动物细胞工程222

1、一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合 受精作用资料：动物细胞融合技术发展简史20世纪30年代，科学家们相继在肺结核，天花，水痘，麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。20世纪70年代，科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象，但是当时科学发展水平的限制，没有给1962年，日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。1965年，英国科学家进一步证实了灭活的病毒在适当的条件下也可以诱发动物细胞融合。后来科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。细胞融合技术不断改进，现在已广泛应用于细胞学，遗传学，免疫学，病毒学等多种学科的研究

2、工作中。2、原理：3、方法：生物法诱导方式物理法化学法仙台病毒紫外线丧失感染性：不感染细胞保留融合活性：诱导细胞融合1、概念：也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞的遗传信息的单核细胞，叫杂交细胞。细胞膜的流动性离心、振动、电激聚乙二醇灭活的病毒自主预习完成导学案“动物细胞融合”融合的原理：细胞膜具有流动性生物法融合过程灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面动物细胞相互凝聚细胞质融合细胞核融合不同DNA的两个细胞灭活的病毒融合有丝分裂两个完整的杂交细胞病毒表面的糖蛋白（酶）与细胞表面的糖蛋白发生作用细胞膜上蛋白质和脂质发生重排有丝分裂如何得到单个的动

3、物细胞？动物细胞融合的最终结果是？4、动物细胞融合的意义（1）突破了种间杂交局限，使远缘杂交成为可能（2）成为科研的重要手段 （细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和育种等领域）（3）是杂交瘤技术的基础 （为制造单克隆抗体开辟了新途径）动物细胞融合的成功案例生物种类细胞来源成功时间酵母菌-鸡原生质体-红细胞1975年人-胡萝卜腹水癌细胞-原生质体1976年人-小鼠纤维肉瘤细胞-畸胎瘤细胞1978年植物体细胞杂交技术与动物细胞融合有什么异同？融合前 融合时 融合后主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇）诱导方法用胰蛋白酶使细胞分散为单个用纤维素酶、果

4、胶酶去除细胞壁融合前处理细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。由什么细胞产生？已免疫的B淋巴细胞(浆细胞)，一个B细胞只能产生一种抗体体液免疫二、单克隆抗体传统的抗体的生产方法是怎样的？产量低、纯度低（混合抗体）特异性差传统方法生产的抗体有何缺陷？如何才能大量生产专一抗体？传统的抗体的生产方法：抗原刺激动物体内效应B抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一效应B细胞不能增殖，产生大量抗体米尔斯坦和科勒的设计方案B淋巴细胞（能产生专一抗体）

5、骨髓瘤细胞（能大量增殖）融合既能产生抗体又能大量增殖1984年诺贝尔生理学或医学奖创立抗原选择抗体学说，发明单克隆抗体技术 色萨米尔斯坦 阿根廷籍&英国 乔治科勒德国杰尼丹麦1.概念：由单一杂交瘤细胞经克隆（无性繁殖）得到的单一细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体，叫单克隆抗体。融合筛选克隆化培养二、单克隆抗体为何选择骨髓瘤细胞？能否用其他瘤细胞代替？融合后有几种情况？第一次筛选的目的是？筛选出的细胞有什么特点？都能产生我们需要的抗体吗？第二次筛选的方法是？单克隆抗体的后续培养方法有几种？实验前对小鼠如何处理？其意义在于？注意：第一次筛选：得到多种杂交瘤细胞第二次筛选：在多孔培养板上，每孔

6、只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出能产生特异性抗体的细胞群。单克隆抗体：由单一杂交瘤细胞经克隆（无性繁殖）得到的单一细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体，叫单克隆抗体。复习巩固单克隆抗体产生过程中，用到了那些细胞工程的技术？动物细胞融合，动物细胞培养为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？思考：单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？动物细胞融合、动物细胞培养技术因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。细胞同源越

7、近, 越容易融合.3、单克隆抗体的应用：作为诊断试剂（准确、高效、简易、快速）用于治疗疾病（主要用于治疗癌症）用于运载药物（生物导弹）将单抗与同位素、毒素、药物结合，制成“生物导弹”，利用单抗的导向作用，专一地杀死癌细胞。单抗的所有应用都与单抗的什么特点有关？特异性强 灵敏度高下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆制备过程的顺序连接起来。参考答案：巩固练习1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是 A、经过免疫的B淋巴细胞 B、没经过免疫的T淋巴细胞 C、经过免疫的T淋巴细胞 D、没经过免疫

8、的淋巴细胞A巩固练习2、动物细胞融合的目的中最重要的是 A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体 C、培育新品种 D、生产杂种细胞3、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是 A、诱导融合的方法完全相同 B、所用的技术手段基本相同 C、 所采用的原理完全相同 D、 都能形成杂种细胞 BD4、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是- ） A、由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B、由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C、由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D、由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D5、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 A、细胞系 B、细胞株

9、C、原代细胞 D、传代细胞6、动物细胞工程技术的基础是 A、动物细胞融合 B、单克隆抗体 C、胚胎移植 D、动物细胞培养AD7、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织、细胞 A、容易产生各种变异 B、具有更强的全能性 C、取材十分方便 D、分裂增殖的能力强D8、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A、培养基不同 B、动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C、动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D、动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。A 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预

10、期效果吗？为什么？4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。1、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC再见HAT培养基 H次黄嘌呤，A氨基喋呤，T胸腺嘧啶脱氧核苷，含以上三种物质的培养叫HAT培养基。 A能阻断正常细胞DNA合成。淋巴细胞能利用H合成DNA，而骨髓瘤细胞不能（缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶

11、）。 融合(未融合)的B淋巴细胞不能在普通培养基生长。 融合(未融合)的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被A阻断，又不能利用H合成DNA而死亡。 杂交瘤细胞合成DNA的主要途径虽然被A阻断，但仍能利用H合成DNA而繁殖。 英国伦敦圣托马斯医院研究发现，运动量最少的人与运动量最多的人相比，其端粒平均要短200个碱基对。转换成生物年龄，前者比后者衰老约十岁。2002年2月11日，日本国立传感病研究所的科学家小仓淳郎通过饲养实验发现，体细胞克隆鼠的寿命要比一般老鼠短。 1999年5月27日，培养多利羊的罗斯林研究所科学家所组成的一个研究小组就宣布，多利的染色体端粒比同龄普通绵羊的短。用来克隆多利羊的母羊有6岁，那么多利羊的生理年龄是从6岁开始累计呢，还是像新生羊那样从零岁开始累计？这一涉及克隆动物是否早衰的问题可形象地称为“多利羊猜想”。美国用成年鼠体细胞克隆鼠，再用克隆鼠继续克隆鼠，连续6代。每代克隆鼠并未出现早衰，染色体的端粒并没有缩短。但下一