《植物生理生化》实验指导

1、之阿布丰王创作时间：二 O二一年七月二十九日植物生理生化实验指导（适用专业：农学类相关专业）黑龙江八一农垦年夜学植物科技学院生理生化教研室目录生物化学实验部份: TOC o 1-5 h z 实验一、氨基酸的纸层析 1实验二、卵白质含量测定（设计性实验） 5 HYPERLINK l bookmark6 o Current Document 实验三、酶的基赋性质 7实验四、维生素C含量的测定 HYPERLINK l bookmark8 o Current Document 12实验五、还原糖和总糖的测定 HYPERLINK l bookmark10 o Current Document 14实验六

2、、淀粉酶活性的测定17实验七、脂肪浸提一一索氏脂肪浸提法 HYPERLINK l bookmark14 o Current Document 20实验八、一种简单实用的提取植物 DNA勺方法22实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定年夜麦、小麦种子纯度24实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实 TOC o 1-5 h z 验 ）26植物生理学实验部份： HYPERLINK l bookmark18 o Current Document 实验一、植物组织水势的测定（小液流法） 28实验二、植物伤流量的测定30实验三、根系活力的测定 TOC o 1-5 h z 31实验四、蒸腾强度的测定 HYPER

3、LINK l bookmark21 o Current Document 35实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验 ）37实验六、光合强度的测定（改良半叶法）3 9实验七、呼吸强度的测定 41实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法）43 实验九、植物缺水水平的测定（脯氨酸法）45生物化学实验部份实验一氨基酸的纸层析一、目的：层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析 . 其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质；设备简单 ，把 持容易，样品用量很少，结果也较明确.本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和把持技术.二、原理：纸层析法

4、是以滤纸作为支持物的分配层析法.分配层析法是利用物质在两种 分歧混合溶剂中的分配系数分歧，而达到分离的目的.通经常使用a暗示分配系 数.在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数.溶质在静止相的浓度（CJ 溶质在流动相的浓度（C）层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的.由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力 （纸上有很多-OH基与水以氢键相连）,吸附很多水分子，一般达滤纸重的22%生 右（其中约有6%勺水与纤维素结合成复合物），因此使这一部份水扩散作用降低 形成静止相；而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱 ，可以在滤纸的毛细管中自由流动 便形成流动相.层析时，将滤纸一端浸入层析溶剂中，有机溶剂连续不

5、竭地通过点 有样品的原点处，使其中的溶质依据自己的分配系数在两相间进行分配.分配的过程：一部份溶质随有机相移动离开原点而进入无溶质区，并进行重新分配，即一部份溶质从有机相又进入水相.随着有机相不竭向前移动，溶质不竭地在两相 间进行可逆的分配，不竭向前移动.各种物质因其分配系数的分歧，在两相间分配 的数量也就分歧，分配系数小的溶质在流动相中分配的数量多，向前移动的速度 快；而分配系数年夜的溶质在静止相中分配的数量多，移动的速度慢.所以各种溶质在层析的过程中由于移动的速度分歧即可以彼此分开.移动速度一般用移动速率暗示Rf暗示：原点到层析点中心的距离f 原点到溶剂前沿的距离各种化合物在恒定条件下,

6、经层析后都有其一定的 Rf 值 , 也就是说在层析谱中有一定的位置. 借此可以达到分离、定性、鉴另外目的 .Rf 值决定于很多的因素 , 其中最主要的是所分离物质的分配系数. 物质的分配系数是由以下因素决定的：（ 1）物质极性的年夜小 . 水的极性很强 , 一般极性强的物质就容易进入水相 , 非极性的物质易进入有机溶剂中.例如侧链含-O即口-NT、-COO较多的氨基酸分 配在水相中，Rf值较小，而含非极性（如-CH）较多的物质其分子的极性降低，Rf 值增年夜 .（ 2）滤纸的质地以及为水分饱和的水平. 滤纸的质地必需均一、纯洁、厚薄适当 , 具有一定的机械强度, 层析前应为水和有机溶剂的蒸汽所

7、饱和 .（3）溶剂的纯度、pHfi和含水量.pH值和含水量的改变可使氨基酸和层析 TOC o 1-5 h z 溶剂极性改变,Rf 值也随之改变.（ 4）层析的温度和时间. 温度改变使溶剂中有机相含水量改变,Rf 值也改变 .当所有条件相同时，层析时间短，测Rf值的因素必需严格控制.三、实验资料、仪器和试剂：1、实验资料：在25温箱中萌发2-3天的绿芽菜.2、仪器：（1）恒温水浴一台；（2）烘箱一个；（3）研钵一个；（4）三角瓶一个；（ 5）蒸发皿一个；（ 6 ） 50毫升分液漏斗一个；（ 7 ）量筒三个；（ 8）微量吸管（或标有刻度的毛细管）；（9）电热吹风机一个；（10）层析缸及培养皿；（

8、11）层析滤纸；（12）小型喷雾器一个；（13）剪刀、刀片、铅笔、尺子、玻棒、凡士林、点样瓶.3、试剂：（1）氨基酸标准溶液：浓度为0.01M,溶于10好丙醇中.第一组：天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸.第二组：鸟氨酸、甘氨酸、y -氨基丁酸、缴氨酸.第三组：谷氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、脯氨酸.第四组：酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、谷氨酰胺.第五组：胱氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、瓜氨酸、天门冬酰胺.（ 2）溶液系统：第一向：正丁醇：甲酸：水：（ 15： 3： 2, 体积） , 摇匀静止备用 .第二向：苯酚：水（ 80： 20, 重量） . 配制方法：在分液漏斗中先计量加入少量

9、无离子水, 再加入一定量的新蒸馏的酚. 根据酚量补足应加入的全部无离子水 , 这样可防止因酚的冷凝而造成的溶解困难 . 充沛摇匀后静止备用 . TOC o 1-5 h z 离子水：用于实验中各种试剂配制.10%异丙醇：用于配制氨基酸标准液.80%乙醇：取分析乙醇以无离子水稀释.0.25%的水合茚三酮溶液.7）活性炭.8）石英砂.四、把持步伐：1、氨基酸的提取：取新鲜的绿芽菜下胚轴2克, 加80%乙醇10毫升,加少量石英砂, 在研钵研成匀浆,移入三角瓶, 用少量80%乙醇淋洗研钵, 一并移入三角瓶, 加0.8克活性炭 , 置沸水浴中加热至沸 1分钟 , 取下冷却 , 用滤纸过滤, 用少量80%乙

10、醇冲刷滤渣. 滤液收集在蒸发皿中置50-60水浴上蒸干 . 用1毫升10%异丙醇溶解, 收集样液 , 准备点样.2、滤纸的准备：单向层析滤纸：取28 X 28厘米层析滤纸一张,在对应的两边距每边2厘米处，用铅笔和直尺各划一条平行于纸边的直线, 其中一条为溶剂前沿达到标识表记标帜, 另一条为点样线. 在点样线上每隔2厘米划一与点样线垂直的短线,标出五组标准氨基酸和样品的点样位置双向层析滤纸：取28 X 28厘米层析滤纸二张,在距每边2厘米处各划一条平行于纸边的直线, 以“井”字格下边缘直线左端交点为点样原点 , 原点右手为第一向 , 另一垂直方向为第二向 . 用一张作标准氨基酸图谱, 另一张作样

11、品图谱.3、点样：点样时选用微量吸管或标有刻度的毛细管（每小格1 微升） , 分别在每个点样处精确点样4微升. 必需在每一滴样品干后再点第二滴. 为使样品加速干燥, 可在有加热装置的点样台上进行, 或用吹风机吹干, 样点的直径以 2-3 毫米为宜 , 点样时温度不能过高 , 否则会破毁氨基酸 . 将点好样品的单向和双向层析滤纸均卷成筒形 , 在上、中、下三处系三道线, 但滤纸两边缘不能接触. 为了消除盐酸的干扰 , 防止拖尾现象, 可将层析滤纸放入盛有浓氨水的层析缸中熏10分钟, 取出后在45烘箱中将氨驱净, 再行层析 .4、层析：本试验采纳上层析法 .（ 1）单向层析：取适当年夜小的层析缸一

12、个, 缸底放一培养皿, 向培养皿内加入第一向溶剂 ,液层厚约 1.5厘米 , 在培养皿上横放两根玻棒,取已点好的样品的单向层析滤纸以点样端朝下放在盛有层析溶剂的层析缸内的玻棒上 , 盖上盖子（滤纸切勿与溶剂接触） . 平衡一小时, 然后将滤纸放入层析溶剂中 , 注意样点不能进入溶剂 , 以免浸脱 . 将层析缸密封, 这时溶剂沿纸上升, 待溶剂前沿达到标识表记标帜线时, 立即取出 , 用吹风机吹干或45下烘干, 然后显色 .（ 2）双向层析：按上述单向层析方法, 将点好标准氨基酸的样品的双向层析滤纸分别用第一向溶剂进行上行层析, 达到前沿标识表记标帜线时, 立即取出吹干溶剂, 减去溶剂前沿以外的

13、部份, 然后将纸转90角 , 以同样的方法用第二向溶剂进行上行层析, 当溶剂前沿达到标识表记标帜时立即取出吹干或45下烘干,进行显色.5、显色：用喷雾器将0.25% 的茚三酮显色剂均匀喷在层析滤纸上, 注意不要喷得过多 .用吹风机吹干溶剂后 , 放在 60-65烘箱中烘30分钟或用吹风机吹热风, 即能显现各种氨基酸的色斑. 为了消除铵离子的影响 , 可在展开后在滤纸上喷1%的氢氧化钾的无水乙醇溶液, 在60下坚持15分钟, 以使全部氨完全挥发失落, 再行显色 .五、结果与计算：单向层析：显色完毕后, 用铅笔将各色谱的轮廓和中心点描绘出来, 然后量出由原点至色谱中心点和溶剂前沿的距离，计算出各种

14、已知和未知的色谱的Rf值 进行比力和鉴定. 各组已知氨基酸色谱顺序由指导教师供给.双向层析：Rf值有两个数值组成，即要在第一向和第二向层析中各计算一次, 根据Rf并借助各种氨基酸的特有颜色，分别与标准氨基酸比较，即可鉴定为何种 氨基酸 .六、附注：色素含量不高的植物样品 , 可不用活性炭处置.实验二 卵白质含量测定（设计性实验）一、实验目的我们将逐步改变实验教学都由实验技术人员准备实验, 教师讲解 , 学生照做的方法 , 尽量多给学生留下思考的时间和立异的机会. 在教师指导下, 查文献、拟定实验方案、调试仪器、配制药品、处置数据、研究和解决实验中呈现的问题 ,从失败中获得经验, 从胜利中获得动

15、力 .卵白质含量是农产物品质的重要指标之一, 年夜豆、水稻等农作物是农业院校学生学习研究的最重要的生物资料. 农作物品种及各个发育时期或分歧栽培条件下的生理生化指标反映了其品种特性和生长的变动规律, 掌握这些生理生化指标测定的方法对学生今后的科研实践是非常需要的 . 在以往的实验中 , 我们没有开设这样的实验设计项目 , 使学生对生物化学实验技术在农业研究方向的重要位置认识不够. 所以为了将基础知识与专业技术更好地衔接, 使学生将生化基本实验技能应用于农学专业的科研、管理, 很有需要开设此项实验.本实验通过比力分歧年夜豆 （或水稻等 ） 品种或同一品种各个发育时期或分歧栽培条件下的籽粒卵白质含

16、量变动 , 来掌握测定原理, 学习测定方法, 并通过分析得出相应结论. 提高学生对生物化学实验技术在农业研究方向的重要位置的认识；使学生将生化基本实验技能应用于农学专业的未来科研工作中 .二、实验室具备的仪器设备及化学试剂等方面的条件仪器：电子天平、过滤装置、移液管、滴定装置、可见分光光度计、紫外分光光度计、离心机、水浴锅、温度计、烘箱、真空抽气机、粉碎机、电炉子、实验室经常使用玻璃器皿；试剂：惯例化学、生物化学试验的试剂均有, 如有特殊要求请说明；实验资料：年夜豆粉、小麦、玉米等.三、整体要求要求学生认真查文献、拟定实验方案、调试仪器、配制药品、处置数据、尽量自力解决实验中呈现的问题 , 需

17、要时与老师商量解决, 以达到熬炼提高的目的 .书写陈说要认真、条理清楚、整洁、对结果有客观分析 .最后要有总结（自我评价），包括自力完成实验的收获、教训、注意事 项、实验过程中遇到的问题及解决的方法等.实验三酶的基赋性质酶是生物体中具有催化功能的卵白质，因此，也叫生物催化剂.生物体内存在 多种多样的酶，从而使生物体在温和的条件下能够迅速完成复杂的代谢过程 .所 以了解酶的基赋性质，对揭示各种生化进程具有非常重要的意义.酶的高效性一、目的：通过本实验认识酶的催化效率比一般催化剂高.二、原理：酶作为一种特殊的催化剂，能年夜年夜降低反应的活化能，从而极年夜地加 快了反应速度.这在生理上具有极其重要的

18、意义.在生物体内，某些代谢由于需氧 脱氢的结果而发生对机体有迫害作用的 HQ.过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地 分解成隆5口 Q,使H2O不致在体内年夜量积累.铁粉也是过氧化氢分解的催化剂 但其催化效率仅为过氧化氢酶的100亿分之一.三、实验资料、仪器和试剂：.实验资料：马铃薯.仪器：（1）试管：4支；（2）管架：1个；（3）研钵；（4）量筒：10 毫升X 1.试剂：（1）2%（2）铁粉四、把持步伐吕勺项目12342%12G ( ml)3333生马铃署糜熟马铃署糜铁粉现象解释现象取4支试管,编号，按上表把持.酶的特异性(专一性)一、目的. 了解酶的特异性.掌握检查酶的特异性的方法及其原理.二、原

19、理：酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异性，即一种酶只能对 一种或一类化合物起催化作用.例如：蔗糖酶只能催化蔗糖的水解，而不能催化 淀粉的水解；而淀粉酶能催化淀粉水解，却不能催化蔗糖水解.本实验以蔗糖酶 和淀粉酶对蔗糖和淀粉的作用为例来说明酶的特异性 .三、仪器和试剂：.仪器：(1)研钵；(2)试管：6支；(3)试管架；(4)小烧杯；(5)刻度吸 管：1毫升X5,2毫升X1 ; (6)漏斗；(7)电热恒温水浴.试剂：1%淀粉溶液(含0.3%NaCD :将1克可溶性淀粉及0.3克氯化钠，混悬 于5毫升蒸储水中，搅动后缓慢倒入沸腾的60毫升蒸储水中，搅动煮沸1分钟.晾至 室温后加水至1

20、00毫升，放置于冰箱贮存.2%蔗糖溶液：蔗糖是典范的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超越 一定标准，则呈还原性，这种蔗糖不能使用.所以，实验前必需进行检查.本实验用 的蔗糖至少应是分析纯的试剂，要现用现配.(3)淀粉酶液：稀释200倍的新鲜唾液.(4)蔗糖酶液：取1克新鲜酵母放入研钵中，加少量石英砂和蒸储水，研磨 10分钟左右，用蒸储水稀释至50毫升，静止片刻再过滤，滤液即为蔗糖酶提取液.(5)本乃狄(Benedict )试剂：将17.3克硫酸铜溶解于100毫升蒸储水中. 冷却后稀释至150毫升.取柠檬酸钠173克及碳酸钠(Na2c0r H2O) 100克，加水 600毫升，加热使之溶解，冷却

21、后，稀释至850毫升.最后把硫酸铜溶液缓缓倾入柠 檬酸钠一碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤.此试剂可长期保管.四、把持步伐:取6支试管编号，按下表把持:号 把持:i讣、1234561粉（ml）1112项糖(ml)111淀粉酶液 TOC o 1-5 h z 11(ml)蔗糖酶液11(ml)蒸储水(ml)11反应摇匀，放入37c水浴中保温10分钟木乃狄试剂 222222(ml)反应摇匀，放入沸水加热数分钟结果解释实验现象温度对酶活力的影响、目的:通过检验分歧温度下淀粉酶的活性 确酶的最适温度的概念.二、原理：，了解温度对酶活性的影响，并进一步明酶的催化作用受温度的影响很年夜.在一定温度范围

22、内，随着温度的升高，酶 的热变性不显著，而酶促反应速度增加，直至达到最年夜值.由于酶是一种卵白质 温渡过高会引起酶的急剧变性，招致酶失活，因此，反应速度达到最年夜值以后， 随着温度的升高，反应速度急剧下降，以至完全停止酶促反应.反应速度达到最年 夜值时的温度称为酶作用的最适温度.年夜大都植物酶的最适温度为3740C ,植 物酶的最适温度为5060C .本实验以分歧温度条件下淀粉酶作用于淀粉，并用碘液检查酶促淀粉水解水 平，来说明温度与酶活力的关系.三、仪器和试剂:1; （2）试管：3支；（3）.仪器：（1）刻度吸管：1毫升X2,2毫升X试管架；（4）恒温水浴：3个；（5）冰浴.试剂：1崛粉溶7

23、取（含0.3%NaCD :配法如前.pH7.0磷酸盐缓冲液：配法同前.（3）碘液四、把持步伐:冷却70 c70 c31211解释实验现象.酶的激活和抑制、目的:了解酶促反应的激活和抑制作用；学习激活剂和抑制剂影响酶促反应的方 法和原理.、原理:酶的活力常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为激活剂;有些物质能使酶的活性降低，称为抑制剂.值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝 对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂.例如，氯化纳达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活力 三、仪器和试剂:1.仪器:（1）试管：3支；（2）试管架；（3）漏斗；（4）烧杯；（5）刻

24、度吸管：1毫升X4,5毫升X1; （6）恒温水浴；（7） 10毫升X 1四、把持步伐:1%NaC l（ml）蒸储水（ml）1%CuSO （ml）唾液淀粉酶（ml）0.1 %淀粉（ml）取3支试管，按下表把持 TOC o 1-5 h z 121 111将上述各管试剂混匀33摇匀后放入37c水浴中彳温反应1分钟左右，从1号试 保温反应检验淀粉水管取出1滴溶液置白瓷板上，用碘液检查淀粉的水解水 解水平平,待试液不再变色时，取出所有试管.现象解释现象实验四维生素若量的测定、目的:维生素佻人类营养中最重要维生素之一，缺乏时会发生坏血病.水果、蔬菜 是供给人类维生素C的主要来源.通过对维生素C含量的测定，

25、可以了解果品质量 的高低，并掌握这一测定方法.二、原理：利用染料2,6-二氯酚靛酚作氧化剂，可将还原态的维生素CM化成脱氢维生 素C,而染料自己被还原成无色的衍生物.2,6-二氯酚淀粉在酸性条件下呈红色 在滴定终点之前，淌下的2,6-二氯酚淀粉立即被还原成无色.当溶液从无色转酿 成为红色时，即为滴定终点.三、实验资料、仪器和试剂:1、实验资料：水果或蔬菜.2、仪器：(1)微量滴定管；500毫升X 1; (2)量瓶：50毫升X 2; (3) 三角瓶；500毫升X 2; (4)研钵；(5)量筒；(6)刻度吸管；10毫升X 2;3、试剂：1%鼻酸：秤取5.0克草酸溶于少量蒸储水中，定容至500毫升.

26、2噂酸：秤取10.0克草酸溶于少量蒸储水中，定容至500毫升.0.001N 2,6-二氯酚靛酚钠溶液：称取干燥的 2,6-二氯酚靛酚钠60毫 克，放入200毫升量瓶中，加热蒸储水中100-150毫升，滴加0.01N NaOH4-5g,强烈 摇动10分钟冷却后加水至刻度.摇匀后用紧密滤纸滤于棕色瓶中，贮于冰箱中备 用，有效期一周.使用前需标定(见附注).四、把持步伐:1、样品的处置和提取：称取4.0克新鲜样品，至研钵中，力口5毫升2噂酸,研成匀浆.通过漏斗将样品 提取液转移到50毫升量瓶中.残渣再用2%T酸提取2-3次,提取液及残渣一并转入 量瓶.2%草酸总、量为35毫升，最后以水定容.溶液定容

27、时若泡沫较多，可加几滴乙 醇消除泡沫后再定容.摇匀，过滤，滤液备用.2、样品的测定：吸取滤液10毫升，放入50毫升三角瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定 至呈现明显的红色，并在15秒内不用失为止.记录所用滴定液体积.3、空白测定：在另一 50毫升三角瓶内，放入35毫升2噂酸,并用1噂酸定溶，摇匀，取此液 10毫升放入另一 50毫升三角瓶内，用2,6-二氯酚靛酚钠滴定至终点，记录染料用 量.结果与计算：V1V2K VW V3100X: 100克样品所含维生素Ct克数(毫克/100克)W称取样品重(克)1:滴定样品所用染料毫升数2:滴定空白所用染料毫升数:样品提取液稀释之总体积（即50毫升）

28、K: 1毫升染料液所能氧化维生素C之毫克数，可由标定算出 六、附注：2,6-二氯酚靛酚钠溶液的标定：准确称取维生素 C2di克，用1%茸酸溶 解定容至200毫升.吸取此液10毫升，以1%叶酸再次稀释定容至200毫升.吸取此液 10毫升，放入50毫升三角瓶中（同时吸取10毫升1%口酸于另一个50毫升三角瓶中 做空白对比立即用所要标定的2,6-二氯酚靛酚钠滴定至粉红色呈现15秒不用失， 记录所用毫升数，按下式计算Kfi （即1毫升染料所能氧化抗坏血酸的毫克数）.G1010K200200V（式中：G为称取维生素 C的毫克数.V为滴定10毫升标准维生素 C时所用去染料的毫 升数，与滴定空白所用毫升数之

29、差值 ）把持要尽可能快，并防止与铁铜器具接触，以减少维生素。勺氧化.草酸及样品的提取液防止日光直射.当样液自己带色时，测定前于提取液中加2-3毫升二氯乙烷.在滴定过 程中当二氯乙烷由无色变粉红色时，即达终点.实验五还原糖和总糖的测定一、目的：掌握还原糖和总糖定量测定的基来源根基理，学习比色定糖法的基本把持， 熟悉721型分光光度计的使用方法.二、原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖.利用溶解度分歧，可将 植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖完全水解成有还原性的单糖.在碱性条件下，还原糖将3,5-二硝基水杨 酸还原为3-氨基-5-硝基水杨

30、酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它 产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质深浅的水平呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值,核对标准曲线并计算，即可分别求出样 品中还原糖和总糖的含量.多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测定所得的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量三、实验资料、仪器和试剂1、实验资料：面粉.2、仪器：(1) 25ml血糖管或刻度试管X 11; (2)年夜离心管或玻璃漏斗 X2; (3)烧杯：100mlX1； (4)三角瓶：100mlX1； (5)容量瓶：100mIX 3; (6)刻度吸管：1mlX11、2m1X4

31、、10mlX1； 恒温水浴；(8)沸水浴；(9) 离心机(过滤法不用此设备)；(10)电子天平；(11)分光光度计；3、试剂：(1)1mg/m1葡萄糖标准液：准确称取 100 mg分析纯葡萄糖(预先在80 C烘 至衡重)，置于小烧杯中，用少量蒸储水溶解后，定量转移至100ml的容量瓶中，以 蒸储水定容至刻度，摇匀，冰箱中保管备用.(2)3,5-二硝基水杨酸试剂：将 6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2NNaOH溶 液，加到500ml含有185g洒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠， 搅拌溶解.冷却后加蒸储水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用.(3)碘-碘化钾溶液：称

32、取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸储水中.(4)酚丈指示剂：称取0.1g酚幅 溶于250ml 70%乙酉|中.(5)6NHCl(6)6NNaOH四、把持步伐1、制作葡萄糖标准曲线：取7支具有25ml刻度的血糖管或试管，编号，按下表所示的量，精确加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液和 量项目葡萄糖标准溶液(ml)蒸储水(ml)012345600.20.40.60.81.01.22.01.81.61.41.21.00.81.51.51.51.51.51.51.53,5-二硝基水杨酸试剂.3,5-二硝基水杨酸试剂(ml)将各管摇匀，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却 至室

33、温，再以蒸储水定容至25ml刻度处，用橡皮塞塞住管口，倒置混匀(如用年夜试管,则向每管加入21.5ml蒸储水，混匀).在540nms长下,用0号管调零,分别读 取1-6号管的消光值.以消光值为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线.2、样品中还原糖和总糖的测定：(1)样品中还原糖的提取：准确称取2g食用面粉，放在100ml的烧杯中，先以少量的蒸储水调成糊状，然 后加50ml蒸储水，搅匀，置于50。叵温水浴中保温20分钟，使还原糖浸出.离心或 过滤，用20ml蒸储水洗残渣,再离心或过滤，将两次离心的上清液或滤液全部收集 在100ml的容量瓶中，用蒸储水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液.(2

34、)样品中非还原糖的水解和提取：准确称取1 g食用面粉，放在100ml的三角瓶中，加入10 ml 6NHC1及15ml蒸 储水，置于沸水浴中加热水解30分钟.取12滴水解液于白瓷板上，加1滴碘-碘化 钾溶液，检查水解是否完全.如已水解完全，则不显蓝色.待三角瓶中的水解液冷 却后，加入一滴酚吹指示剂，以6NNaOH和至微红，过滤，再用少量蒸储水冲刷三 角瓶及滤纸，将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸储水定容至刻度，混匀.精 确吸取10ml定容过的水解液，移至另一 100ml的容量瓶中，定容，混匀，作为总糖待 测液.(3)显色和比色：取5支25ml刻度的血糖或刻度试管，编号，按下表所示的量，精

35、确加入待测 液和试剂.数量、 管还原糖测定管号总糖测定管号 项目.还原糖待测液(ml)2总糖待测液(ml)0蒸储水(ml)03,5-二硝基水杨酸试剂1.5 (ml)IRm2000011001121.51.51.51.5加完试剂后，其余把持均与葡萄糖标准曲线是相同，测定各管消光值.五、结果与计算:以管、的消光值平均值和管I、n的消光值的平均值 ,分别在标准曲线查出相应的还原糖毫克数.按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量这卅件加/曰、才盾麻告击 加 恻定时取用体积查曲线所得还原糖量克 数4工人=一还原糖（）总糖（）提取液总体积dnno/样品毫克数100%查曲线所得水解后还原糖毫克数稀释倍数0.

36、9 100%样品是克数六、附注:1、用血糖管比年夜试管方便.2、离心比过滤易得精液.3、标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色.实验六淀粉酶活性的测定一、目的：植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解成麦芽糖.淀粉酶几乎存在于所有植物中,其中以禾谷类种子的淀粉酶活性最强.植物中有a -淀粉酶及B -淀粉酶，具活 性因植物的生长发育时期分歧而有所变动.本实验的目的在于掌握分别测定这两 种淀粉酶的方法.二、原理：a -淀粉酶及B -淀粉酶，各有其一定的特性，如B -淀粉酶不耐热，在高温下 易钝化而a -淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下则发生钝化，通常提取液同时有两种淀 粉酶存在，测按时，可根

37、据它们的特性分别加以处置，钝化其中之一，即可测出另 一酶的活性.将提取液加热到70c维持15分钟以钝化B -淀粉酶，即可测定a -淀 粉酶的活性.或者将提取液用pH3.6之醋酸在0 c加以处置，钝化a -淀粉酶的活性, 以测出B -淀粉酶的活性.淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸 试剂测定.由于麦芽糖能将后者还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一 定范围内其颜色的深浅与糖的深度成正比，故可求出麦芽糖的含量，以麦芽糖的毫克数暗示淀粉酶活性的年夜小.三、实验资料仪器及试剂：1、实验资料：萌发的小麦（芽长1厘米左右）2、仪器：（1）小台秤；（2）研钵；（3）容量瓶：100

38、毫升X 1; （4）具 塞刻度试管25毫升X 13; （5）试管：8支；（6）刻度吸管：1毫升X2,2毫升X 2；（ 7）离心机；（8）恒温水浴；（ 9）分光光度计.3、试剂：1%淀粉溶液；0.4 N NaOH；pH5.6的柠檬酸缓冲液：A、称取木?檬酸20.01克，溶解后稀释至1升； B、称取柠檬酸钠29.41克，溶解后稀释至1升.取A?夜13.7毫升与B26.3毫升混匀, 即为pH5.6之缓冲液.3,5-二硝基水杨酸：精确称取3,5-二硝基水杨酸1克溶于20毫升1N 氧化钠中 , 加入50毫升蒸馏水, 再加入30克酒石酸钠, 待溶解后 , 用蒸馏水稀释至100毫升 , 盖紧瓶塞 , 勿使二

39、氧化碳进入.（5）麦芽糖标准液：称取麦芽糖0.100克溶于少量蒸馏水中 ,仔细移入 100毫升容量瓶中 , 用蒸馏水稀释至刻度.四、把持步伐：1、酶液的提取：称取 2克萌发的小麦种子（芽长1 厘米左右） , 至研钵中加一克石英砂, 磨成匀浆倒入25毫升具塞刻度试管中, 用蒸馏水稀释至刻度, 混匀后在室温（ 20）下放置 , 每隔数分钟震荡一次, 放置 15-20分钟 , 离心 , 取上清液备用 .2、a-淀粉酶活性的测定：（ 1）取试管4支 , 注明两支为测定管.（ 2）于每管中各加酶提取液1毫升 , 在 70恒温水浴中（水温度的变动不应超越0.5 C）准确加热15分钟，在此期间B -淀粉酶受

40、热而钝化，取出后迅速在 自来水中冷却 .（3）在试管中各加入1毫升pH5.6柠檬酸缓冲液.（4）向对比管中加入4毫升0.4N氢氧化钠，以钝化酶的活性.（5）将测定管和对比管置40（0.5 ）恒温水浴中保温15分钟 , 再向各管分别加入40下预热的淀粉溶液2 毫升 , 摇匀 , 立即放入40水浴中准确保温5分钟后取出，向各测定管迅速加入4毫升0.4N氢氧化钠，以终止酶的活动，然后准备下步糖的测定.3、 a-淀粉酶及B -淀粉酶总活性的测定:取上述酶液2-6毫升，放入容量瓶中，用蒸储水稀释至100毫升（稀释水平视 酶活性年夜小而定）混合均匀后，取4支试管，各加入稀释之酶液1毫升及1毫升 pH5.6

41、之柠檬酸缓冲液.以下步伐重复a -淀粉酶的第（4）及（5）的把持，同样 准备糖的测定.4、麦芽糖的测定：（1）取25毫升刻度试管7个，编号，分别加入麦芽糖标准液（1毫克/毫升） 0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.0毫升，置沸水浴中准确煮沸5分钟，取出冷却， 用蒸储水稀释至25毫升，用分光光度计在520nmfe长下进行比色，记录消光值,以 消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线.（2）样品的测定：取以上各管中酶作用后的溶液及对比管中的溶液各2毫升，分别放入25毫升具塞刻度试管中，再加入2毫升3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀, 置沸水中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸储水稀释至

42、25毫升，混匀.用分光光度计 在520nms长下进行比色，记录消光值,从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，然 后进行结果计算.五、结果计算:淀粉酶水解活性麦芽糖（毫克）/鲜种（克）5分钟（A-Am品?释总体积 样品重（克）C（）-淀粉酶总活性麦芽糖（毫克）/鲜种（克）5分钟（B 1）/吁释总体积样品重（克）Ca -淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖（在标准曲线上查得值）A a -淀粉酶的对比管中麦芽糖量B（a+B）-淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量（a+B）-淀粉酶的对比管中麦芽糖量比色时所用样品液毫升数实验七脂肪浸提一一索氏脂肪浸提法、目的:学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法.二、原理：用脂肪溶剂将

43、脂肪从样品中浸提出来, 然后将溶剂蒸发除去, 称取瓶中残留 TOC o 1-5 h z 物的重量或称量样品损失的重量, 即可求出样品中粗脂肪的含量.在测定样品含油量时 , 通常采纳沸点低于60的有机溶剂作为脂肪溶剂（ 如乙醚和沸点为30至60的石油醚） 所提取的脂溶性物质为脂类物质的混合物 ,其中含有脂肪、游离脂肪酸、磷脂、酯、固醇、芳香油、某些色素及有机酸等,因此称为粗脂肪.三、实验资料、仪器和试剂：1、实验资料：（ 1）待测植物样品；（2）滤纸筒.2、仪器：（1）兰氏脂肪浸提仪；（2）电热恒温水浴；（3）分析天平.3、试剂：（1）乙醚 .四、把持步伐：1、仪器的装置：将索氏脂肪浸提取仪的冷

44、凝管及脂肪接受瓶的磨砂玻璃接口处用铅笔编号,洗净烘干 . 脂肪接受瓶放入干燥器内冷却后称取空瓶质量, 仍放回干燥器内备用 .将冷凝器用铁驾台卡夹装置在加热用的电热恒温水浴上 , 装牢 . 在冷凝器的进出 水口分别装上橡胶管, 通向冷凝器内蛇型管的短管为进水口 , 通向外层的短管为出水口 .2、样品的称取：取滤纸筒（25力70毫米）截成35毫米的长度，用铅笔编号，两边对称的夹上 一个回形针, 留出一段铁环作挂钩用 . 在分析天平上称取空滤纸筒的重量, 加入经1 毫米筛孔制备的样品 2 3克 , 称准其重量, 再向滤纸筒塞入脱脂棉一小块, 防止样品散失, 将已加入样品的滤纸筒放在一个小烧杯内 ,

45、然后放入90的真空干燥烘箱内烘56 小时 , 取出放入干燥器内冷却备用 .3、脂肪的浸提：将滤纸筒挂在冷凝器内固定在杆下真个钩子上, 再将脂肪瓶加入无水乙醚70毫升 , 套在冷凝器下面的磨口上. 把装好冷凝器的脂肪瓶放在预先调好温度（ 50-60）的电热水浴上. 松开固定杆上的止水夹 , 将滤纸筒浸入乙醚内 , 开放冷凝水阀门 , 注意乙醚煮沸的情况, 要求回流速度适当 , 不成太快 , 以免冷凝不及乙醚在冷凝器上部逸失.滤纸筒内样品经热沸的乙醴浸提 20分钟后，提起滤纸筒把持杆 至最高位置，冷凝后的乙醴自溢流管流入，装满滤纸筒，使之淋洗滤纸筒上部的筒 壁，然后从乙醴逐步回收管回收乙醴,直至脂

46、肪接受瓶中的乙醴完全蒸发干为止. 关闭电源，关上冷凝水的阀门.4、脂肪瓶的干燥和滤纸筒乙醴的回收：脱下脂肪瓶，用绸布擦去手摸的痕迹及沾上的灰尘，放入90c的直空干燥箱 内烘45-60分钟后取出放入干燥器内，冷却半个小时后称重.滤纸筒脱离挂钩后立 即放入一个空的脂肪瓶内，一个脂肪瓶可以同时放入4-8个,套上冷却器，开放冷 却水，翻开水浴电源回收乙醴.五、计算结果：粗脂肪浸提前脂肪瓶重后脂月加重一 100% 样品重六、附注:乙醴易燃，把持时应特别注意，加乙醴时不要翻开电门，脂肪瓶与冷凝器的结 合必需吻合，不能漏气,脂肪浸提仪附近不能有明火闪动.乙醴试剂瓶应远离加热 器.实验八一种简单实用的提取植物

47、DNA勺方法一、目的与原理：植物DNA勺提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术，至今已有了数种方法.此方法最年夜的特点是：将SDSC时用作细胞膜的去污剂和卵 白质的变性剂，变性的卵白质通过离心而不是酚抽提除去 ，使得整个把持过程变 得简单快捷，比力温和，1小时左右就可以获得纯化的植物 DNA用这种方法获得的 DN南昌直接被限制Tt内切酶酶解，纯度较高，适用于分子生物学的研究.本实验的 目的是掌握DNAM取的原理和方法.二、资料与方法：1、植物资料：螺旋藻(Spirulina platensis )、水稻(Oryza sativa ) 和烟草(Nicotianatabacum ).2

48、、试剂和溶液：(1) 20X SSC 3mol L-1 柠檬酸钠，pH8.0 :(2)溶菌酶、10g N1Rnas8 10%SDS均为Sigma物)；( 3)酚：氯仿：异戊醇=25： 24： 1(4) TE: 10mmol L-1Tris-HCL、1mmol- L-1EDTA,pH7.6.3、提取步伐：收集对数生长期的螺旋藻细胞，悬浮于5倍体积(v/w)含2mg mL-1溶菌酶 的20XSSCfr，室温坚持10分钟，偶尔摇动混匀.水稻幼苗和烟草嫩叶在液氮中研 磨成粉状后，立即用5倍体积的20XSS(浮，并轻轻拌匀.上述悬浮液在冰上先放 置3分钟，然后加入10% SDS1终浓度为2%,混匀；继续

49、放置10分钟后，在4 c用 11000X g离心15分钟.上清液转移至新的离心管中，并用相同体积的TEW释，再加 入RNaseS终浓度为10g - ml-1,室温放置30分钟.11000 X g离心15分钟，所得的 DNAC淀用70%勺乙醇洗两次后，真空中抽干或自然干燥，最后溶于适量的TEt. 三、结果与讨论：利用本方法，从烟草、水稻和螺旋藻中提取了 DNA因为整个过程的把持步伐 较少，也较温和，减少了 DNAS弄断白机会，所以所得的DN酚子量较年夜，年夜部 份都比完整的入噬菌体的 DNA (48.5Kb)还年夜.另外，用此方法所提的DNA勺 OD260/OD280比值1.8至1.9之间，并能

50、被限制性内切酶酶切，显示有较好的纯度.在使用本方法时，须注意下面的几个问题.当20XSSC勺悬浮液中加入SDSS 2%后 , 溶液中会呈现白色絮状物质, 标明卵白质已经变性, 这是本方法的主要特点之一 . 它通过变性后离心而不是经常使用的屡次酚抽方法 , 将绝年夜部份的卵白质除去.离心所得的上清液，需要用TEB释，这是因为溶液中的盐浓度较高，如不 稀释,RNase就无法起作用；而且在沉淀DNAt如用乙醇会将溶液中的盐析出，如 用异戊醇则形成两相的界面, 将溶液中盐的浓度降低后 , 就解决了这些问题. 可是 ,加年夜稀释TE勺体积，对DNA勺产量并没有非常明显的作用，用等体积的T丽释即 可.DN

51、Att提7经RNase解后，再用酚：氯仿：异戊醇抽提一次，用以除去剩余的 卵白质和酶.本方法适用于年夜量和微量的DNAJ备.年夜量制备时，RNase酶解和 酚：氯仿：异戊醇的抽提步伐可以在 DN脓缩一些后再使用，这样就较便于把持， 而且节省RNas前酚.通常，用这种方法能从每克新鲜组织中提取到 10至15仙g的 DNA.实验九聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定年夜麦、小麦种子纯度一、目的：本实验采纳聚丙烯酰胺凝胶电泳技术, 提取分离种子中的卵白质, 根据分歧品种的卵白质谱带与标准谱带的不同 , 可鉴定出品种的真实性和纯度. 本实验目的是掌握聚丙烯酰胺电泳的原理、实验方法以及此方法在种子鉴定中的应用 .二

52、、原理：从种子中提取的醇溶卵白在凝胶的分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下获得良好的分离, 通过显色显示卵白质谱带类型. 分歧品种由于遗传组成份歧,种子内所含的卵白质种类有不同 , 这种不同可利用电泳图谱加以鉴别 , 从而对品 种真实性和纯度进行鉴定.三、仪器和试剂：1、仪器：电泳仪（满足稳压500V）、离心机、垂直板电泳槽、钳子、5ml、10ml移液管、微量进样器、聚丙烯离心管.2 、试剂：尿素, 乙醇 , 甘氨酸 , 甲基绿 , 三氯乙酸 , 冰乙酸 , 过氧化氢 , 硫酸亚铁，抗坏血酸，a-氯乙醇.3、药剂配制：（ 1）卵白质提取液：小麦：0.05克甲基绿溶于25毫升a -氯乙醇中，加蒸

53、溜水至100毫升.高温保 管.年夜麦：0.05克甲基绿溶于20毫升a -氯乙醇中，加入118克尿素，再加入1毫 升B -琉基乙醇，加蒸溜水至100毫升.高温保管.（2）电泳缓冲液：0.4克甘氨酸加蒸溜水溶解, 加4毫升冰乙酸, 定容至 1000毫升 . 高温保管 .（3）凝胶缓冲液：1.0克甘氨酸加蒸溜水溶解, 加20毫升冰乙酸, 定容至1000毫升 . 高温保管 .（4）0.6%过氧化氢：30%过氧化氢2毫升 , 加蒸溜水至100毫升 . 高温保管 .（ 5）染色液：0.25克考马斯亮蓝加25毫升无水乙醇溶解, 加入50克三氯乙酸 , 加水至500毫升 .（6）凝胶液：丙烯酰胺20克, 甲叉

54、双丙烯酰胺0.8克, 尿素12克, 硫酸亚铁0.01 克, 抗坏血酸 0.2克, 用凝胶缓冲液溶解并定容至200毫升 . 高温保管 .四、实验步伐：1、样品提取：一般每个样品测定100粒种子 , 若更准确地估测品种纯度, 则需更多的种子.如果分析结果要与某一纯度的标准值比力 , 可采纳顺次测定法（ sepuentialtesting ）来确定 , 即50粒作为一组, 需要时刻连续测定命组, 以减少工作量. 如果只鉴定真实性, 可用 50粒 .取小麦或年夜麦种子, 用钳子逐粒夹碎（夹种子时最好垫上小片清洁的纸,以便于清理钳头和防止样品之间的污染） , 置1.5毫升离心管中 , 加入卵白质提取液（

55、小麦 0.2毫升 , 年夜麦 0.3毫升）充沛摇动混合,在室温下提取24小时, 然后在18000 X g条件下离心15分钟.取其上清液用于电泳.2、凝胶制备：从冰箱中取出凝胶溶液和过氧化氢液, 吸取 10毫升凝胶溶液, 加1滴0.6%过氧化氢 , 摇匀后迅速倒入封口处, 稍加摇动 , 使整条缝口布满胶液, 让其在 5-10 分钟聚合封好 .吸取 45毫升凝胶溶液, 加 3滴0.6%过氧化氢, 迅速摇匀 , 倒入凝胶板之间 , 马上插好样品梳 , 让其在 5-10分钟内聚合.3、进样：小心抽出样品梳, 将玻璃板加在电泳槽上, 用滤纸或注射器吸取样品槽中过剩的水分，然后用微量进样器吸取10-20川

56、样品加入样品槽中.4、电泳：在前后槽注入电极液, 前槽接正极 , 后槽接负极 . 然后翻开电源 , 逐渐将电压增到500Vt泳时，要求在15-20 C温度下进行.电泳时间一般为60-80分钟,具体时间可按甲基绿迁移时间来推算, 电泳时间为甲基绿移至前沿所需时间的 2-2.5 倍.5、染色：将胶板小心的取下, 在染色液中染色1-2 天. 一般情况不需要脱色, 但为使谱带清晰 , 可用清水冲刷 .五、鉴定：谱带命名可采纳相对迁移率法 , 或电泳程式法. 根据醇溶卵白谱带的组成和带型的一致性, 并与标准样品电泳图谱比力, 坚定种子真实性以及测定品种纯度.实验十淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验

57、）一、实验原理年夜麦（或小麦）种子萌发时，种胚发生GAT散到胚乳的糊粉层细胞（被 称为GAS应的“靶细胞”）,安慰其合成或激活a -淀粉酶,然后进入胚乳，使贮 藏的淀粉被水解为还原酶，因此，无胚种子不能释放GA也不能形成与激活a -淀 粉酶.外加的GA也可取代胚白释放作用,从而诱导a -淀粉酶的合成.在一定范围 内，由去胚的吸胀年夜麦发生的还原糖量，与外加GA浓度的对数成正比，由此可说明GAt a -淀粉酶的诱导形成.二、资料与用品1、资料：年夜麦（或小麦）种子；2、仪器：721分光光度计；超净工作台（或灭菌箱）；温箱；摇床；恒温水浴；高压灭菌锅；棉塞；牛皮纸；刀片；镊子；烧杯；培养皿；试管；

58、移液管；玻璃棒.3、药品：10-3mol/L乙酸缓冲液（pH 4.8）每ml含链霉素硫酸盐1mg （或氯 霉素40 Ng）、10 mg/L GA10 mg,加少量95吆醇溶 解，用蒸 储水 定容至 1000ml、淀粉溶液（称取可溶性淀粉 0.67g和KHPO0.82g溶于20 ml蒸储水中不 竭搅拌下加到70ml沸水中，最后加水定容至100ml）、12- KI溶液（称取I2 0.06g 和 KI 0.6g,溶于 0.05mol/L HCL 溶液 1000ml中）、5%g白粉?液（ WN）、5% WSO溶液（WN）、灭菌水、石英砂.三、方法与步伐1、资料准备选择对GA敏感、萌发高、年夜小一致的小

59、麦种子，用50% HSO浸泡2h,取出 后, 用自来水冲刷约20次, 然后用力揉搓除去颖壳；用刀片将种子横切近于等长的两半 , 使成无胚的半粒和有胚的半粒, 各150粒分装与两个小烧杯内, 用5%漂白粉溶液消毒 15min, 在无菌条件下倒失落漂白粉溶液, 用无菌水洗5次 . 然后将无胚与有胚的半粒种子放于内装一层石英沙的无菌培养皿内 , 倒入刚好浸没种子的无 菌水 , 将培养皿置于25度温箱中吸涨24-48 h.2、GA系列浓度标准溶液的配置取干洁试管5支（编号）,各加蒸储水9ml,向1号管加GA母液1 ml,混匀后吸 出 1 ml 加到 2号管内；2号管混匀后吸出1 ml 加到 3号管内；

60、依次稀释, 于是依次配成 0.101 mg/L、10-2 mg/L、103 mg/L、104 mg/L、105 mg/L 的 GA系列浓度 标准溶液 . 再取干洁试管8 支（ 0-7 号） , 按表加入各种试液也资料（烧杯中吸胀的半粒年夜麦种子）,与25度下振荡保温24 h,过滤（或离心）,滤液（或上清 液）备用.3、a-淀粉酶活性测定取干洁试管8支（0-7号），分别加入蒸储水0.8 ml和淀粉溶液1 ml,再按号 加入半粒种子保温滤液（或上清液）0.2 ml混匀，于25度恒温水浴中准确计时保温10 min （适宜的时间由预备试验确定，即以1mg/L GA的反应液与碘试剂反应， 以。曲达到0.