医学专题药学研究

1、药品标准复核及相关的标准化与规范化问题李慧芬北京市药品审评中心2005.07.252021/7/20 星期二1引言随着中华人民共和国药品管理法及新药审批办法药品注册管理办法的颁布实施，20年来我国药品监督管理与注册体系逐步发展健全；一系列药物研究技术指导原则的制定出台，进一步为保证新药研究的科学性提供了支持。但新药研究开发是一个系统工程，涉及多学科多层次的工作，保证每一项实验结果的准确可靠，才能将技术指导原则落到实处，从根本上保证新药研究开发工作的质量。为此，结合药品质量标准复核工作，就实验操作的标准化与质量标准的规范化问题谈几点意见。2021/7/20 星期二2内容提要药品注册检验及常见问题

2、实验操作的标准化质量标准的规范化2021/7/20 星期二31.1 注册检验的有关规定 申请药品注册必须进行药品注册检验。药品注册检验，包括对申请注册的药品进行的样品检验和药品标准复核。 （第一百四十六条）2021/7/20 星期二41.1 注册检验的有关规定样品检验，是指药品检验所按照申请人申报的药品标准对样品进行的检验。2021/7/20 星期二51.1 注册检验的有关规定药品标准复核，是指药品检验所对申报的药品标准中检验方法的可行性、科学性、设定的项目和指标能否控制药品质量等进行的实验室检验和审核工作。2021/7/20 星期二61.1 注册检验的有关规定从事药品注册检验的药品检验所，应

3、当按照药品检验所实验室质量管理规范和国家计量认证的要求，配备与药品注册检验任务相适应的人员和设备，符合药品注册检验的质量保证体系和技术要求。（第一百五十条）2021/7/20 星期二71.1 注册检验的有关规定申请生产已有国家标准的药品，药品检验所在接到样品后应当按照国家药品标准进行检验，并对由于工艺变化而导致的质量指标变化进行全面分析，必要时应当要求申请人制定相应的质量指标和检验方法，以保证药品质量的可控。（第一百五十二条）2021/7/20 星期二81.1 注册检验的有关规定药品检验所进行新药标准复核时，除进行样品检验外，还应当根据药物的研究数据、国内外同类产品的药品标准和国家有关要求，对

4、药物的药品标准、检验项目等提出复核意见。（第一百五十三条）2021/7/20 星期二91.1 注册检验的有关规定要求申请人重新制定药品标准的，申请人不得委托提出原复核意见的药品检验所进行该项药品标准的研究工作；该药品检验所不得接受此项委托。（第一百五十四条）2021/7/20 星期二101.1 注册检验的有关规定药品检验所认为申报的药品标准无法控制药品质量的，申请人可撤回新药申请，未撤回的，经SFDA审核认为药品标准确实无法控制质量的，予以退审。（58）药品检验不符合申请人申报的药品标准的，SFDA核实后对该新药申请予以退审。 2021/7/20 星期二11注册标准注册标准：是批准给申请人特定

5、药品的标准，该申请人生产该药品必须执行该注册标准；该标准仅颁布至省级药品监督管理部门供监督检验用；但不以该企业的标准去检验另一企业生产的同一药品，也不能仅以药典标准来检验。2021/7/20 星期二12药检所注册检验1、按照申报标准对样品进行检验并出具检验报告书；直接寄送国家局和省级药监局。2、对申报标准的检测方法的可行性和可靠性进行验证（方法学验证）。3、对研制单位申报的质量标准进行审核，就标准的完善性及药品的质量可控性提出技术性意见。4、不对申报标准进行修订和规范化整理，也不再另行出具修订后的质量标准。2021/7/20 星期二13 1.2 注册检验常见问题1、申报方法不可行：按申报标准操

6、作，观察不到所述的实验现象或得不到预期的结果如样品不能溶解；静置不能分层，无法取上清液；分离度达不到要求；滴定终点不易判断；2021/7/20 星期二14 注册检验常见问题2、方法学验证的问题：含量测定等方法的回收率低灵敏度、线性范围不够专属性不强2021/7/20 星期二15 注册检验常见问题3、实验设计缺陷：方法选择不当；实验条件不够合理。如：取样量溶剂浓度检测波长2021/7/20 星期二161.2 注册检验常见问题4、文字表达不规范，检验结果难以判定。如：限度不明确：有关物质检查反应现象描述不正确：化学鉴别的现象； 滴定终点颜色的变化2021/7/20 星期二17注册检验常见问题5、实

7、验操作方法不规范：振摇、超声时间 不可行：有的内容重复不出来6、检测项目设置不当：微生物限度与无菌检查。7、标准限度设置不当9、文字打印错误2021/7/20 星期二18注册检验常见问题10、样品检验不合格：性状熔点pH值干燥失重水分有机溶剂残留量溶出度含量测定2021/7/20 星期二19例1某药物有关物质检查： 配制浓度为400ug/ml供试品溶液； 另取对照品配成5ug/ml的溶液，调节灵敏度。限度：各杂质峰面积之和不得大于总峰面积的1.0%.问题：预试液用对照品配制，没有必要 预试液浓度相当于供试品的1.25%， 与限度1.0%不匹配， 归一化法 vs主成分自身对照法2021/7/20

8、 星期二20例2 某药物有关物质检查：供试品溶液浓度5mg/ml;稀释50倍作为对照溶液（2.0%）。单个杂质峰面积不得过总峰面积的2.0%；各杂质峰面积之和不得过对照溶液主峰面积的5.0%。问题：1、配了对照液，单个杂质还用归一化法计算2、杂质总量限度值（2.0%*5.0%=0.01%） 根本不可行。 2021/7/20 星期二21原因分析样品质量存在问题实验设计不够科学严谨研究过程中实验操作不标准质量标准制定欠缜密，不规范2021/7/20 星期二22质量研究必须科学严谨根据有关技术指导原则并结合研究对象的实际情况设计实验方案按照标准操作规程认真做好每一项实验及时、准确、详实、全面地记录实

9、验结果实事求是、严谨规范的整理申报资料2021/7/20 星期二23实验操作标准化的必要性保证实验结果准确可靠保证质量标准切实可行准确反映药品质量信息2021/7/20 星期二24实验操作标准化中国药品检验标准操作规范1996年第一版 原卫生部药政局组织全国38个药检所的专业技术人员历时3年编撰而成。是药检工作者多年工作经验的总结，是执行药典标准的重要依据和补充。对于检验操作的标准化、规范化，保证各个实验室检测数据和结论的正确、可靠和统一具有重要意义。2021/7/20 星期二25实验操作标准化主要内容有三部分：1、药典附录方法2、各论项下的检测方法3、仪器设备的使用、校准、操作步骤及注意事项

10、。2021/7/20 星期二26实验操作标准化2000年进行了全面补充修订：38个药检所的255位专业技术人员参加编写，共近200个操作规程。2021/7/20 星期二27实验操作标准化2005年版特点：注重与国际接轨和与国家标准的统一：“内容丰富完整，科学性、实用性和可操作性均强，是一部指导药品检验人员进行药品检验工作的工具书” 。 “将使我国药品检验工作有章可循，同时将对培养药检人才、指导相关专业实验技术和科学发展，确保药品检验工作的科学、准确，发挥重要作用”。新增TOC、高分子杂质检查等5个检测方法修订了65个附录中的检测方法2021/7/20 星期二28实验操作标准化与中国药典2005

11、版附录条目相对应，共156项，概分为4部分：1、化学分析方法（各类制剂通则检查项目及检测方法）2、仪器分析方法（各类仪器分析通法和不同型号仪器的正确使用、校正、操作步骤与注意事项）3、生物鉴定和微生物鉴定法（抗生素效价测定等）4、其它相关内容（滴定液的配制、天平的使用与维护等）2021/7/20 星期二29实验操作标准化紫外分光光度法pH测定法旋光度测定法重金属检查法非水滴定法有机溶剂残留量溶出度检查2021/7/20 星期二30实验操作标准化滴定液分析天平使用与称量有效数字和数值的修约及其运算规则色谱数据处理系统2021/7/20 星期二31实验操作标准化1、紫外分光光度法 基本注意事项1）

12、吸收池：在清洁液中长时间浸泡，铬酸钾结晶会损坏光学表面。2）溶剂的适用性检查：以空气为空白测定不同波长处的吸收度，确定适用波长范围：波长：220240 241250 251300 300 A: 0.4 0.2 0.1 0.05避免不同品牌不同批号的混用。2021/7/20 星期二32实验操作标准化称量与稀释：称量准确稀释转移次数尽量少 份数：含量测定需平行2份，均值的偏差0.5%。供试液与对照液的pH值应一致2021/7/20 星期二33实验操作标准化紫外吸收系数测定样品：精制样品，准确称量，平行2份浓度：原液 吸收值0.60.8 稀释一倍后，吸收值0.30.4狭缝：减小狭缝至吸光值不再增加为

13、止，取吸光度不改变的数据。5台仪器，每台平行测定2份结果均值的偏差应不超过0.3%计算：按无水物或干燥品计。2021/7/20 星期二34实验操作标准化 pH值测定按规定用适当的容器称取样品溶解：水应新沸放冷，pH范围5.57.0仪器：预热、校准（适当范围的两种缓冲液，示值误差不得过0.02pH单位）测试：1分钟内两次读数相差应不超过0.05pH单位；取平均值。2021/7/20 星期二35操作标准化操作要点：称样后立即测定，以免空气中的二氧化碳影响结果。测定温度：540度内，加温度补偿调节。仪器状态良好：电极、盐桥、 用 标准缓冲液按规定严格校准测定时间数据记录精度2021/7/20 星期二

14、36实验操作标准化例盐酸罗匹尼罗酸度检查申报单位自测： 4.25申报标准中限度: 3.55.0药检所复核结果：示值不稳，向上飘移超过上限，达5.5原因：方法、操作2021/7/20 星期二37旋光度测定法含有某些光学活性的化合物的液体或溶液能使直线偏振光的平面向左或向右旋转，此种旋转在一定条件下有一定的度数，称为旋光度。在20度时，当钠光源的D谱线（589.3nm) 光通过长1dm、每1ml中含1g溶质的溶液时，测得的旋光度即为比旋度。是一物理常数，反映物质的光学活性和纯杂程度。也可用于某些药物的含量测定。2021/7/20 星期二38旋光度测定仪器校准：标准石英旋光管比旋度测定：测定温度：2

15、00.5 。螺帽不宜旋得过紧,以免产生应力造成误差。配后及时测定*溶液浓度较低的，应用2dm的旋光管测定读数：重复三次，取平均值，结果：按无水物或干燥品计算2021/7/20 星期二39旋光度测定D-葡萄糖分子中有4个不对称碳原子，具有旋光性，因有-型，-型以及醛式3种异构体。在未达到平衡前，葡萄糖的旋光度是不稳定的，需放置4.5h才能使这一种互变异构体达到平衡。葡萄糖的测定中配成溶液（10%)后，要加入0.2ml氨试液可加速达到平衡。对于10或10以下的葡萄糖注射液因已放置一段时间，故测定含量不需加入氨试液。遇类似情况应考虑周全。2021/7/20 星期二40非水溶液滴定法 以非水溶液为介质

16、，可改变物质的酸碱强度，使在水中不能进行完全的滴定反应得以完成；或可增大有机物的溶解度。用于测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐；或有机酸的碱金属盐类的含量。2021/7/20 星期二41非水溶液滴定法10ml滴定管，分度值要精密，如0.05ml所用仪器要充分干燥滴定液按规定配制、标定、贮存滴定液需严格标定：平行3份，酸滴定液标定与复标的相对偏差均不得过0.1%；碱滴定液的不得过0.2% 高氯酸滴定液的含水量应为0.010.20%应在同条件下作空白实验，对滴定结果进行校正。2021/7/20 星期二42非水溶液滴定法 配制高氯酸滴定液和溶剂用的冰醋酸含水量对滴定突跃和指示剂变色敏锐

17、度均有影响，在使用前应做空白试验：取510ml冰醋酸，加结晶紫指示剂1滴，应为紫色；加高氯酸滴定液（0.1mol/L)0.01ml，指示剂应转变为黄绿色，若变为蓝色，则表示有水分超标，应测定含水量，然后准确加入计算量的醋酐脱水 冰醋酸有挥发性，滴定液应贮存在棕色瓶中密塞保存。滴定管上部应取一个干燥小烧杯覆盖以防止挥发。 2021/7/20 星期二43非水滴定法指示剂不宜多加，12滴为宜；终点以点为滴定突跃来确定。滴定速度不宜太快，到终点后稍待一会儿再读数。冰醋酸凝点为18，滴定温度宜控制在201 。高氯酸滴定液的膨胀系数为0.0011，应注意校正滴定温度与标定温度相差10时应重新标定。2021

18、/7/20 星期二44非水溶液滴定法供试品如为氢卤酸盐，应在加入醋酸汞试液3 5ml使形成不解离的卤化汞后，再进行滴定。如为硝酸盐，需用电位滴定法指示终点。因为硝酸可使指示剂退色，无法观察终点。2021/7/20 星期二45非水滴定法 必须记录滴定液标定时的温度、浓度；记录测定样品时的温度，必要时对滴定度进行校正。每个供试品应测定两份以上。原料药测定结果的相对标准偏差应不超过0.15%0.20% 高氯酸滴定液变黄，系高氯酸分解所致，不可再用。2021/7/20 星期二46重金属 含葡萄糖的注射液:重金属限度一般以葡萄糖的含量计算，标准铅溶液的用量须根据限度值计算确定，以葡萄糖注射液为例： 取本

19、品适量(约相当于葡萄糖3g), 按葡萄糖含量计算，含重金属不得过百万分之五。 标准铅溶液(10g/ml)用量的计算: V=3510-6/(1010-6)=1.5 (ml)2021/7/20 星期二47重金属其他注射液重金属一般以体积计算。 例: 氯化钠注射液：取供试品50ml,. 含重金属不得过千万分之三。 标准铅溶液(10g/ml)用量计算: V= 310-750/(1010-6)=1.5(ml)2021/7/20 星期二48干燥失重条件：常压：105 减压，20mmHg以下，干燥剂应保持有效状态恒重：连续两次干燥或炽灼后的重量差异100mg 0.1mg 10100mg 0.01mg 1g

20、0.05% 最大日服剂量 鉴定限度 10mg2g 0.2% or 2mg TDI 2g 0.10% 最大日服剂量 质控限度 100mg2g 0.2%or2mg TDI 2g 0.15% TDI: total Dailly Intake 2021/7/20 星期二130仿制药杂质限度应与已上市药品（首选原开发厂的）进行全面的质量对比及稳定性考察。根据制备工艺和考察结果并参考已有国家标准确定杂质检测方法和限度。无法获得同品种药品标准的，杂质限度可参考同一药物其它剂型的标准或设定为已上市产品实测值的两倍以内。如发现新的杂质应注意有无安全性隐患，必要时通过安全性研究确定合理的限度。 2021/7/20

21、 星期二131质量标准的规范化热原或细菌内毒素检查剂量应合理有据，应考察细菌内毒素检测方法的可行性，可能的话予以采用。 2021/7/20 星期二132质量标准的规范化12、实验用溶剂的选择与协调 应根据溶解度实验结果合理选择溶剂，避免脱节。原则上应低毒、易得、经济。2021/7/20 星期二133质量标准的规范化13、供试品取样量 ：应具代表性并满足精密度的要求； 制剂取样量宜按规格所用成分来表达 ，如：取本品细粉（约相当于XXXX 25mg)精密称定。2021/7/20 星期二134质量标准的规范化14、溶液的配制：无论振摇还是超声，条件要合理有据，不要随意限定。 如：振摇30分 超声20

22、分 2021/7/20 星期二135质量标准的规范化15、供试液浓度 应使测得值或计量值（峰面积、吸收度、滴定液体积等）可靠、准确。 酸碱度、溶液的澄清度与颜色检查浓度均需合理设计。 2021/7/20 星期二136质量标准的规范化16、溶液的配制 “精密”与否应与检测项目的精度要求相匹配。17、进样量：GC 取顶空气进样，一般1ml； HPLC 用 loop进样，一般20ul2021/7/20 星期二137质量标准的规范化热原或细菌内毒素检查剂量或限度均应合理有据，根据临床人用计量折算，并应进行相应的方法学验证。细菌内毒素法应进行干扰性试验，考察可行性。微生物限度检查: 也需进行方法学验证！2021/7/20 星期二138质量标准的规范化规