2022年不同金属离子对酶活性的影响doc资料

1、不 同 金 属 离 子 对 酶 活 性 的 影 响学习 好资料金属离子对酶活性的影响 试验目的： 1、明白金属离子对酶活性的影响； 2、把握不同金属离子对酶活性作用结果的测量方 法 试验原理：酸性磷酸酯酶广泛分布于动物和植物中,植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中；它对生物体核苷酸、磷蛋白 和磷脂的代谢,骨的生成和磷酸的利用,都起着重要作用；磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶,通过水解磷酸 单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自 由的羟基；磷酸酶的作用与激酶的作用正相反,激酶是磷酸化酶,可以利用能量分子,如 物分子上；ATP ,将磷酸基团加到对应底本试验选用绿豆芽作材料,从

2、中提取酸性磷酸酯酶；以人工合成的对硝基苯磷酸酯（NPP）作底物,水解产生对硝基苯酚和磷酸；在碱性溶液中,对硝基酚盐离子在 405nm 处 光吸取剧烈,而底物没有这种特性；凡是能提高酶活性的物 质统称为酶的激活剂；无机离子和一些金属离子对酶有激活 作用,可以作为酶的激活剂；其中钾离子是酸性磷酸酯酶的 一种激活剂,它在酶与底物之间起了桥梁作用,形成了酶金属离子底物三元复合物,从而更有利于底物与酶的活性 中心部位的结合；而氯离子和钠离子对酸性磷酸酯酶的活性精品资料学习 好资料没有什么影响 .一些重金属离子如铜离子,对酶活性具有抑制 作用；试验用品：1、仪器：恒温水浴箱、试管架、试管、分光光度计、比色

3、皿、吸头、滴管、移液枪、移液管 2、试剂： 1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH 250ml 、 酸性磷酸酯酶、 pH5.0 的柠檬酸缓冲液1000ml 、2mmol/L FeSO 4 、2mmol/LCuSO4 、MnCl 22mmol/L 、MgSO 42mmol/L 、 KCl 2mmol/L EDTA、试验步骤：调零FeSOCuSOMnClMgSOEDTA KCl 6 空白4 4 2 4 对比0 1 2 3 4 5 7 NPP（ml）1 1 1 1 1 1 1 1 酶液ml 1 1 1 1 1 1 1 1 金属离 子（ml）1 1 1 1 1 1 1

4、1 精品资料学习 好资料NaOHml 3 3 3 3 3 3 3 3 注：反应均在37 度水浴箱中进行, 0 号管先加入1.0mlNPP 后保温 15 分钟,然后加入NaOH 3ml ,混匀后再加酶液 1ml ,在波长 405nm 处观看 OD 值,以 0 号管调零 试验结果试管号调零FeSOCuSOMnClMgSOEDTA KCl 空白4 4 2 4 对比0 1 2 3 4 5 6 7 OD0 0.680.301.260.350.340.340.28（abs）4 9 2 7 1 2 4 由试验数据得到的图标如下：精品资料学习 好资料试验作业：以各金属离子为横坐标,A405 纵坐标,绘制不同金属离子与酶活力曲线,观看金属离子与酶活力的关系,分析哪些是 酶活性激活剂,哪些是酶活性抑制剂；结果分析：通过试验组与对比组的OD 值对比可知,保证在相宜的温度、 pH 等外界条件下,再加入 1ml 2mmol/L 浓度的各种金属离子溶液,对酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用；它们对酸性磷酸酯酶激活作用