病原微生物应急检测

1、流行性病原微生物应急检测制度一、病原微生物引起的传染病我国传染病法规定的法定报告传染病分类：甲、乙、丙3类，从数量上共有39种，主要由病毒、细菌和寄生虫引起。(一)甲类传染病主要鼠疫和霍乱。(二)乙类传染病(1)病毒引起的：传染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感、新型甲型 H1N1流感、麻疹、病毒性肝炎、 艾滋病、脊髓灰质炎、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎。(2)细菌引起的：伤寒和副伤寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、肺结核、新生儿破伤风。(3)寄生虫和细菌：疟疾、血吸虫病、细菌性和阿米巴性痢疾。(三)丙类传染病(1)病毒引起的主要有

2、：流行性感冒、流行性腮腺炎、急性出血性结膜炎、手足口病、风疹及除霍乱、痢 疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病。(2)细菌和寄生虫引起的：麻风病、流行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、丝虫病、包虫病。(四)病原微生物引起的综合征1、急性腹泻综合征(1)细菌性腹泻：霍乱弧菌、志贺氏菌、大肠杆菌(肠毒素性和肠出血性)、沙门菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、艰难梭菌等。(2)病毒性腹泻：轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、埃博拉和其他出血热病毒等。(3)寄生虫性腹泻：痢疾阿米巴、隐抱子虫、贾迪鞭毛虫等。2、急性出血热综合征登革热病毒、汉坦病毒、克里米亚 -刚果热病毒、埃博拉病毒、拉萨热病毒、马尔堡出血热病毒、裂谷热

3、病 毒、南美沙粒病毒、婢传播的黄病毒、黄热病病毒等。3、急性黄疸综合征A, B, E型肝炎病毒、钩端螺旋体、黄热病病毒等、4、急性神经性综合征(1)细菌性脑膜炎：脑膜炎奈瑟氏菌、钩体、肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、大肠杆菌、李斯特菌等。(2)病毒性脑炎：乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎、狂犬病毒、肠道病毒、婢传播的脑炎病毒等(3)寄生虫性脑炎：锥形虫、疟原虫等。5、急性呼吸综合征(1)细菌性：炭疽杆菌、鼠疫杆菌、百日咳杆菌、白喉杆菌、 A群链球菌、TB、军团菌、支原体、衣原 体等。(2)病毒性：冠状病毒、流感和禽流感病毒、肺综合征汉坦病毒和腺病毒等。6、急性皮肤综合征水痘病毒、麻疹病毒、风疹病毒、肠道病毒

4、71、柯萨奇病毒A组16型、斑疹伤寒立克次氏体、炭疽杆菌、猴豆病毒、细小病毒 B19、基孔肯雅热病毒等。7、急性眼综合征腺病毒、肠道病毒、沙眼衣原体8、急性全身性综合征炭疽杆菌、鼠疫杆菌、布氏菌、伤寒沙门菌、钩体、 HIV、登革病毒、汉坦病毒、疟原虫莱姆病螺旋体。二、应急检测的目的和意义应急检测的目的和意义是1、识别暴发、确定病因2、确定传染来源3、确定传播链和流行范围4、发现新的病原微生物5、提供仲裁依据三、病原微生物的特点及其应急检测病毒不是完整的生物体，结构简单，需要再电子显微镜下才能看清楚。电镜是研究病毒和细胞相互作用的重要工具，但是在诊断实验室的使用却非常有限。要想直接用电镜观察检测

5、病毒，样品必须含有高滴度的病毒颗粒（106到107个/ ml）但也可通过样品浓缩和使用标记抗体提高敏感性。电镜主要用于不可培养的病毒检测，特别是病毒性胃肠炎病原体检测。细菌的诊断相对容易，培养也较方便。（一）病原微生物及其抗原和核酸的检测方法和初步结果报告时限1、分离培养（细菌：4872小时，病毒1428天）2、免疫荧光法（48小时）3、固相免疫分析胶体金法（3060分钟）4、酶联免疫分析（ELISA） （48小时）5、核酸扩增聚合酶链式反应（PCR）（48小时）6、实时荧光 PCR （34小时）7、核酸序列分析（1624小时）8、形态学诊断（2472小时）二）血清学抗体检测方法和初步结果报告

6、时限1、ELISA检测感染早期IgM抗体（48小时）2、ELISA检测感染急性期和恢复期IgG抗体（48小时）3、病毒抗体中和试验测定急性期和恢复期中和抗体（7天）4、血球凝集抑制检测病毒抗体（48小时）5、试管凝集试验检测细菌抗体（48小时）6、间接血球凝集抑制试验检测病毒抗体（48小时）7、补体结合试验（2448小时）（三）选择检验方法需考虑的因素1、疑似病原微生物感染的病理学知识2、病人感染的病程和采样时间3、各种方法对疑似病原微生物感染的适用性4、可用于检测标本类别（四）实验室结果的意义和解释1、病原微生物感染的实验室诊断需要多方面的信息，包括：对可疑病原体的致病机理的理解，对感染阶段

7、 的认识，被感染者的年龄和免疫状况等。2、病原微生物分离培养的成功与多个因素有关，包括：选择适当的标本，仔细收集标本以最大限度收集到 致病因子，标本的运输必须尽量保持病原体活性，减少污染菌的增殖等。3、如果从疑似病人的标本中分离到目标细菌和病毒，可以确诊。4、如果在疑似病人的标本中检测到目标细菌和病毒核酸，可以确诊。5、如果目标病原微生物感染的中和抗体或IgG抗体或其他方法测定的抗体滴度稳定维持在高水平，或者出现阳转血清抗体滴度，或是恢复期血清的抗体滴度比急性期有4倍或4倍以上的增长，则表明病人确有感染相应病原体。6、如病人血清或脑脊液标本中检测到目标病原微生物感染的IgM抗体阳性，表示有近期

8、感染、7、如果脑脊髓液标本或血清IgM抗体检测阴性，可能是因为患者体内的抗体还没达到可被检测的浓度，需结合发病和采样日期，进一步对患者的血清标本进行检测。三、应急检测标本的采集和运输（一）标本的选择1、为了说明病原体与某种特殊疾病的关系，标本应尽可能取自靶器官2、许多病原微生物感染的临床症状可以用来确定靶器官，以取得适当的标本3、分离立克次氏体的标本种类有限，主要是血液和内脏组织（二）采样器材1、无菌、耐低温、密闭带螺口盖的容器。包括尿杯和一次性离心管（1550ml）,适于盛装24mlVTM的标本收集管，25ml血清收集管2、无菌棉签和专用采样拭子3、无菌玻珠（直径5mm）每管加34个玻璃珠，

9、以便于将结合在拭子上的细胞释放出来4、注射器配26和27号针头，用于吸取囊泡液5、含抗凝剂的血液收集管（三）病毒运输液（VTM ）1、运输液可以防止标本干燥，在标本收集和接种的间隔期内有助于保持病毒活性，同时延缓污染菌的增殖。2、使用的VTM有多种配方，VTM既可在实验室自行配制，也可以购买商品化的，尽管综合性的研究不多，但使用不同的 VTM对选择的病毒的回收检测结果没有显著影响。（四）细菌运送培养基1、维持活力，不增菌的非营养性半固体培养基2、四种主要运送培养基：Stuarts Cary-Blair、Amies、 STGG（五）标本收集1、出现临床症状后尽可能早地采集标本，最好在没有进行抗病

10、毒和抗生素治疗之前采集。2、最易分离到病毒的时间是发病后 3天内，5天以后分离到病毒的机会将大大降低。病例死亡后应尽快采集尸解标本。3、收集立克次氏体培养标本应尽量无菌。4、详细询问病史，包括发病日期、临床表现、近期暴露史、动物和节肢动物接触史和叮咬史、近期到流行 区的旅行史和疫苗接种史。5、用于细菌血培养的标本应尽早采集，并注意无菌操作。（六）标本的运送、接收与保存1、专人负责标本运输2、新鲜的临床采集标本应在 4c条件下24小时内运送至实验室；未能 24小时内送至实验室的，应置-70 C或以下保存3、冻存的标本应使用干冰或液氮送检，低温送至实验室4、标本核对无误后置-70C冰箱保存，并做好

11、相应的记录（七）标本的盛装1、盛装标本的容器应坚固、密封、无菌2、容器的材料要求“两耐三防”：耐高（低）温耐高压、防水、防破损、防泄漏3、容器上贴规范的标签以利于识别4、样品的有关表格和/或说明应单独放置于防水的袋子里以防发生污染，不要绑在容器外 （八）容器的外包装1、外包装内有吸水性材料和干冰、热水袋等保温性材料2、外包装上应有生物安全标识（九）标本的接收1、大规模接收标本的实验在专用房间或区域进行2、接收由2人同时完成，接收人员应受过防护培训。明确所操作标本的潜在健康危害，采取防护措施。3、检查容器的外观和标签是否完整、标签与内容物：是否相符、是否有污染及容器是否破损等， 并登记标本接收登

12、记表，记录处置方法。4、对于容器破损、有液体外渗或怀疑污染的样品，可以拒绝接收，嘱其再次采集样品送检。（十）标本包装的打开1、标本应在生物安全柜中打开包装，同时备有适当的消毒剂以便处理可能出现的标本泄漏。2、操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩、眼罩和手套。（十一）标本的保存一一专人负责保存1、保存者需对照标本送检单，核对标本数量、送检状态、标本编号，并填写标本保存登记表。2、不同标本按照不同存放要求分类存放，同时填写标本存放登记表。5种常见标本分别是血培养标本、血清标本、尿液标本、痰标本和鼻咽拭子标本。（一）血培养标本1、用70%乙醇擦拭血液培养瓶，分别包装后于室温环境下立即送往实验

13、室（冬季需保温）；如果不能及时送检，置于室温，勿放冰箱2、标本接收单位在接到标本后， 首先应检查血培养物状态及运输温度记录，确认温度记录无误血培养物状态良好后及时进行培养（二）血清标本1、新鲜的血清标本可在4c条件下运输，冷冻的血清标本需在保持冻存的状态下运输2、需长期保存的标本应置于-70C冰箱（三）尿液标本1、新鲜标本在4c条件下运输，冷冻的标本需在保持冻存的状态下运输2、标本接收单位在接到标本后，首先应检查标本状态，填写标本接收登记表，并立即进行尿抗原检测3、需长期保存的标本应置于-70C冰箱（四）痰标本1、采用专用采痰盒采集痰液，并注意送检期间的安全防护2、标本需及时送检以避免干燥，不能及时送检者可暂存4 c冰箱内12小时。不可在室温下放置过长时间3、标本接收单位在接到标本后，首先应检查痰标本状态，填写标本接收登记表，确认痰标本状态良好后及时进行培养4、接收标准，目测：黄色、灰色、血性、铁锈色、浑浊、稠厚呈现团块状的标本为合格标本；而无色透明0.1ml痰液用接0.1ml痰液用接10个/低倍视野种环均匀涂布成2 x 2cm大小的涂膜，在显微镜下合格痰标本的涂片镜检，鳞状上皮细胞 白细胞25个/低倍视野，或两者比例小于 1 : 2.5为合格标本，可进行细菌培养（五）鼻咽拭子标本1、未能24小时内送至实验室的，应置-70 C或以下保存2、冻存的标