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文档简介

1、DNS法测定发酵液中总糖含量3,5二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。DNS试剂的配方（3,5-二硝基水杨酸试剂）：称取酒石酸钾钠18.2g，溶于50ml蒸馏水中，加热（不超过50C）,于热溶液中依次加入3,5-二硝基水杨酸0.63g,NaOH2.1g（先配成溶液），苯酚0.5g,无水亚硫酸钠0.5g,搅拌至溶解完全，冷却后用蒸馏水定容至100ml,贮于棕色瓶中,室温保存。0.1%葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105C干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml,

2、冰箱保存备用。注意事项：在配制的过程中,如果操作不合理,会出现溶液变黑,或者有鸡蛋花一样的絮状沉淀出现。称取DNS（具体重量，按照你的配方来，下同），加水溶解，水浴45C；3逐步加入氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，直到溶液清澈透明；（a.药品中的氢氧化钠要配制成溶液；直接加颗粒，可能产生鸡蛋花；b.加入氢氧化钠溶液时,溶液的温度会上升，所以要慢慢加，不停地搅拌，同时溶液的温度不能超过48度；温度高了，溶液颜色变黑。）逐步加入四水酒石酸钾钠、苯酚和无水亚硫酸钠；（顺序最好不要更改！）继续45度水浴，同时补水，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解；（一定要有耐心地搅拌！）停止加热，冷却至室温，用水定容。储

3、存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7天后使用。有效期为6个月。（时间不忙的话，最好按照时间来操作，时间紧迫了，时间提前个几天，推后几天，也可以用的）操作方法】一、葡萄糖标准曲线的绘制管号112345678数量项目含糖总量管号112345678数量项目含糖总量(mg)00.20.40.60.81.01.21.41.60.1%葡萄糖标准液(ml)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸馏水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4DNS试剂(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：均在沸水浴中加热5min

4、立即用液动冷水冷却力口热冷却-蒸馏水(ml)光密度(d520)21.521.521.521.521.521.521.521.521.5将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计(520nm)进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。二、样品中含糖量的测定取7支大试管，分别按下表加入各种试剂：管号空白123456数量项目样品量(ml)01.01.01.01.01.01.0蒸馏水(ml)2.01.01.01.01.01.01.0DNS试剂(ml)1.51.51.51.51.51.51.5加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用液动冷水冷却蒸馏水(ml)21.521.521.521.521.521.521.5光密度(d520)将各管

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