香花枇杷与普通枇杷叶片提取物抑菌效果和抗氧化活性的比较研究

1、香花枇杷与普通枇杷叶片提取物抑菌效果和抗氧化活性的比拟研究论文摘要：采用牛津杯抑菌实验、最小抑菌浓度MIC的测定、DPPH自由基去除率的测定对香花枇杷和普通枇杷的不同萃取局部进行了抑菌效果和抗氧化活性的研究，结果说明：总体上，香花枇杷和普通枇杷相比，活性成分有较大的相似性，但具有更好的抑菌效果与抗氧化活性，可能存在潜在药用价值，有着较为广阔的开展前景。论文关键词：香花枇杷,普通枇杷,叶片提取物,抑菌,抗氧化我国是世界上最主要的枇杷生产国，且有丰富的枇杷属野生种质资源。批把叶为蔷薇科植物枇杷EriobotryaJaponca(Thunb.)Lindl.的叶，性平，味苦，入肺，胃经，是传统的止咳平

2、喘常用中药，有化痰止咳、和胃降逆的成效。现代药学测验，批把叶的化学成分结构多样，含有皂苷、苦杏仁苷、乌苏酸、齐墩果酸、蹂质、维生素B、维生素C等，这些成份具有抗炎、止咳、降血糖、抗病毒和抗肿瘤等药理活性。近年来，由于天然提取物的平安优势，从植物中提取活性物质是天然物质研究的热门课题。而自然界的天然植物中存在许多生理活性物质，如具有抗菌作用、抗氧化作用等，这可为植物源天然食品防腐剂、抑菌剂和抗氧化剂的研究和开发提供了珍贵资源。但目前对枇杷叶的抑菌作用存在着很多争议，需要做进一步的研究。我国原产的枇杷属植物有16个种(21个种类)，其中人工栽培的只有普通枇杷1种，其余的均零星分布在大山上，多处于野

3、生状态，香花枇杷即为一种分布较广的野生枇杷。目前，对普通枇杷叶片的活性及成分的研究较多，而对野生的枇杷属植物其它种类的相关研究却近乎空白。本论文通过野生香花枇杷和人工栽培普通枇杷叶片提取物的不同溶剂萃取局部的抗菌和DPPH自由基去除率实验，以期比拟这两个种类的抑菌和抗氧化活性，探讨香花枇杷潜在的药用价值。1材料与方法1材料与方法1.1材料香花枇杷EriobotryafragransChampexBenth叶片采自广州三角山，普通枇杷EriobotryajaponicaLindl.叶片取自华南农大园艺学院果园。收集清理后室温晾干，粉碎得叶片干粉。金黄色葡萄球菌G；大肠杆菌G、沙门氏菌G、绿脓杆菌

4、G、变形杆菌G；白色念珠菌酵母菌；木霉。以上菌株由龙岩学院微生物实验室别离、保存。细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；酵母：酵母培养基YPD；霉菌：马铃薯培养基PDA。仪器：DHP-9272型电热恒温培养箱，RE52-9型旋转蒸发器，SHZ-3型循环水多用真空泵，96孔板，牛津杯药品和试剂：DPPH1,1-二苯-2-苦肼基，批号085K1471购置于Sigma公司；刃天青批号RR7017购置于合肥博美生物科技有限责任公司，其他试剂均为分析纯。1.2方法取香花枇杷、普通枇杷叶片干粉各4.5kg，分别用95%乙醇浸提，提取液减压浓缩至无醇味剩下水为溶剂，通过过滤将沉淀脂溶性局部与上清液水溶性局部分开，分别以

5、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩去除溶剂，得沉淀各萃取部及剩余局部，以及上清液各萃取部及剩余水相局部。采用牛津杯抑菌实验法。对香花枇杷和普通枇杷各萃取样品材料用二甲基亚砜DMSO配制成浓度为20mg/mL。各菌株活化后配置成菌悬液，终浓度为1010个/mL，各取0.1mL涂布于适合各菌生长的培养基平板上。然后在各平板上放置2个牛津杯，一个供样品参加，一个供对照液DMSO参加。用微量移液器在各牛津杯上参加配置好的样品液和对照液各100uL，加好药液后，将平板放入培养箱培养，细菌37，酵母、霉菌30培养24h。实验重复三次，测定各样品所形成的抑菌圈大小，取平均值。对香花枇杷和普通枇杷各

6、萃取样品材料用二甲基亚砜DMSO配制成浓度40mg/mL，采用试管二倍稀释法进行梯度稀释，各梯度浓度分别为40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156mg/mL。以刃天青为指示剂，研究各样品的最小抑菌浓度MIC，具体方法如下。准备无菌96孔细胞培养板，每孔依次加50uL适合各菌株生长液体培养基、培养24h活化后菌液5uL菌浓：1010个/mL、不同梯度的各提取样品溶液55uL、0.25g/L刃天青指示剂5uL。将96孔板放置在厌氧条件下培养，细菌37，酵母、霉菌30培养24h。以刃天青为指示剂，通过观察孔中的颜色变化判断不同提取样品溶液是否有抗菌活性，浓度最低的一

7、孔样品溶液剂量即为该样品的最低抑菌浓度MIC。同时，配置80mg/mL的山梨酸钾作为阳性对照，测定山梨酸钾的最低抑菌浓度MIC。采用DPPH自由基去除率研究萃取样品的抗氧化活性。1,1-二苯基-2-苦肼基自由基DPPH分析法是用分光法进行定量分析筛选自由基去除剂的简便方法。萃取物对DPPH自由基的去除率ThepercentageofscavengingradicalcapacitySR%的计算方法参考许申鸿等的方法，由于在测定体系中样品本身的OD值很低，因此忽略不计，计算公式简化为：SR%=(A-A)/Ax100%。式中：ADPPH乙醇溶液的吸光值；A参加提取物溶液后的DPPH乙醇溶液的最终吸

8、光值。取各萃取样品配制成20mg-mL母液，吸取母液2L，参加2mL浓度为0.025mg-mL的DPPH乙醇液中，即待测样品终浓度为19.98g-mL，计算去除率。2结果与分析2.1香花枇杷和普通枇杷不同萃取样品的抑菌实验结果香花枇杷和普通枇杷不同萃取样品编为1-7#，按极性大小排列，分别代表沉淀石油醚部、沉淀氯仿部、沉淀乙酸乙酯部、沉淀正丁醇部、沉淀萃取剩余部、上清液乙酸乙酯部、上清液正丁醇部，各样品的抑菌实验结果如表1所示。实验结果说明：不同溶剂的萃取样品对各菌株的抑菌效果存在着较大的差异，7个样品中抑菌效果最好的溶剂萃取局部是7#Table1Theantibacterialcircled

9、iameterofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 菌株 Strain 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# A B A B A B A B A B A B A B 葡萄球菌 Staphylococcus aureus - - 9 11 9 10 10 11 9 15 10 11 10 12 大肠杆菌 E.coli - - - - - - - - - - - - 11 11 沙门氏菌 Salmonella - - - - - - - - - - - - 10 11 绿脓杆菌 P. aeruginosa - -

10、 - - - - - - - - - - 11 10 变形球菌 Proteus vulgaris - - - - - - - - - - - - 9 11 白色念珠菌 Canidia Albicans 10 11 - - - - 10 10 10 11 10 11 - - 木霉 Trichoderma spp. 15 9 20 11 - - - - - - - - 9 9 注：表中字母A、B分别代表普通枇杷和香花枇杷，下同Note:A、Bstandforcommonloquatandfragrantloquatrespectivelyinthistable,thesameasbelow2.2香

11、花枇杷和普通枇杷不同萃取样品最小抑菌浓度Table2TheMICofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 菌株 Strain 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 山梨酸钾 Potassium sorbate A B A B A B A B A B A B A B 葡萄球菌 Staphylococcus aureus - - 20 5 20 10 10 5 20 0.625 10 5 10 2.5 40 大肠杆菌 E.coli - - - - - - - - - - - - 5 5 40 沙门氏菌 Salmone

12、lla - - - - - - - - - - - - 10 5 40 绿脓杆菌 P. aeruginosa - - - - - - - - - - - - 5 10 50 变形球菌 Proteus vulgaris - - - - - - - - - - - - 20 5 50 白色念珠菌 Canidia Albicans 10 10 - - - - 20 20 10 5 10 10 - - 80 木霉 Trichoderma spp. 0.313 20 0.156 5 - - - - - - - - 20 20 30 表3香花枇杷和普通枇杷不同萃取局部的DPPH自由基去除率Table3Th

13、eDPPHSRofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 萃取样品 Samples of fractional extract 普通枇杷 common loquat 香花枇杷 fragrant loquat OD值 O.D value 去除率/% Percentage of scavenging radical capacity OD值 O.D value 去除率/% Percentage of scavenging radical capacity 空白 Blank 0.456 0.456 1# 沉淀石油醚部 1#

14、Petroleum ether extract of deposi 0.415 8.851 0.430 5.706 2# 沉淀氯仿部 2# Chloroform extract of deposit 0.321 29.627 0.379 16.825 3# 沉淀乙酸乙酯部 3# EtOAc extract of deposit 0.364 20.117 0.272 40.380 4# 沉淀正丁醇部 4# n-BuOH extract of deposit 0.368 19.293 0.250 45.026 5# 沉淀萃取剩余部 5# Residue of deposit extraction

15、0.054 88.149 0.047 89.685 6# 上清液乙酸乙酯部 6# EtOAc extract of supernatant 0.126 72.275 0.049 89.247 7# 上清液正丁醇部 7# n-BuOH extract of supernatant 0.284 37.747 0.047 89.685 3讨论本文对香花枇杷和普通枇杷的不同萃取局部进行了抑菌效果和抗氧化活性的研究，结果说明：1与阳性对照山梨酸钾的抑菌效果相比，香花枇杷与普通枇杷均有较好的抑菌效果，抑菌的作用部位也是一致的，说明枇杷属野生植物资源与普通枇杷相比拟，活性成分有较大的相似性，这与作者之前的三

16、萜酸指纹图谱的分析结果有一致性。但总体上香花枇杷的抑菌效果要优于普通枇杷。2香花枇杷与普通枇杷叶片提取物中极性较大的萃取局部5#、6#和7#比极性较小的萃取局部抑制细菌的能力较强，推测抑菌成分以极性相对较大的成分为主，根据洪燕萍等报道，在这3个萃取局部中黄酮多酚含量较高，可能是抑菌的有效成分；而对木霉的抑制效果那么是极性较低的萃取局部1#和2#效果较好，推测对霉菌的抑制可能以低级性成分如挥发油为主。3香花枇杷与普通枇杷相比具较强的抗氧化活性，同时这两种枇杷叶片提取物的5#、6#和7#萃取部的抗氧化能力强。说明极性较大的5#、6#和7#萃取部的抑制细菌的能力及抗氧化的能力均较强。总体上，香花枇杷

17、与普通枇杷相比，具有更好的抑菌效果与抗氧化活性，说明香花枇杷可能存在潜在药用价值，同样也从一个侧面说明野生枇杷属植物具有进一步研究和利用的价值，如在食品防腐、化装品消毒、医药领域可有着较为广阔的开展前景。参考文献1 吕寒,习超鹏,陈剑,等. 不同枇杷叶药材中三萜和黄酮类成分含量的比拟.中成药,2021,31(1):89-92.2 Hong Y P,Qiao Y C,Lin S Q,et al. Characterization of antioxidant compounds in Eriobotrya fragrans Champ leaf. Scientia Horticulturae,2

18、021,118 (4): 288-292.3 游见明,兰江涛. 枇杷叶总黄酮提取工艺研究.食品研究与开发,2006,27(3):37-41.4 谢红英,刘艺,王洪新,等. 批把叶提取物抗氧化和抑菌作用的研究.食品工业,2007,21(2):1-4.5 何 莲,张 宏,李 琪. 枇杷花系统溶剂提取物抑菌作用研究.食品科学,2007,28(12):109-112.6 杨向晖,格拉贝,林顺权,等. 枇杷属植物种类数及东南亚原产枇杷种类. 果树学报,2005,22(1): 55-59.7 何英姿.枇杷叶有效成分提取及药理作用研究进展. 广西工学院学报,2007,18(2):81-84.8 洪燕萍,黄素华,曹红云,等. 香花枇杷和普通枇杷叶片抗氧化活性成分的比拟.园艺学报,2021,36(6):898-904.9 周英,钱利安,黄赤夫. 一种通过快速显色筛选植物提取物的抗菌活性的方法.食品科学,2021,29(5):140-141.10 李京晶,籍保平,周 峰,等. 丁香和肉桂挥发油的提取、主要成分测定及其抗菌活性研究.食品科学,2006,27(8):64-68.11 Mellors A,Tappel A L. The inhibition of mitochondrial pe