钙荧光指示剂

1、分子式：C51H50C12N2O23分子量：1129.85外观：红色粉末另 U名：Fluo 3-AM纯度：85%以上（HPLC）储存条件：-20P运输条件：室温Fluo 3-AM是一种检测细胞内钙离子的荧光探针。Fluo 3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是 当它与钙离子Ca2+结合后荧光会增加60至80倍，是目前最常用的一种钙离子荧光探针。激光共聚焦荧光 显微镜具有氩激光器，所以Fluo 3可被广泛使用于这种显微镜上。这种荧光信号发出来的长波也便于减小 对样品细胞的光损伤。Fluo 3也可用来检测紫外光照射下可裂解的螯合钙或其它形式的钙。Fluo 3-AM是 Fluo 3的一种乙酰

2、甲酯衍生物，通过培养，能够轻易进入细胞中。Fluo 3-AM （钙离子荧光探针）需用无水DMSO （anhydrous DMSO）配制。Fluo 3-AM是一种可以穿透细 胞膜的荧光染料。Fluo 3-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 3,从而被滞留在细胞内。Fluo 3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。50 Mg Fluo 3-AM 的配制DMSO ( Ml102030404450浓度(mmol/l)4.42.21.51.11.00.9操作说明(for Human T cells)*试剂：2 mM 的 Flu

3、o 3-AM/DMSOPluronic F127Hanks balanced salt solution (HBSS)HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mM glucose, 0.1% BSA, pH 7.4)操作：配制2mM的Fluo 3-AM/DMSO溶液即：将1mg Fluo 3-AM溶于442ulDMSO中(推荐现配现用)。Pluronic F127先用DMSO配制成20%(W/V)的溶液，室温保存。使用时加入到上述Fluo

4、 3-AM/DMSO 溶液至终浓度0.05%(W/V). Pluronic F127可以防止Fluo 3-AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。用 HBSS 稀释 Fluo 3-AM 溶液，制备 4 pM 的 Fluo 3-AM working solution o将 Fluo 3-AM working solution 加入细胞，在 37 C培养 20 分钟。加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。用 HEPES buffer saline洗涤细胞 3 次，然后用 HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成 1x105 cells/ml的溶液。37 C下

5、培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。观察 528 nm （excitation: 490-500 nm）时的荧光。*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。 染色实例：加载了 Fluo 3的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡。上图为细胞明场图和不同时间点（min）的比例成像，下图为影响Fluo 3荧光强度随时间的 变化。成像系统：Photon Technology International Inc,，显微镜 Nikon TE2000U， CCD 相机 QuantEM512S,软件 ERP。（北京师范大学细胞生物学研究所崔宗杰教授提

6、供照片）分子式：C51H50F2N2O23分子量：1096.94外观：橙红色粉末别名：Fluo 4-AM纯度:98%以上（HPLC）储存条件：-20C运输条件：室温Fluo 4是一种将Fluo 3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸 引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光 器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo 4的荧光强度比Fluo 3强1倍。由于 Fluo 4 与钙离子的亲和力和 Fluo 3 近似（Fluo 3：Kd=0.4 p mol / l、Fluo 4： Kd=0.36 p mol/l），所以使用上和Fluo 3

7、也基本相同，可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪等仪 器检测细胞内钙离子浓度的变化。Fluo 4-AM是Fluo 4的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易进入细胞中。AM进入细 胞后会被胞内酯酶所水解，产生的Fluo 4随后会和钙离子（Ca2+）结合并发出荧光。钙离子探 针、胞内荧光探针的种类繁多，根据不同的实验要求，实验者的选择性有很多。Fluo 4-AM （钙离子荧光探针）需用无水DMSO （anhydrous DMSO）配制。Fluo 4-AM是一种 可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo 4-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 4, 从而被滞留在细胞内。用二甲基亚飒（DMS

8、O） Fluo 4-AM配制为15 mM的原液,-20C避光密封保存。使用 前根据您实验的需要稀释成合适的浓度。试剂名称分子量规格浓度配制量Fluo 4-AM1096.941 mg1 mM912 gl50 gg1 mM45.6 gl例如:需要配制1 mM的原液，用45.6 p l的无水DMSO溶解50 p g的Fluo 4-AM就可以。注意事项：保存方法：1）保存产品时需要密封和保持干燥-20C保存。2）如果将产品配置好后，也需要密封干燥-20C保存。溶解液DMSO：使用新鲜、未开封过的无水DMSO（开封过的无水DMSO如果吸水，将会影响Fluo 4-AM的稳定性）。溶解后，尽可能在短时间内用

9、完。长期保存水气容易渗入试剂中。激发波长：495 nm发射波长：518 nm别 名:Fura 2-AM分子式：C44H47N3O24分子量：1001.85外观：黄色或橙黄色粉末纯度：98%以上（HPLC）储存条件：-20C运输条件：室温分 子式：C29H22K5N3O14分子量：831.99外观：黄色或橙黄色粉末别名： Fura2纯度:98%以上（HPLC）储存条件：室温运输条件：室温Fura 2是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一,Fura 2-AM（钙离子荧光探针）需用 无水 DMSO（anhydrous DMSO）溶解。Fura 2对Quin 2的荧光特性做了改进。1 p M F

10、ura 2结合后的信号强度相当于30 p M的 Quin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2 指示剂。Fura 2是一种使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设 备有很多，它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的 影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm和380 nm的荧光比率，比如，平滑肌收缩会 同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外，对于血管来说，340 nm的信号强度的增 加会因为血管收缩而趋向于变小，而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AM

11、是Fura 2的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易地负载到细胞中。Fura 2可以和钙离子（Ca2+）结合，结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光， 而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比 值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探 针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。Fura 2和钙离子结合后，最大激发波长为335nm（最 大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同），最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使 用的激发波长为340nm，发射波长为510nm。如果做双波长检测，则推

12、荐使用的激发波长 为 340nm 和 380nm。Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，最大激发波长为 369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进 入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2,从而被滞留在细胞内。CbUNH分子式：C32H26K5N3O12分子量：840.05外观：浅黄色粉末别名:Indo 1纯度:95%以上（HPLC）储存条件：-20C运输条件：室温Indo 1是一种经过改进的适用于比率法的钙指示剂、钙荧光探针。两个用于Indo 1比率法检 测的发射波长分别为410 nm

13、和480 nm。Indo 1适合使用流式细胞仪通过比率法检测，这样 可以测得双波长的荧光信号。有报道称Indo 1在进入细胞后的定位能力要强于Fura 2。Indo 1-AM是Indo 1的乙酰甲酯衍生物，它通过培养能够进入活细胞。分子式:C26H23K4N3O10分子量：693.87外观：浅黄色粉末别名: Quin 2纯度:95%以上（HPLC）储存条件:-20C运输条件：室温Quin 2能够和钙（logKCaY=7.1）形成稳定的荧光螯合物，但和镁却不行（logMgY=2.7）。 这种螯合物在525 nm的发射波长处有着很高的量子产量（0.14）, Quin 2的激发波长为339 nm,发

14、射波长为492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物，能够轻易地穿过细胞膜。 进入细胞后，酯结构立刻被水解，形成Quin 2。分 子 式:C40H43C1N4O11分子量:791.24外观：暗紫色固体别名:Rhod 2纯度:60%以上（HPLC）储存条件: -20 C运输条件: 室温在所有的钙离子指示剂中，Rhod 2荧光信号的波长最长。它具有和罗丹明类似的激发和发 射波长，分别为557 nm和581 nm。这样的激发波长使得我们很容易就能找到氩和氟光源的 激光。尽管有人认为Rhod 2的荧光信号仅仅将钙复合物的荧光增加了数倍，但是Dojindo 的Rhod 2由于具有很高的纯度，能有效地将钙荧光信号增加80-100倍左