大鼠二型糖尿病造模方法

1、大鼠 2 型糖尿病模型建立方法讨论专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号： 150517摘要：据国际糖尿病联合会(InternationalDiabetesFederation ， IDF)估计，现在全球约8.3%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至5.92 亿。在 2013 年，全球约有3.82 亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为1.14 亿。糖尿病导致约510 万人死亡，平均大约每 6 秒钟就有1 人死于糖尿病。2012 年 1 月 9 日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国 18 岁及以上居民糖尿病患病率

2、为2。 6%， 60 岁以上老年人患病率高达19.6%。因此，为治疗糖尿病建立简单、 稳定、 经济的动物模型非常重要。因 2 型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2 型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g 240g 之间的雄性SD 大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2 型糖尿病模型较理想。关键词： 2 型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ，糖尿病( diabetes )是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、

3、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等1 。糖尿病分为1 型糖尿病 ( Type 1 diabetes ) 和 2型糖尿病 ( Type 2 diabetes )两种， 1 型患者因自身免疫 细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2 型糖尿病细分

4、为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90% 95%属于2 型糖尿病。2 型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病(non-insulin-dependent diabetesmellitus ， NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两类。主要表现为在基因缺陷基础上的组织的胰岛素抵抗（ IR） 、 胰岛 细胞机能障碍导致胰岛素分泌相对不足，区别于自身免疫

5、 细胞破坏所致的1 型糖尿病 2,3 。 IR 是由遗传和环境因素导致的，机体对胰岛素生理作用的反应性降低，即胰岛素促进葡萄糖摄取作用受损，导致代偿性胰岛素分泌增多，其重要标志为高胰岛素血症。主要表现为外周组织对胰岛素敏感性下降，以及对葡萄糖的利用障碍4 。致 病 机 制 主 要 有 ： 遗 传 缺 陷 、 获 得 型 器 官 官 能 障 碍 （Acquired OrganDysfunction） 和生活习惯三大因素。糖尿病是多基因相关的疾病，可能存在很多糖尿病易受性基因2 ，只有如线粒体基因组缺陷和某些特殊糖尿病可以较明确的用基因遗传解释1。 近年来，生活习惯的影响愈加显著，不良的生活习惯导

6、致、加重胰岛素抵抗，削弱胰岛素分泌从而引发糖尿病，过度肥胖和胰岛素抵抗伴随的过量的脂肪酸会联合过高的血糖使 细胞功能进一步恶化。中国农村的糖尿病发病率为0.1% 0.2%，而城市超过5%5。2 型糖尿病特征：病程前期长；中老年人群高发；血浆胰岛素水平仅相对降低， 糖刺激后延迟释放（有时肥胖病人空腹血浆胰岛素基值可偏高，糖刺激后胰岛素亦高于正常人，但比相同体重的非糖尿病肥胖者为低）； HL（白细胞抗原）A、ICA（胰岛细胞抗体）呈阴性；胰岛素效应低；可用口服抗糖尿病药物控制血糖3 。降糖药物作用不佳时可使用胰岛素9 。 2 型糖尿病患者通常需要长年服用降糖药物， 常用一线降糖药只针对消除血糖高现

7、象，未从病因着手，因此患者依然会出现胰岛细胞功能逐渐下降和各种并发症，患者生活质量较低，寿命缩短，经济压力大。因此，为能更深入研究糖尿病的发病机理、潜在治疗因素；更好的创新、研发治疗 2 型糖尿病药物，构建尽可能与人类有相同2 型糖尿病（T2DM）特点的，简单、稳定、经济的动物模型有重要意义。一、模型1.1. 造模方法1、 2 型糖尿病实验性动物模型通常用物理或化学方法致胰腺或胰岛 细胞损伤，从而使胰岛素分泌功能发生障碍，造成胰岛素缺乏6 。以下为常用造模法：（ 1）、催肥法：通过对动物模型使用药物刺激（如注射金硫葡萄糖），使其贪食、嗜睡，逐渐提高实验动物的体重，达到增肥目的。并得到高血糖、高

8、胰岛素血症和有胰岛素产生抵抗的动物模型。但此方法成模率低，动物死亡率高。（ 2）、部分胰腺切除法1889 年 Minkowski 切除犬胰腺成功制作出糖尿病的模型。 但造模需手术且不稳定因素多。只从单一方面展现治病因素。现使用较少。( 3)、化学诱导法：此类方法操作简单，成本较低，较好控制应用较多。常见三类：四氧嘧啶(Alloxan )和链脲佐菌素(streptozotocin ， STZ)：四氧嘧啶可抑制葡萄糖激酶和诱导活性氧簇，从而诱发糖尿病。STZ已不对人使用的广谱抗生素，对胰岛 细胞有高选择性毒性作用7,8 。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ( NAD)和小剂量STZ 模型： NAD 为抗氧化剂

9、清除体内自由基作用从而而降低STZ对胰岛 细胞的细胞毒性。成年Wistar 大鼠先腹腔注射NAD， 15min 后尾静脉注射STZ，形成血浆胰岛素水平维持在正常水平，而伴有稳定的非空腹高血糖症的2 型糖尿病模型9 。STZ诱导糖尿病：大剂量给予STZ诱导成年大鼠1 型糖尿病模型；小剂量给予STZ诱导成年大鼠2 型糖尿病模型。单次较大剂量STZ(80 100 mg/kg)诱导新生大鼠成年后发展为2型糖尿病。用来研究有关于细胞的再生、 细胞功能衰减及胰岛素作用缺陷的机制10。但单一化学药物通常需较大剂量，毒副作用大，容易引起动物死亡。( 4)、高糖高脂联合STZ法：高糖高脂饮食诱导大鼠胰岛素抵抗，

10、之后注射低剂量STZ破坏部分胰岛 细胞功能。胰岛 细胞由于胰岛素抵抗等因素进一步损害， 发展为胰岛素分泌功能失偿，出现葡萄糖耐量受损，发展为 2 型糖尿病11， 12。此方法构建的模型可以较好的模拟人类II 型糖尿病的特点和发展情况，并且成本较低，操作方便12,13,14 。动物选择诱发糖尿病的机理有种属差异，不同物种之间的诱发机理差别很大。可用做糖尿病模型的动物种类包括猴、小羊、狗、兔、大鼠、小鼠、仓鼠等，其中鼠类应用最多。除以上实验性2 型糖尿病鼠类模型外，另有两大类：(1) 自发性 2 型糖尿病模型；(2) 转基因动物模型15 。自发性糖尿病动物模型在自然条件下或基因突变发生通过遗传育种

11、保留的动物模型。疾病的发生、发展与人类糖尿病非常相似，应用价值高，但较少考虑环境因素，来源较少，种类有限，价格昂贵。ob /ob 小鼠：瘦素基因缺乏，常用于减肥药和抗糖尿病药物的研究和检测。db/db 小鼠：瘦素受体基因缺陷，发病过程与人类二型糖尿病非常相似，出生约一个月后逐渐出现肥胖、高血糖、高血脂、糖尿等糖尿病症状，研究中应用较多。KK 糖尿病小鼠：胰岛素不敏感，对葡萄糖耐量小，糖尿病发病率高，有轻度胰岛素抗性，易表现糖尿病肾病特点。特点为：轻度肥胖、高血糖症、高胰岛素抵抗NSY( Nagoya-shibata-yasuda) 小鼠：具有年龄依赖性，糖尿病发展速度较缓慢。给予高脂食物能够加

12、速其发生过程，且会出现胰岛素分泌不足及胰岛损伤。其他： Zucker 大鼠和非肥胖自发性2 型糖尿病大鼠：GK( Goto-Kakizaki)大鼠， CD( Cohen diabetic) 大鼠。转基因动物模型已有多种转基因或基因剔除小鼠糖尿病模型。相关基因位点：胰岛素受体( insulin receptor ， IR) 、胰岛素受体底物( insulin receptor substrate ，IRS)：IRS-1 、 IRS-2、胰岛素分泌相关的GLUT-2、胰岛素样生长因子-1 受体、葡萄糖转运蛋白GLUT-4、过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR- 等 1。二、高糖高脂饮食联合STZ法材

13、料试剂链脲佐菌素(STZ)是从无色链霉菌提取出的广谱抗生素，可抗菌、抗肿瘤但因对胰岛 细胞具有高度选择性的杀伤毒性6 已不使用。STZ 注射后迅速作用于胰岛 细胞的特异性毒性、对机体毒性较小使其成为国内外广泛采用的糖尿病动物模型化学诱导剂16,17 。STZ引起的糖尿病的机制未完全清楚，主要为DNA和线粒体破坏：含亚硝基， 可诱导一氧化氮的合成，通过一氧化氮(NO)和自由基两种途径损伤胰岛 细胞 DNA，增加胰岛 细胞的氧化侵袭，诱导多聚ADP核糖基化作用，消耗 细胞内NAD+和 ATP，导致 细胞大量坏死4， 5 ；经葡萄糖转运体2(GLUT2)进入 细胞造成DNA烷基化损伤，诱导多聚ADP

14、核糖基化作用3 。胰岛 细胞损伤后，激活自身免疫，胰岛 细胞受免疫攻击21,8 。同一种系动物中STZ致 细胞损伤程度取决于STZ剂量，低剂量诱导大鼠胰岛素细胞(INS-1 )调亡，高剂量致 细胞坏死 19。给药途径为：静脉注射 (iv) 、 皮下注射 ( sc) 、 腹腔注射 (ip) 、 心内注射 ( ic )等 11。因腹腔注射操作容易、准确快速，现多采用腹腔注射法。高脂饮食使动物肥胖，胰岛素所需量增加， 细胞因过度负荷致细胞衰退，出现高血糖、高血脂等糖尿病症状19。动物（ 1）、大鼠品系、性别、年龄（体重）均有影响。 Wistar 大鼠成模率低于SD大鼠且死亡率均高于SD大鼠20； 杨

15、亦彬等人报道： wistar 大鼠空腹成模率为62.5%， SD鼠为87.5%，非空腹组成模率仅10%，未成模大鼠空腹下追加小剂量STZ不能成模。成模鼠肾胰显示特征性改变。不同时点血糖值差异大21。年龄影响大鼠对STZ的敏感性，现成年大鼠模型多用200 250 g 的大鼠制备 1。雄性大鼠比雌性大鼠成模率高，稳定性好，耗时短。单纯高糖高脂饮食喂养的雄性、雌性大鼠，血糖血脂无差异，但注射STZ后，雌性鼠对STZ敏感性弱于雄性鼠，雄性大鼠血糖升高并稳定在较高水平，而雌性需要再一次注射STZ，模型才能相对稳定1,22 。（ 2）、成模后动物状态：糖尿病SD大鼠在注射STZ后第2 即逐渐出现多饮、多食

16、、多尿和体重减轻的“三多一少”症状，且可以一直维持到实验结束。随着病程的发展，逐渐出现毛发竖立无光泽、脱毛、蜷卧拱背、活动减少、伤口易感染和白内障等表现，严重者有尾部僵硬、烂尾、趾端破溃感染16,22 。胰腺组织变化普通大鼠的胰腺外分泌细胞及胰岛内细胞形态正常，分界清楚。注射STZ的糖尿病大鼠，胰腺外分泌细胞充血，分界不清，明显炎性浸润，细胞核破碎、溶解；胰岛内细胞大量破裂，细胞核变形溶解，残存细胞核数量少，明显分布不均11 。胰岛变小，密度减低，胰岛分布稀疏，胰岛细胞数量减少、肿胀，胞质着色浅，细胞核固缩20 。应注意，建模5 个月后，大鼠会出现食欲不振、极度消瘦，精神萎靡，行动迟缓，饮水量

17、、尿量明显增加16。应在适当时间遵循关于善待实验动物的指导性意见进行适当处理并在试验后进行安乐死23 。指标测量除以上描述大鼠成模后体征状态变化，大鼠项指标也会出现变化。基本变化为：建模后约1 个月，大鼠各指标异常，空腹血糖值、胰岛素含量、三酰甘油及总胆固醇呈逐渐上升趋势、胰岛素敏感指数呈逐渐下降趋势至实验结束16。 说明模型存在胰岛素抵抗和糖脂代谢紊乱。指标变化情况22,11 ：血清中胰岛素（INS）空腹血糖（FBG）：FBG 7.0mmol/L 或FBG 11.0mmol/L胰岛素敏感性指数（ISI） ： ISI= ln 1/（FBG INS） （ HOMA法）24低于正常动物（说明胰岛素

18、抵抗）。血浆胰岛素（FINS）：升高甘油三脂（TG、 CHO）：升高胆固醇（TC）：升高游离脂肪酸（FFA）：升高低密度脂蛋白- 胆固醇（LDL -C） ：升高高密度脂蛋白- 胆固醇（HDL -C）：降低糖化血红蛋白（HbA1c）：红细胞内的血红蛋白与血糖不可逆结合产物胰腺中胰岛素的储存量：减少，40%25 。郭学军等报道，葡萄糖耐量测试（OGTT）比空腹血糖监测更有诊断意义：实验前禁食12h，用20%葡萄糖溶液（2g/kg） 灌胃，于空腹、服糖后30、 60 和 120min定时鼠尾采血测定血清葡萄糖含量24 空腹血糖高于7.00mmol/L，和试验后2 小时内随机血糖高于11.10mmol

19、/L 即为糖尿病20。血清胆碱酯酶活性低，存在肝代谢功能异常26 。成模与模型稳定性因 FBG 7.0mmol/L 时糖尿病微血管并发症发生的危险性明显增加，1997 年美国糖尿病协会建议将糖尿病诊断标准降至7.0mmol/L19。之后有学者提出FBG不够全面，建议将餐后随机血糖纳入到成模标准，随机血糖11.1mmol/L 纳入成模标准27 。造模组中以FPG 7mmol/L 作为成模标准的成模率比以随机血糖11.1mmol/L 作为标准的成模率少很多28。因此符合体征如上文描述伴且有“三多一少”症状；空腹血糖高于7.00mmol/L，和OGTT试验后2 小时内随机血糖高于11.10mmol/

20、L；胰岛素敏感指数显著低于正常大鼠或单高糖高脂喂养大鼠的对照组（P 0.05） ，也显著低于自身注射STZ前的水平，明模型组大鼠已产生胰岛素抵抗。并且各指标稳定2周以上者则说明成功诱导糖尿病模型28,25,29 。 大鼠在造模后48h 时体重较造模前明显减少的特点，可以在尾静脉采血测血糖前大略估计成模率30 。2型糖尿病动物模型在STZ注射后的7天后到实验结束或给予治疗药物之前，FBG水平一直很高，且维持稳定；同时，ISI 仍明显低于正常对照大鼠（存在胰岛素抵抗）。并始终有三多一少特点，可以认为2 该模型长期稳定24,18 。2.3 讨论影响因素成模后因注意将疑似1 型的大鼠尽量排除出组。1

21、型糖尿病模型组一次成膜，血糖升高效果一直非常稳定，维持到实验结束，而且在实验过程中出现明显高血糖损害症状，如眼部损害(眼底出血、失明)，坏尾及死亡等；2 型糖尿病模型组则需两次甚至三次给药，同时其血糖在第一次给药后有所恢复，再次给药才逐渐稳定。2 型糖尿病主要病变是胰岛素抵抗，胰 TOC o 1-5 h z 岛病理改变大都较轻，血浆胰岛素水平有双向变化，即有时增高或分泌延时，高血糖及低血糖可交替出现31，从而血糖也一直低于1 型糖尿病模型26。STZ 对大鼠体重有较大影响。注射STZ2 后，模型大鼠体重会出现下降，小剂量 STZ 注射后大鼠胰腺 细胞破坏，迅速出现高血糖、多尿等代谢紊乱症状，致

22、使体重下降22,19 。并且，饲料中油脂含量过高加上大鼠分泌的胆汁不足以把大量的油脂转化吸收，使TG低于正常大鼠19。2 型糖尿病具有的胰岛素抵抗和胰岛素分泌障碍两要素，按表现先后和轻重可将病程分为三期：一期， 有胰岛素抵抗和高胰岛素血症，血浆葡萄糖得以维持正常；二期，胰岛素抵抗加重，虽有高胰岛素血症，但胰岛素愈高，受体愈不敏感，虽有高胰岛素血症，仍出现餐后高血糖症；三期，胰岛素抵抗仍存在，但胰岛素分泌降低，导致空腹高血糖症。胰岛分泌功能会随持久的高血糖毒性作用进一步恶化。通过此标准可划分模型所处的病程3 。肥胖是一种典型的环境因素与遗传因素相互作用导致能量摄入与消耗失衡所造成的慢性疾病。在同

23、样的饮食条件下，有些人容易发展成为肥胖，而有些人则仍能维持正常体质量。高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素方法中，高脂饮食仅能诱发一部分大鼠发生胰岛素抵抗和肥胖，另一部分则不发生胰岛素抵抗和肥胖 28 。在注射小剂量链脲佐菌素前，食源性肥胖性大鼠血糖虽无明显升高，但体质量、血脂和血清胰岛素浓度显著上升，胰岛素敏感性显著下降，即产生胰岛素抵抗28 。张松筠等报道：实验中50 只高脂饮食大鼠仅24 只出现明显的摄食增加，变的肥胖，同时伴有高胰岛素血症和胰岛素抵抗纳入食源性肥胖组，其余26 只无明显体质量增加和胰岛素抵抗。虽然SD大鼠对食物营养成份敏感，但存在一定易感性差异，因此， 仍有一部分大鼠的摄

24、食量明显低于食源性肥胖大鼠，维持正常体质量，具有肥胖抵抗的特性21 。 这类大鼠成模率较低即使最终成模，也更加类似 1 型糖尿病。因此， 建议先筛选食源性肥胖大鼠作为2 型糖尿病造模对象。但由于两种大鼠几乎各占一半且筛选时间过长导致造模费用过高并用时过长28 。 2 型糖尿病的形成与环境因素造成的氧化应激、自由基防御机能紊乱密切相关。 放射线对细胞的生物化学损伤主要是电离辐射导致多种自由基对细胞的功能和结构损伤。一些患者的血糖空腹期7.0mmol/L， 餐后 2小时11.1mmol/L，口服糖耐量试验(OG TT)结果介乎糖尿病与正常界限之间，称之为葡萄糖耐量减退 （impaired gluc

25、ose tolerance ， IGT）。表现为：血糖偏高，但未达糖尿病标准。 这类患者如不及时干预约有约三分之二可转变为糖尿病3 。 IGT 胰岛素抵抗和氧化应激引起2 型糖尿病的发生发展 3 。奚苗苗等将高脂高糖、缺失抗氧化剂和辐射产生的氧化损伤与链脲佐菌素streptozocin STZ 促进超氧自由基形成的自由基毒性相结合。辐射对大鼠造成了明显的自由基损伤，照射组中的氧化损伤指标如：丙二醛（MDA） 、晚期糖基化终末产物（AGEs）含量升高，超氧自由基的清除剂（SOD）的活性下降。氧化应激诱发胰岛素抵抗，胰腺必需分泌足够高的胰岛素来克服胰岛素抵抗，长期的高胰岛素分泌，导致 IGT 的发

26、生， IGT 造成的血液黏度升高、微血管灌注不良进一步促进自由基的形成，加重了氧化损伤程度25- 10 。升高的血糖水平加之机体的氧化应激环境，能够加速 AGEs 的生成， 2 型糖尿病患者的血管病变进展迅速与AGEs 影响血管壁的自稳态有关25,32 。从而，提出在糖高脂饮食联合小剂量STZ造模时辅以抗氧化剂的去除，可以使模型对葡萄糖刺激的反应更接近2 型糖尿病患者胰岛素分泌的两相性特点，同时胰腺中胰岛素也有一定的贮存量25 。2.3.2 剂量在国内外报道中STZ在 25mg/kg到 45mg/kg的小、中剂量之间成模效果较好。成模大鼠均具有多饮、多食、多尿、体质量减轻等表现。胰腺破坏超过4

27、0%时，才会出现高血糖症，而大鼠之间存在个体差异，所以，同样低剂量STZ注射，可表现出不同程度的高血糖症18。其中，单词注射STZ剂量在25mg/kg 至 35 mg/kg 之间长期稳定性较差且成模率较低，但对大鼠毒性伤害较小，单词注射STZ剂量在35 mg/kg至 45mg/kg STZ之间，成模率高于25mg/kg 至 35 mg/kg 之间，且死亡率低于剂量达到50mg/kg的模型， 血糖能维持在较高水平且稳定性较好11 ， 糖耐量异常和空腹糖耐量受损情况的指标较稳定19。也有研究人员使用两次小剂量注射STZ建立成模率较高、稳定性较好且死亡率较小的2 型糖尿病模型33， 20。胰岛中 细

28、胞的损伤激活了胰腺导管中的干细胞，从而影响实验动物成模的稳定性， 小剂量连续应用链脲佐菌素可以克服胰岛 细胞代偿性增殖的影响，同时， 实验动物成模后应继续予以高糖高脂饲料喂养，可以使血糖逐渐升高，长期高糖血症的糖毒性会损害胰岛 细胞， 导致 INS分泌下降，达到维持2型糖尿病动物模型稳定的效果34 。多次小剂量给予 STZ 不会造成胰腺胰岛素水平的急剧下降，大鼠胰腺中胰岛素的量可以维持在略小于40%处，胰腺保留一定分泌胰岛素的功能，这一点与2型糖尿病患者的临床症状相似25 。 这种 2 型糖尿病大鼠模型的特点为：链脲佐菌素的剂量很低，不会引起胰岛B 细胞严重破坏和其它脏器的损坏（ 小剂量链脲佐

29、菌素引发凋亡，大剂量链脲佐菌素则引起胰岛B 细胞坏死 ） 28,35 血糖持续升高， 提示该模型稳定和有效。成功模拟了2 型糖尿病的自然发病过程，在长期胰岛素抵抗之后胰岛B 细胞失代偿性功受损，胰岛素分泌减少。28 。2.3.3 动物饲养护理造模后大鼠体质较差，死亡率很高，常常会影响实验结果。糖尿病是一种慢性炎性反应疾病，其固有免疫炎症细胞的功能障碍涉及全身各个系统36,37 创面愈合过程中巨噬细胞早期进入创面的数量减少，而晚期则持续停留于创面，同时伴随着生长因子表达量的下降和相关炎症因子表达量的改变，从而导致创面愈合困难。表现为M1型巨噬细胞的数量和比例增高21，且其分泌的炎症因子水平上升，

30、 但其刺激活化后的炎症因子表达能力和吞噬能力却明显减弱 6， 22， 27 。刘宸等人实验显示：糖尿病大鼠创面中的巨噬细胞早期浸润数量较低与创面愈合率具有正相关性，而晚期残留巨噬细胞数量较多且与创面愈合率具有负相关性。糖尿病状态下的巨噬细胞吞噬速度较正常慢5 倍以上30，可能导致创面坏死组织及调往细胞清除较慢持续趋化巨噬细胞浸润，同时已趋化至创面的巨噬细胞也无法顺利完成凋亡过程，并且由于炎症因子的分泌功能下降，糖尿病创面不能形成有效的负反馈机制抑制炎症反应，最终导致了愈合后期创面巨噬细胞的浸润增多、 炎症反应增强。而愈合晚期增强的炎症反应不利于创面的愈合，可以导致创面上皮化的失败和血管化的困难

31、，因此， 尾静脉采血法测量血糖时，要注意采血部位的局部消毒36 。建立 2 型糖尿病SD大鼠模型应注意方面：STZ要求保存在-20 冰箱中，其水溶液极其不稳定使用时，现用现配，加入0.1mol/L 枸橼酸缓冲液中，配好后在 10m i n 内用完，注意低温、避光放置30,38 ；用来造模的大鼠应有良好的营养状态及较强的抵抗力，体重应在190g -230g 之间为佳；动物饲养密度不宜过大（小于5 只 /笼）注射STZ前大鼠应空腹12h 以上；造模成功后大鼠尿量明显增加，故每天应换23 次垫料，以保持鼠笼清洁，干爽；造模后大鼠抵抗力较差，易发生肺炎等疾病，实验室应保持适宜、恒定的温度和湿度，并保持

32、良好通风；造模后大鼠需多次测量血糖，推荐采取尾静脉采血法，因眼眶静脉丛采血或断尾法取血法对大鼠损害较大（且断尾过于残忍已不采用）， 易合并感染，故要特别注意采血部位的消毒，避免感染30 。三、参考文献：李秀丽 . 2 型糖尿病的治疗药物研究进展J. 赤峰学院学报（ 自然科学版 ）,2008,01:123-125.金勇 , 朱勇 , 吴南翔 . 实验性链脲佐菌素诱导的大、小鼠糖尿病动物模型研究进展 J. 中国比较医学杂志,2009,03:80-82.蔡爽 . 糖尿病大鼠模型和抗糖尿病药物作用机制的代谢组学研究D. 沈阳药科大学 ,2009.刘微, 李冀, 盛波,等 . 胰岛 素 抵 抗 动 物

33、模 型 的 研 究 进 展 J.中 医药信息 ,2008,25(6):9.赵赛, 朱雄, 王尔华 . 口服 2 型 糖 尿 病 药 物 的 研 究 进 展 J. 安徽医药 ,2006,03:161-163.王波 , 邓强 , 黄韵蓓 , 张延威 . 2 型糖尿病动物模型研究进展J. 中兽医学杂志 ,2014,08:3-4.孙焕 , 陈广 , 陆付耳 . 介绍几种诱发性糖尿病动物模型J. 中国实验方剂学杂志 ,2007,13(02):65-68.Yang H, Liu R, Cui Z, et al. Functional characterization of 58-kilodalton in

34、hibitor of protein kinase in protecting against diabetic retinopathy via the endoplasmic reticulum stress pathway J.Molecular Vision,2011,17:78-849Larsen MO, Wilken M, Gotfredsen CF, et al. Mild streptozotocin diabetes in the Gottingen minipig. A novel model of moderate insulin deficiencyand diabete

35、s J. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2002 , 282( 6): E1342-1351.Lebovitz HE, Banerji MA. Treatment of insulin resistance in diabetes mellitusJ. Eur J Pharmacol, 2004,490(1-3):135-146余震 , 余州 , 吴骐而 , 石定 , 岳毅刚 , 彭湃 . 不同剂量链尿佐菌素诱导2 型糖尿病大鼠模型的研究J. 现代生物医学进展,2014,35:6835-6838+6854.何超群 , 杨婷媛 , 王连艳 , 张贵锋 , 齐峰 ,

36、 张嵘 , 马光辉 . SD大鼠II 型糖尿病模型的建立与评价J. 过程工程学报,2015,03:501-505.Srinivasan K, Viswanad B, Asrat L, et al. Combination of High-fatDiet-fed and Low-dose Streptozotocin-treated Rat: A Model for Type 2Diabetes and Pharmacological Screening J. Pharm. Res., 2005, 52(4): 313 320.Islam M S, Choi H. Nongenetic Mode

37、l of Type 2 Diabetes: A Comparative Study J. Pharmacology, 2007, 79(4): 243249.Qi F, Wu J, Hao D, et al. Comparative Studies on the Influences ofPrimary Emulsion Preparation on Properties of Uniform-sizedExenatide-loaded Plga Microspheres J. Pharm. Res., 2014, 31(6): 1566 1574.于洋 , 郑石磊 , 刘学政 . 链脲佐菌素

38、联合高脂饲养诱导2 型糖尿病大鼠模型的稳定性及其眼病特点J. 中国组织工程研究,2015,27:4389-4393.Sayin N, Kara N, Pekel G. Ocular complications of diabetes mellitus.World J Diabetes. 2015;6(1):92-108.董建一 , 王亮 , 王福金 , 李慧玲 , 詹红微 , 王靖宇 . 建立型糖尿病大鼠模型的探讨 J. 实验动物科学,2010,04:59-61+67.王嘉惠 , 沈小玲 , 符崇威 , 胡英杰 , 黄建昌 . 高脂喂养联合链脲佐菌素诱导大鼠 2 型糖尿病模型研究J. 吉林医学

39、,2011,04:629-633.郭学军 , 邹移海 , 吴凌 , 刘晓秋 . 链脲佐菌素诱导SD和Wistar 大鼠糖尿病模型的影响因素J. 中国实验动物学报,2008,04:301-304+331.杨亦彬 , 张翥 , 苏克亮 , 陈泽君 , 黄颂敏 . 链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型的方法学探讨J. 华西医学,2005,02:299-300.刘亚平 , 季虹 , 荣海钦 , 张丽萍 , 赵新波 , 邱占军 . 不同性别大鼠在2 型糖尿病造模过程中的稳定性J. 中国实验动物学报,2008,01:52-55.23The Ministry of Science and Technology

40、of the People s Republic of China. Guidance Suggestions for the Care and Use of Laboratory Animals. 2006-09-30.梁海霞 , 原海燕 , 李焕德 , 张松 , 向大雄 . 高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素诱导的 2 型糖尿病大鼠模型稳定性观察J. 中国药理学通报,2008,04:551-555.奚苗苗 , 文爱东 , 梁欣 , 陈宏莉 , 刘瑞 , 柏桦 , 海春旭 . 2 型糖尿病大鼠模型的建立及其氧化应激特征分析J. 中国药物与临床,2010,01:8-12.左风云 , 董岭 , 杨英 . 大鼠 1 型与 2 型糖尿病模型的对比研究J. 疾病监测与控制 ,2015,06:383-385.27Elena M, Ottavio G. Proposal open for discussion: defining agreed diag