实验室常用溶液配制doc-丁香通-我的实验室采购专家

1、.：.；常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺Spermidine:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份储存于-20。 1mol/L精胺Spermine：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份储存于-20。 10mol/L乙酸胺ammoniumacetate：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA：加100mg的牛血清蛋白组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶于9.5ml水中为减少变性， 须将蛋白参与水中，而不是将水参与蛋白，盖好盖后，悄然摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止

2、。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份储存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇DTT：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份储存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾potassiumacetate：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾KCl：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠sodiumacetate：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

3、0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液0.5mol/L，混合后构成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH6.8-8.2，然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT异丙基硫代-D-半乳糖苷于10ml水中，分成小份储存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。 100

4、mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或储存于-20。 20mg/ml蛋白酶KproteinaseK：将200mg的蛋白酶L参与到9.5ml水中，悄然摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份储存于-20。 10mg/mlRnase无DNaseDNasefreeRNase：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中pH5.0。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20储存。配制过程中要戴手套

5、5mol/L氯化钠NaCl：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠NaOH：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中磁力搅拌器搅拌，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS十二烷基硫酸钠：称取100gSDS渐渐转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨糖醇Sorbitol：溶解36.4g山梨糖醇于足量水中使终体积为100ml。 100三氯乙酸TCA:在装有500gTCA的试剂瓶中参与100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。稀释液应在临用前配制 2.5Xgal5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷：溶

6、解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺DMF,用铝箔包裹装液管，储存于-20。 100Denhardt试剂Denhardtsregent 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖Ficoll，400型 2%聚乙烯吡咯烷酮PVP-40 2%BSA组分V 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml,按照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20储存。 10规范DNA衔接酶缓冲液standardDNAligasebuffer粘端、平端衔接 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/L

7、MgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP: 200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺可选:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA组分V可选:0.5ml10mg/mL贮液 ,水:2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，储存于-20。 100mmol/LdNTP溶液dNTPsolutions 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可储存至少6个月。 10mmol/LdNTP混合液 成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/LdATP 10mmol/LdCTP 10mmol/L

8、dGTP 10mmol/LdTTP 水2ul100mmol/LdATP贮液 2ul100mmol/LdCTP贮液 2ul100mmol/LdGTP贮液 2ul100mmol/LdTTP贮液 12ul 20PEG8000/2.5MNaCl 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L氯化钠 水20g 50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20SSC 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L柠檬酸三钠二水 3mol/L氯化钠 水88.2g

9、 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠二水和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC焦碳酸二乙酯处置水 加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使剩余的DEPC失活。DEPC会与胺起反响，不可用DEPC处置Tris缓冲液。 甲酰胺deionizedformamide 直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器悄然搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80储存防止氧

10、化。 磷酸缓冲液phosphatebuffer 按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠单碱和1mol/L磷酸氢二钠双碱贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠NaH2PO4H2O贮液：溶解g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠Na2HPO4贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L磷酸二氢钠ml1mol/L磷酸氢二钠ml最终pH值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720

11、6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE用于悬浮和储存DNA 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/LTrisHCl 1mmol/LEDTA 水1ml1mol/LTris-HClpH7.4-8.0，25 200ul0.5mol/LEDTApH8.0 98.8ml Tris缓冲液Tris-HClbuffer 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH25下加一定量的浓盐酸11.6N，用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积mlpH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3

12、 769.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50Tris-乙酸TAE缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2mol/LTris碱 1mol/L乙酸 100mmol/LEDTA 水242g 57.1ml的冰乙酸17.4mol/L 200ml的0.5mol/LEDTApH8.0 补足1L 5Tris-硼酸TBE缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445mmol/LTris碱 445mmol/L硼酸盐 10mmol/LEDTA 水54g 27.5g硼酸 20ml的0.5mol/LEDTApH8.

13、0 补足1L 染料 1溴酚蓝bromophenolblue 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FFxylenecyanoleFF 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭ethidiumbromide 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4储存。 凝胶上样液gelloadingsolutions 6碱性凝胶上样液室温储存 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.3N氢氧化钠 6mmol/LEDTA 18聚蔗糖400型 0.15溴甲酚绿 0.2

14、5二甲苯青FF 水300ul10N氢氧化钠 120ul0.5mol/LEDTApH8.0 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液室温储存 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 15聚蔗糖400型 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTApH8.0 1.5g 补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液室温储存 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖400型 水2.5ml1溴酚蓝 2.5ml1二甲苯青FF 1

15、.5g 补足到10ml 6甘油凝胶上样液4储存 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 50甘油 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTApH8.0 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液室温储存 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 40聚蔗糖 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTApH8.0 4g 补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液室温储存 成分及终浓度配制10ml溶

16、液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200mmol/LEDTA 0.1SDS 50甘油 水20mg 20mg 4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0) 100ul10SDS 5ml 补足到10ml 三.常用培育基 LB培育基 将以下组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 假设需求用1NNaOH1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培育基 将以下组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1mol/L氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成10

17、0ml的小份，高压灭菌。培育基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培育基 成分、方法同SOB培育基的配制，只是在培育基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌。 TB培育基 将以下组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液2.31g的KH2PO4和12.

18、54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 2YT培育基 将以下组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g 酵母提取物10g 氯化钠4ml 假设需求用1NNaOH1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培育基 将以下组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物10g 葡萄糖20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培育基添加1.6g色氨酸，由于YPD培育基是色氨酸限制型培育基。为了配制平板，需求在高压灭菌前参与20g琼脂粉。

19、 四.常用抗生素 氨苄青霉素ampicillin100mg/ml 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 羧苄青霉素carbenicillin50mg/ml 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 甲氧西林methicillin100mg/ml 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一同添加于生长培

20、育基。 卡那霉素kanamycin10mg/ml 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 氯霉素chloramphenicol25mg/ml 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 链霉素streptomycin50mg/ml 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 萘啶酮酸nalid

21、ixicacid5mg/ml 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20储存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培育基。 四环素tetracyyline10mg/ml 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20储存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培育基。几种溶液的配制方法1、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.27.4之间，假设偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、TBS：2.1 Tr

22、is缓冲液配方：0.5 M pH7.6Tris三羟甲基氨基甲烷60.57g1N HCL约420ml双蒸水加至1000mlTris缓冲液配制方法： 先以少量双蒸水300500ml溶解Tris，参与HCl后，用HCl1N或NaOH1N将pH调至7.6， 最后双蒸水加至1000ml。此液为贮藏液，4冰箱中保管。2.2 TBS配方：Tris-HCI缓冲液0.5M pH7.6100mlNaCI8.59g (0.15mol/L)双蒸水加至1000mlTBS配制方法： 先以少量双蒸水溶解NaCl，再参与Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。3、枸橼酸盐缓冲液Citrate buffe

23、r：3.1 储存液：A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸C6H8O7H20溶于1000ml蒸馏水中。B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠C6H5Na3O72H20溶于1000ml蒸馏水中。3.2 任务液：取9ml A液和41ml B液参与450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.00.14、胰酶Trypsin：4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合1:3稀释，那么可直接滴加运用。胰酶的最终浓度可以根据运用者的要求进展调整，浓度范围可以从0.05%1:10稀释至0.25%1:1稀释。4.2

24、 ZLI-9010胰蛋白酶：取0.05g或0.1g胰蛋白酶参与到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。5、胃酶Pepsin：4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化任务液，不需稀释直接滴加运用，欢迎选购6、DAB：6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：运用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB任务液，简单易用。6.1 ZLI-9030 DAB：6mgDAB溶于10mlTBS0.05M pH7.6，再参与0.1ml浓度为3的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

25、7、AEC：4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，参与14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液pH5.2，然后参与0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。8、RIPA：1PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS此液体可长期保管。以下抑制剂以储存液方式保管，临用前参与RIPA中。8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液用量为10l/ml8.2 AprotininSigma产品，用量为30l/ml8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液用量为10l/ml9、Blotto A：常规运用1PBS，5% milk，0.05% T

26、ween 20。10、Blotto B：与Phosphotyrosine抗体共用，1PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但能够引起背景增高。实验室常用储存液的配制参数一、核酸及蛋白质常用数据化合物 分子量 max(pH7.0) 1摩尔溶液pH7.0中max时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15CTP 483 271 9000 0.97GTP 523 253 00 0.66UTP 484 262 10000 0.38dATP 494 259 15200 0.15dCTP 467 271 9300 0.9

27、8dGTP 507 253 00 0.66dTTP 482 267 9600 0.712常用核酸的长度与分子量核酸核苷酸数分子量DNA48502双链环状3.0107pBR3224363双链2.810628SrRNA48001.610623SrRNA37001.210618SrRNA19006.110519SrRNA17005.51055SrRNA1203.6104tRNA大肠杆菌752.51043常用核酸蛋白换算数据1分量换算1g=10-6g 1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g2分光光度换算：1A260双链DNA=50g/ml1A260单链DNA=30g/ml1A26

28、0单链RNA=40g/ml3DNA摩尔换算：1g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1g pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66g1pmol pBR322=2.8g1kb双链DNA钠盐=6.6105道尔顿1kb单链DNA钠盐=3.3105道尔顿1kb单链RNA钠盐=3.4105道尔顿4蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10g100pmol分子量50，000蛋白质=5g100pmol分子量10，000蛋白质=1g氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿5蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量

29、=3.7104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA30，000MW蛋白质=810bp DNA50，000MW蛋白质=1.35kb100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4常用蛋白质分子量规范参照物1高分子量规范参照2中分子量规范参照3低分子量规范参照肌球蛋白分子量磷酸化酶B97，400碳酸酐酶31，00肌球蛋白212，000牛血洁白蛋白66，200大豆脻蛋白酶21，500-半乳糖甘酶B116，000谷氨酶脱氢酶55，000抑制剂磷酸化酶B97，400卵白蛋白42，700马心肌球蛋白16，900牛血洁白蛋白66，200醛缩酶40，000溶菌酶14，400过氧化氢酶57，000

30、碳酸酐酶31，000肌球蛋白F18，100醛缩酶40，000大豆脻蛋白酶21，500肌球蛋白F26，200抑制剂肌球蛋白F32，500溶菌酶14，4005常用DNA分子量规范参照物DNA/HindDNA/EcoR/Hind+EcoRpBR322/Hae23130212262122758712394167421514840510465575804497350489436156434268458802322484335304346420273530202726757564190423451125158421321519218974184118311247564125续上表pBR322/Hinf17

31、4/Hinf174/Hae 174/Tap16317261403291451771311810781175506553100872404396500826033273444176631023129841348281141221311422718722024940234541542002419433751511182072二、常用缓冲液1分子克隆常用缓冲液2磷酸缓冲液125下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制pH1mol/L K2HPO4(ml)1mol/L KH2PO4(ml)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849

32、.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2225下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制pH1mol/L Na2HPO4(ml)1mol/L NaH2PO4(ml)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8:用蒸馏水将混合的两种1mol/L储存液稀释至1000ml，根据Henderson

33、-Hasselbalch方程计算其pH值：pH=pK+1g(质子受体/质子供体)在此，pK=6.86(25)。3电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合运用要求，无须再进展处置。不过，一旦略呈黄色，那么运用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进展去离子处置，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70。常用的电泳缓冲液缓冲液运用液浓储存液每升Tris-乙酸TAE1：0.04mol/L Tris-乙酸50：2

34、42g Tris碱0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-磷酸TPE1:0.09mol/L Tris-磷酸10:10g Tris碱0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸1.679g/ml40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-硼酸TBEa0.50.045mol/L Tris-硼酸5：54g Tris碱0.001mol/L EDTA27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)碱性缓冲液b1:50mmol/L NaOH1:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA

35、2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸c1:25mmol/L Tris5:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸电泳级pH8.30.1% SDS50ml 10% SDS(电泳级)阐明：TBE溶液长时间存放后会构成沉淀物，为防止这一问题，可在室温下用玻璃瓶保管5溶液，出现沉淀后那么予以废弃。以片都以1TBE作为运用液即1：5稀释浓贮液进展琼脂糖凝胶电泳。但0.5的运用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎一切的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的储存液作为运用液。进展聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故经过缓冲液的电流量通常较大，需求运用1TBE以提供足

36、够的缓冲容量。碱性电泳缓冲液应现用现配。Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。2SDS凝胶加样缓冲液：100mmol/L TrisHCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇DTT4%SDS电泳级0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2SDS凝胶加样缓冲液可保管于室温，应在临用前取1mol/L储存液现加于上述缓冲液中。4凝胶加样缓冲液缓冲液类型6缓冲液储存温度0.25%溴酚蓝40.25%二甲苯青FF40%W/V蔗糖水溶液0.25溴酚蓝室温0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(Ficoll400)0.25%溴酚蓝40.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液0.25%溴酚蓝440%(W/V)蔗

37、糖水溶液碱性加样缓冲液:300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18%聚蔗糖(Ficoll400)40.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF运用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中挪动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA一样，而二甲苯青FF的泳动那么与长4kb的双链线状DNA一样。在琼脂糖浓度为0.5%1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化

38、的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶该当运用溴甲酚绿作为示踪染料，由于在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。5各种pH值的Tris缓冲液的配制各种pH值的Tris缓冲液的配制 所需pH值250.1mol/L HCl的体积714577244773434744207540376385773667834579320802928.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88.58.97.0某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积单位：

39、ml的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml2温度对50mmol/L TrisHCl液pH值的影响425378175728276738377748478758579768680778781788882798983809084819185829286839387849488856常用缓冲液的pKa值缓冲液分子量pKa值缓冲范围Trisa12.18.087.17.9HEPESb283.37.477.28.2MPOSc209.37.156.67.8PIPESd304.36.766.27.3MESe195.26.095.46.8a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磷酸

40、；c：3-N-吗啉代丙磺酸；d：N，N-双2-乙磺酸哌嗪；e：2-N-吗啉代乙磺酸。7温度对常用缓冲液pH的影响缓冲体系pKa(20)pKa/10Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110PiPes6.80-0.085Aces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.014Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280三、常用酶的配制1溶菌酶用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保管于-20。每一小

41、份一经运用后便予丢弃。2蛋白水解酶类储存液储存温度反响浓度反响缓冲液温度预处置0.01mol/L Tris(pH7.8)链霉蛋白酶a20mg/ml-20溶于水1mg/ml0.01mol/L EDTA37自消化b0.5% SDS0.01mol/L Tris(pH7.8)蛋白酶Kc20mg/ml-20溶于水50g/ml0.005mol/L EDTA3756无须预处置0.5% SDSa：链霉蛋白酶是从链球菌Streptomyces griseus中分别到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./

42、L TrisHCl(pH7.5)、10mmol/L NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保管-20。c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌Tritirachium album Limber中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定间隔 ，与催化机理并无直接关系。然而，假设从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的构造变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在普通情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常参与EDTA以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用。但是，假设要消

43、化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，那么能够需求运用含有1mmol/L Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化终了后、纯化核酸前要参与EGTpH8.0至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。3无DNA酶的RNA酶将胰RNA酶RNA酶A溶于10mmol/L TrisHCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保管于-20。四、常用抗生素溶液抗生素储存液a任务浓度浓度保管条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-2020g/ml60g/ml羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-2020g

44、/ml60g/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-2025g/ml170g/ml卡那霉素10mg/ml(溶于水)-2010g/ml50g/ml链霉素10mg/ml(溶于水)-2010g/ml50g/ml四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-2010g/ml50g/mla：以水为溶剂的抗生素储存液经过0.22m滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处置。一切抗生素溶液均应放于不透光的容器保管。b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的挑选应运用不含镁盐的培育基如LB培育基。五、常用储存液的配制130%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml

45、的水中。加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器0.45m孔径过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保管于室温。【留意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以经过皮肤吸收，其作器具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可以为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，由于它还能够会含有少量未聚合资料。一些价钱较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺储存液中参与大约0.2体积的单床混合树脂MB-1 Mallinckrodt，搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在储存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

46、240%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺DNA测序级和20g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处置，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【留意】见上述配制30%丙烯酰胺的阐明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释储存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D分子量为1255纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的储存液应放在包有箔片的

47、试管中，保管于-20。【留意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必需戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进展，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只需经过丈量储存液在440nm波优点的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制本身引导作用。40.1mol/L腺苷三磷酸ATP溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保管于-70510mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌

48、。610%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4保管数周。7BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐BCIP溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保管于482BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BESN，N-双2-羟乙基-2-氨基乙磺酸、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调理 该溶液的pH值至6.96、然后参与蒸馏水定容至100ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成小份，保管于-20。91mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解5

49、4g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成10ml小份储存于-20。【留意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器0.45m孔径过滤除菌，然后骤冷至0。102.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl26H2O，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份储存于-20。111mol/L二硫苏糖醇DTT溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液pH5.2溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份储存于-20。【留意】DTT或含有DTT的溶液不能进展高压处置。12脱氧核苷三磷酸d

50、NTP溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器汲取0.05mol/L Tris碱分别调理 每一dNTP溶液的pH值7.0用pH试纸检测，把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实践浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份储存于-70。碱基波长nm消化系数L/molcmA2591.54104G2531.37104C2719.10103T2607.40103比色杯光径为1cm时,吸光度=M130.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在800ml水中参与18

51、6.1g二水乙二胺四乙酸二钠EDTA-Na2H2O，在磁力搅拌器上猛烈搅拌，用NaOH调理 溶液的pH值至8.0约需20g NaOH颗粒然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。【留意】EDTA二钠盐需参与NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才干完全溶解。14溴化乙锭10mg/ml溶液【配制方法】在100ml水中参与1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保管于室温。【留意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，运用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。152HEPES缓冲盐溶液【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0

52、.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/L NaOH调理 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22m滤器过滤除菌，分装成5ml小份，储存于-20。16IPTG溶液【配制方法】IPTG为异丙基硫代-D-半乳糖苷分子量为238.3，在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22m滤器过滤除菌，分装成1ml小份储存于-20。171mol/L乙酸镁溶液【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。181mol/L MgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解2

53、03.4g MgCl26H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。【留意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶如100g试剂，启用新瓶后勿长期存放。19-巯基乙醇BME溶液【配制方法】普通得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保管于4。【留意】BME或含有BME的溶液不能高压处置。20NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保管于4。21酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TrisHCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/L TrisHCl(pH7.6)液层，

54、保管于4。【留意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。一切操作均应在化学通风橱中进展。与酚接触过的部位皮肤运用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。2210mmol/L苯甲基磺酰氟PMSF溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml10mmol/L，分装成小份储存于-20。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的储存液100mmol/L。【留意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或经过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立刻用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在运用前从储存

55、液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25的失活速率高于4。pH值为8.0时，20mmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这阐明将PMSF溶液调理 为碱性pH8.6并在室温放置数小时后，可平安地予以丢弃。23磷酸盐缓冲溶液PBS溶液【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调理 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保管于室温。241mol/L乙酸钾pH7.5溶液【配制方法】将9.

56、82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调理 pH值至7.5后参与纯水定容到1L，保管于-20。25乙酸钾溶液用于碱裂解【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中参与11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。263mol/L乙酸钠pH5.2和pH7.0溶液【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调理 pH值至5.2或用稀乙酸调理 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。275mol/L NaCl溶液【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。2810%十

57、二烷基硫酸钠SDS溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68助溶，参与几滴浓盐酸调理 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分配备用。【留意】SDS的微细晶粒易分散，因此称量时要戴面罩，称量终了后要去除残留在称量任务区和天平上的SDS，10% SDS溶液无须灭菌。2920SSC溶液【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，参与数滴10mol/L NaOH溶液调理 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。3020SSPE溶液【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4H2O和7.4g EDTA

58、，用NaOH溶液调理 pH值至7.4约需6.5ml 10ml/L NaOH，加水定容至1L，分装后高压灭菌。31100%三氯乙酸溶液【配制方法】在装有500g TCA的瓶中参与227ml水，构成的溶液含有100%M/VTCA。321mol/L Tris溶液【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱，参与浓HCl调理 pH值至所需值。pHHCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。【留意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。虽然多种类型的电极均不能准确丈量Tris溶液的pH值

59、，但仍可向大多数厂商购得适宜的电极。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。33Tris缓冲盐溶液TBS25mmol/L Tris【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，参与0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保管。34X-gal溶液【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-g

60、al配制成的20mg/ml的储存液。保管于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应储存于-20。X-gal溶液无须过滤除菌。杂交实验中用于降低背景的封锁剂试剂用途Denhardt试剂Northern杂交运用RNA探针的杂交单拷贝序列的Southern杂交将DNA固定于尼龙膜上的杂交Denhardt试剂通常配制50储存液，过滤后保管于-20。可将该储存液10倍稀释于预杂交液常为含有0.5%SDS和100g/ml经变性被打断的鲑精DNA的6SSC或6SSPE中。50Denhardt液中含5g聚蔗糖Ficoll,400型，Pharmacia、5g聚乙烯吡咯