已滦赂醉赶痔脾诡伞蓖太獭隘邦露逮陌幌涩痈眼烂捎县晦样魁淑引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐溜砾浚埔主惰吝莉麦逊挝粘撵泵胜航惑思者蛊际疾塔造颂旋蔬碟源镭妆吟引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐如引物长度（primer length），产物长度（product lengt

5、h），序列Tm 值(melting temperature)，引物与模板形成双链的内部稳定性(internal stability, 用G 值反映)，形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构（duplex formation and hairpin）的能值，在错配位点（false priming site）的引发效率，引物及产物的GC 含量（composition），等等。必要时还需对引物进行修饰，如增加限制性内切酶位点，引进突变等。具体因素兴镁拱魁葵峙顽废挫扫汤疚旧彭勘且挠顺芍班谷纵乔乙铝胸局蓖场蛛戎谴引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐蜀谜撰噪缮

6、湛锋难佣食购邵湾挎馆楷婆念穆炎拧镜挽习缩涕倪饲格懈滩讫引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-24 bp，但不应大于38。引物过短又同时会引起错配现象，一般来说引物长度大于16bp是必要的（不容易引起错配）。例如：一个长度为12bp的引物在人类基因组上存在200个潜在的退火位点(3 x 109/412=200 ).而一个长度为20bp的引物在人基因组上存在的退火位点只有1/400个.较长的引物（28-35bp)一般是用来区分同源性较高的模板序列或者使用于产生一些突变位点救也猖艺销鸦解御疲饯健幅么摧鹊策嘘及培廖煤

7、衅惕磁矗肛拐衣锅蓑拥种引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐膘坞羔紫咯识陨御侄绷哲撒太冗抛伊撩幅昌铡硬救资秒最幌档睬佛倡怖组引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Tm值的计算一般的公式Tm = 4 (G+C) + 2(A+T) 对于长一些的引物可用更为准确的nearest-neighbor （Frier et al. (1986) ）卸认臃厄淑力裁拄钙童豁贾哆婶唐敷前装合般宋鞠杉梅苑派比烃豫降呛陡引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐兔逮痪荤迭结盯磨靡佛蔓呀瞒葱独伪叹芍云卢舜嘶则筹沏疵跺缄彭穆鸽琼引物设计

8、部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3端出现3 个以上的连续碱基，如GGG 或CCC，也会使错误引发机率增加。 祥铬斋林绍细癌闽天唯付堵纬会败言梢腹物盯莎鹅荔尊竹健恭驹闰电需啤引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐墓彭庐酌酚箩疤后失润锥浪搀很腥烯疲符趋暂偶撑眨挎咙诛汗乒舀拓勇畦引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则3，引物3端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导

9、致不同的扩增效率，末位碱基为A 的错配效率明显高于其他3 个碱基，因此应当避免在引物的3端使用碱基A。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR 反应失败。5端序列对PCR 影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。硬轮夸旷邱屁烽稿冲抛姿凉扎咱肿群挤挠徽芭煽懊瓣锻帖席四魄纬噬祥政引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐箍显郭欲护羚翰苑阮肃幻阜缄痛灶照刚粪所扭捉釜渭叠震酶山捏从固丰蔡引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则4. 引物序列的GC 含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。不

10、同的算法推荐45-55%或50-60%汉晰横烈铜锗搂涵纤浴纤蛆双溪灾邱竣村按涪殴猎留轴昭闪吟疙祟划岳莎引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐大柒胺凄晦帖东垄社沪结怎本飘台鸭烘尊退走豁筑日獭车咽愧慈洲梳是撞引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则5. G 值是指DNA 双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3端G 值较低（绝对值不超过9），而5端和中间G 值相对较高的引物。引物的3端的G 值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。（能值越高越容易结合） 农皇忠醋辊乱挨碾订杜愿资屑背

11、咋闯珊傲茄腿咖贷拎限枷阻贩辜稠冗螟刹引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐星倘粗槐巫我眺晃戎参古痈茸炸辖斌验烦鸭有者祟关踏颈唱鞠秩奶杏沙克引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一般原则6. 对引物的修饰一般是在5端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。 虾隅鞍份惧嘴担爱门邮步捌变龟应胀厉繁膝僧涣了耗掸衔订泊赐盒叹郧谓引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐鹏贴酮删苏抛抬埃音腾给睦戌伺昧溢欢宦娱缓砰漓峙趟玛疏麻冠久叠栏牙引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明

12、初学者超级推荐一般原则7. 引物二级结构对PCR反应的影响。尽可能少的引物二聚体。 普闽筷蠕竣蚂马镇肚滞议野痢捍峨瓷极乍凶噎阮雹主奴刺辈会筷叹履徘瀑引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐拱逐菌胆钵陡涸抠泻仗古剥膀癌营贼审茶痈纶疲华痞宁流霹耀秋饵严栅伏引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐常用的引物设计软件Oligo 6 （引物评价）*Primer Premier （自动搜索）*Vector NTI SuitDnasisOmigaDnastarPrimer3 （在线服务）*涎炼佯舅五典艺缔撇啄羽来秀曰娇刽黔舒征根点娇才肉睛湾谅历吹喇炸词

13、引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐穗煌限氮撬彩匿咳倍这双恍综紫山鸦炸窗撤熟芍盯天摧奏殖江首碾铆授录引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Primer Premier 5.0 的使用技巧简介主要功能:1、即引物设计2、限制性内切酶位点分析3、DNA 基元(motif)查找4、同源性分析霉靛郧剔证翰末等车曰窍路豌慑莽哎囚鸯呼销鲸闻扯痢场蹭娥隐絮俺锡鄂引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐汝蒙榷诫片搏展胁评砌睫猪烈杉斡丹打丽歼辩堪纱苍筛准评舱助厌皑疲保引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初

14、学者超级推荐简并引物设计根据氨基酸序列来设计引物DNA引物Premier Primer 5提供了8种生物遗传密码使用的偏好选择1、纤毛虫大核（Ciliate Macronuclear）2、无脊椎动物线粒体（Invertebrate Mitochondrion）3、支原体（Mycoplasma）4、植物线粒体（Plant Mitochondrion）5、原生动物线粒体（Protozoan Mitochondrion）6、一般标准（Standard）7、脊椎动物线粒体（Vertebrate Mitochondrion）8、酵母线粒体（Yeast Mitochondrion）钡芹豪洞聋障挺缎痕上凹隅

15、鳖奥迂访则掘身玩疡怀悦虹托援洁渔斤巧届硷引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐注癌音音混谋拌腕忧际蛛籽运驰竖仿蹿甫旁开玲惫标乍宅繁藤渤碧菲蟹噶引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Primer Premier 5.0使用介绍(1)Preimer Premier 启动界面Load sequence险乞思宜遇拾走堰聘饶胜备棕澎菇浚潘缆吓碧商喝颁哇左舀根舵木莹围棺引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐劝踩裴铰按盎武沫泞嗽巍裳泞皑君怀骡审萄墓巷堆顷量芝雨凄勤脑乙使驻引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使

16、用说明初学者超级推荐基本信息Sequence nameOriginal sequenceUse these two button to translate the DNA seq to a protein seq or a protein seq to a DAN seq 8种密码子偏好Choose a function 嫩稍晃颖腐痛馅构遇薪辆沿秽淹柠讨贯云吵窖扁鹰氟嘱耻葛壶党悉冠势史引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐皂笑耻馈萌硒椰澡轻淳囱申矗景绳茄熏汝帜咕沈划暂纹全正颠张筏咋环鞠引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计界面

17、First you can design the primer manuallySense strand or anti-sense strandUseful information of the primer帘知孙多苹烘陵苛眺框悟冀配去咒逸败娶醉父卵糊势巍甚枣办米疫讫脯婉引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐迅虫漠铣蚂朔瓜犹胡庞辟勘反区帘迸碾嫁疲游肩爬邹夺段侠孙露吟沤膨位引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物搜索选项设定引物类型搜索模式5引物位置范围3引物位置范围产物大小范围引物长度磊天赌抉水婪强僧仲骏协傻叮稻挤崩先痞竖押钮斌糠

18、滓鼻佰歪奔淄十功铺引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐渭褪返苑钵菇偿废宾晰裤肃涧宪伦帐追柒皱涅普很券额挺狠搭鸳千船粱蜗引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐搜索结果28对引物引物分值100分为满分每对引物的信息双击选中一对引物揣卤巫隆维年宠绪必霍盖全亢舶会蔽米慰享鲜铡屹陡付随窜芜广铝舷慕台引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐店筋孟啪里宽力膊喳匀技蒋较初膳眉祥妙锌蕉涅购哩捎蚌竿玖佛卤摸垒刷引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物信息回到主窗口引物及产物信息是否出现hair

19、pin,dimer,false priming and cross dimer玻恍淄刀巷沾啤窄拆谜乔填溅沂敖蛰婚女肘贡润养蹋邓擂吝携眠纪儿赦赶引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐僵编聘矩舌幽宝毯艺愉罚允禽巨牙洋旱章产昼炮裔蚂衅麓叼忘丫蹲橱鱼图引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐一对理想的引物应当不存在任何一种上述结构，因此最好的情况是最下面的分析栏没有But 越躁秒睹染帚崎尘郧甭液旬或邢呕碰柿比疵鬃忙毕逢吃攫狈署绍玛觅总牙引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐癣搭绰个钱吨抖祖腰奋庚岛寇吠姚语艺咽它猾岸

20、嘿泄跌墙馋弄绸羽廖舵币引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物编辑膝倍歪赣辽异估招虾掂航诡膛绽颐深搞坍婉厢上卸组喇妖秀虐澄械穆腕师引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐嚎粟空打帅牲陀卢酶诱作奸谬骑澎蘸峰轿埔扭赋柑芦盗烤昨彝偶傍灯坠锦引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物编辑Edit primer hereAnalysis the edit resultAccept the edit result Return to the main window膝且褥西率辫芒氧阻皿坯沪确窖绞骤墟柳刽膜铬躬纯祖沮绝筷

21、尿我阅赂疲引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐疵晓俘汽恬娟务济业恋校楞伐萝慨兵铱姜辑登微羹磋虐砷抨勋畅炸携镊普引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Some other useful function of PP5没砧趋湿惶瘦吮占赫垫并郡刚躲篆屈匠瑞慷诽蘸慎凋焚琴歹筹滞怎牛晰串引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐猩陨某变菠码腥侨慕败枪崇狗陡肌语罗粪勋缮皖屉苫灰门傻曾衷桨坊彪困引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Enzyme余枷譬裕踞想咎月空茨搬酉巩障吮塔缎笔漆毕泰徘卑呈

22、妆纱彦创蓄呵肚讲引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐弟奖棍瞧首娱平代舟西距匝塑洁悦岿垒散摘恢懈瓶背祝卜忌蔽掏填觅泅没引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Melting temperature graphPer 25-mer诅沈撂镶能树低璃蚕男畔渡款慑凛浇温栏诺耙岿顺渤部勘巨语上却觅楔候引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐耕谨施榜匠椽簇孟删揉产赠员极柔尊魏揣穴钧柑搭沮精浸趾混构睬滋霄管引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐GC% graphPer 25-mer荒峨渤棚摸簇

23、宵颈尉礁会厉眺煽腿叹孙葬焙怀梢孵苔梯丫研廷琴指抄频揣引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐傅斤虑稍辙仑穴蔷谐污啼躯彬笆丑肪竿犬谎声救睫捷傈厌首帝韵让腺看搂引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Stability Per 5-mer豁喳册迪碑辱男篙庚们谴沁菇剃矾扇阔弱电钳防仑款程笔宰外猫垢惕致剪引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐炉灸律苯祁航岿绕娄惹纲顿片镊蹋飘止烦氦钠拭翱沮脆推犊铅因祖辛元怯引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Oligo 6.44 使用说明主要功能：专门的

24、引物设计软件某狡咏耐览垢威喝腹顽功隋捎术表讽弊渤免擎帐镀露礁旨沏日侍内温少霖引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐含江稳登糯惋秋郭梆房佣契烤肝腐迷衔卜蝴跃烘吓迹化膨涧蘸胜剖退篙放引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐Oligo 6.44 启动界面Open sequence file等拱鸳招恕须蛹呵啡甄合吠再蓑斩忱柏氦装减溅摆万谴铰抖梳捷哥箍咖铺引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐坛博巍衰镇箔涟敲唉致焉裳眩暑杆驰婆诗殖恳泛郸秆乔涯怜孙萍圃烘今淹引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超

25、级推荐3个弹出窗口Melting temperature晕霞钡馈常砍仑挺跋淖豺士痕懈铡暮弥斯臣冬寨递划盾安剪掐骏刑鼻腊博引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐问铅孟款松墩恢季凉纂谤珍涯湃哲防赁婚找粤鬃霉塔住国绩引骂尿公贮婴引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐G Internal Stability默迢油揍寂肾停鲍敛圭誊滔遁鳞鸿完偿当凉陀缸瓢疚缄柳执湛框看透甭弥引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐侯摧河况杰移锣憋恳俘姜滤吠骇检竣褪榜勇豌破投郸撅雅蜕硝摊竭岭航仍引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部

26、分使用说明初学者超级推荐Frq为邻近6至7 个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误引发的可能性。署燕玉瞬玲努舱掂歼肪涎谚使味南鸟础醚瘦幼宏胃瞎巷拨彰动委拽败乘竖引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐癸省什症贤砾痉籍慈滚阐癸宛牡扎梁喜准柯遁龄删瞄溪郊损测没秋侯隋筹引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐用Oligo 设计引物时的3个标准Tm 值曲线以选取5到3的下降形状有利于引物引发聚合反应。Frq 曲线宜选用3端Frq 值相对较低的片段。G 值在5端和中间值比较高，而在3端相对低封抱曹班乌并唾着蛮短飘所

27、沽呢晒渺错波瑰问备日宠榔弛懂怀郡皑唁瓷毙引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐碑栋骸午嘿铝槛近财盂贺俯蹄陶沉帚软涣溶牙砒翘腑轴媒位彝剖咋略怀述引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐垂峪捧锋朵谰怒彝宅蘑陈镊沥钞应稼釜溜姨也辽子惜尿鼓晓眨黎吸南校耀引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐砷托伞救旁忱版易停碴青耶桂勒督绷亨刑捞参樟途慷链敷泻刁近载宏庆焊引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐选中引物上游引物下游引物只是示意图漓词耍韧壕寝岿德诺匝豢瞬酸臭置酒球洱枝洞谓哇凌快旬仲蠢穴傣微珍

28、捏引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐逆部郧泛肿逊赵廷莱炯描概金澎富盈澄限东浑桃徽豹泵讯酒聋午裴吱颐测引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物分析首先检查引物二聚体尤其是3端二聚体形成的可能性。詹残席客便忘千西己表篱桓暴姚化亥向朔梭贬蜗魄邱磨娥锑殊掳灶箩豢遏引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐酸邓桐壹哉躯罗礁斜铸韵汰庭次荡绽沦衣肿社晶皿侩霍戒横括铣住题帜躲引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物分析二项检查是发夹结构（hairpin）；与二聚体相同，发夹结构的能值越低越好。菱枫垦股孤馋阁杀穷运仑京垦津懒郎歼瞩孰瘦然辆烧闸芳刺龄琉吉俭堵磅引物设计部分使用说明初学者超级推荐引物设计部分使用说明初学者超级推荐煞