技术培训资料-无菌

1、 . . 6/6技术培训资料：无菌检查法无菌检查法是指检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料与要求无菌的其他物品是否染有活菌的方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现污染。无菌检查法直接接种法薄膜过滤法封闭式集菌仪开放式过滤器性状允许，应采用此法一、无菌检查前准备流程：无菌样品、缓冲液排水盘、硅胶管培养基集菌培养器营养琼脂平板浮游菌采样仪消毒剂脱去外层用消毒剂擦拭外表面经过传递窗紫外照射30分钟洁净室二、按照SOP要求更衣，进入洁净室后流程：关闭紫外灯，打开操作台调好风速用消毒剂擦拭操作台面与相关区域将培养基样品缓冲液排水盘等移入操作台将浮游菌采样仪移入洁净室根据

2、做样时间选择何时采微生物样安装无菌检验系统，进行无菌检查三、安装无菌检验系统无菌检验系统外观图见下图。，操作流程：1.装好排水盘与硅胶管，确保排水盘上两滤筒间间隔物已装好。2.取出集菌培养器，检查是否完好，并将其安装在排水盘上。3.将与集菌培养器连接的软管安装到泵头盖中。4.检查露在泵头盖两端的软管左右长度是否相等，确保其定位准确。5.左右拉动软管，确保其走势顺畅。如果软管不能自由被拉动，重复上面操作。6.确保泵头盖的右边软管与培养器不是绷紧状态，否则需将软管往右挪动点。7.通过“openclose”按钮将泵头盖关上在未选择“手动自动模式”前，泵头盖不能被关上。8.将培养器软管上针头扎入0.1

3、%无菌蛋白胨水冲液中，打开蠕动泵按下图箭头所指按钮打开关闭蠕动泵，旋转此按钮调节转速。泵入缓冲液40-50ml/桶，润湿3-5分钟。9.将红色帽子戴在培养器顶部，将针头从缓冲液中拔出，扎入样品中。将一定数量的样品通过、软管分别泵入到两个相互独立的滤筒中。在过滤过程中，不间断地螺旋状振摇培养器，液面低时快速，高时慢速振摇，防止润湿培养器上面的空气滤膜。在过滤过程中可将培养器上红色帽子拔下一会，释放些气体，防止泵入培养基时有抽不动现象。过滤过程中请勿打开泵头盖，防止软管中液体倒吸入培养器中，并将滤膜吸起。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品与冲洗液覆盖整个滤膜表面。海超加替沙星氯化钠注射液：

4、每柜冷点取20袋，每批任取一柜取20袋做阳性对照。海超加替沙星注射液：每柜冷点取20支，每批任取一柜取20支做阳性对照。田力转化糖：每柜冷点取10袋，每批任取一柜取5袋做阳性对照。尼莫地平：每柜冷点取20支，每批任取一柜取10支做阳性对照。10.样品过滤结束，根据每种样品SOP要求的冲洗量进行冲洗或不冲洗。冲洗量田力转化糖电解质注射液尼莫地平：过滤完不需冲洗，直接泵入相应培养基海超大输液：过滤完每张膜冲洗900ml，共1800ml。海超水针：第一次用50ml冲洗，以后每次用100ml，共11次2100ml。11样品过滤结束或冲洗液冲洗结束，关闭蠕动泵。将培养器上红色帽子拿去，底部的排液管口用黄

5、色帽子堵上，将冲洗液取下换上相应的培养基瓶。分别往两个培养器中泵入硫乙醇酸盐流体培养基与改良马丁培养基各100ml。加培养基时泵速控制在110-120分/转，防止速度过快培养基产生的泡沫浸湿呼吸器膜。泵一种培养基时，需将另一管在扎针处用夹子见下图中蓝色部分，标注clamp处。夹住。与时记录实验过程中发生的异常情况，以便偏差分析。12.培养基加好后停止泵，用夹子夹住靠近空气过滤器头软管，通过“openclose”按钮将泵头盖打开，取出软管。12.在夹子上部适当位置剪下软管，将软管开口端套在空气过滤器开口上。13.阳性对照阳性对照实验每周进行一次，并在“无菌培养观察记录”上记录；若一周内生产两种产

6、品或者更换产品时，则两种产品需分别取样进行阳性对照实验。按照上面1-12步骤做完后，拿出洁净区，在生物安全柜中接种含50-100cfu/ml阳性对照菌1ml。田力 转化糖电解质注射液、信坦 尼莫地平注射液、转化糖电解质注射液阳性对照菌为金黄色葡萄球菌。海超 加替沙星注射液、海超 加替沙星氯化钠注射液阳性对照菌为金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌。14.阴性对照阴性对照实验每天一次，若一天分上下午两次实验，则只需做一次即可。：按照上面1-8步骤做完后， 取同一批灭菌的0.1蛋白胨水溶液500ml进行薄膜过滤，后面步骤同11-12。四、无菌检验结束后流程：关闭无菌系统，清理工作台面按照SOP要求更衣出洁净室按照“洁净室室管理程序”对洁净室清洁消毒将实验废弃物、培养器、排水盘硅胶管等移入传递窗清理传递窗，将培养器放入相应温度培养用消毒剂擦拭传递窗，打开紫外灯照射30分钟清洗实验用品，填写相关记录硫乙醇酸盐流体培养基置于30-35培养14天，改良马丁培养基置于23-28培养14天。阳性对照：将集菌培养器置于30-35下培养，48-72小时应生长良好。五、结果判断：对所有培养管进行逐日观察。培养14天后，无菌生长判合格；有菌生长时，符合6项条件之一则进行复试，否则判定不合格。六、复试条件：1.试验环境与设备的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求；2.回顾无菌试验过程，发现有可能引