医学科研方法

1、医学科研方法学 魔天记科研过程： 选题、设计、实践、统计分析 与总结成文科研方法学: 解决科研过程中问题的程序与 手段（如何提出问题、设计、 实践)第一节 医学科研的分类与任务 分 类学科属性：基础、临床、预防、社会医学研究科研体系：现代、传统、中西医结合、药学科研意义：基础（理论）研究（探索未知、解决理论 新观点、新信息） 如气体受体和嗅觉系统的基因发现(2004) 幽门螺杆菌的发现(2005) 应用基础研究（临床科学研究课题 ） 如疾病发病机制、诊断新技术、方法 应用研究（推广新技术、新产品） 分 类按设计与事实的关系（研究的时间） 前瞻性研究：先设计、后实践（结果可靠性 高，结论可信性好

2、） 回顾性研究：事物发生在前，设计在后按科研过程采用的方法 实验性研究：实验方法，严格控制条件，研究对象进 行干预 调查性研究：现场调查，搜索资料，研究对象未干预科研任务1、发现医学中未知事物与未知过程 人类基因组DNA序列草图绘制完成(1990-2000)，估计人类基因组大约2.7万个（决定人类生命的全部组织结构和活动） 蛋白质组学（表达、分布、加工修饰、生物学功能与相互作用） 系统生物学（生命是由多种成分包括基因和蛋白质构成，组分之间存在广泛的相互作用,信息网络） 2.揭示医学中已知事物的未知规律癌症(发病机制)(子宫颈癌-人类乳头瘤病毒；艾滋 病-HIV，2008年，诺贝尔生理学奖）毒品

3、(成瘾机制)(受体、酶活性、活性物质变化)新发现的疾病发病机制（SARS）新的活性物质(化学本质、生物学特性、生理作用、 病理生理意义、药理学特性、信号转导途径、 靶点）(1)阿片受体发现，推论存在内源性阿片样物质 机体不可能为外源性物质（吗啡）设置受体 电刺激某些神经核团产生镇痛作用，预先应用 纳洛酮（阿片受体阻断剂）取消电刺激镇痛作用 （电刺激释放某些活性物质作用阿片受体） 发现脑啡肽 (2)孤儿受体，利用“孤儿受体策略”，以反向药 理学方法寻找内源性配体3.探索医学中已知规律的应用 基因工程 组织工程 新靶点开发新药4. 验证与发展医学中已有的理论和学说动脉粥样硬化发病机制的研究进展19

4、76年, 损伤反应学说: 内皮细胞受损，细 胞相互作用，多种活性物质1999年, 炎症性疾病学说: 内皮细胞受损，多 种细胞因子 血管内皮损伤是动脉粥样硬化形成的始动环节(Ross, New Engl Med J, 1999)硝酸甘油舒血管机制的研究进展 硝酸甘油为治疗心绞痛的经典药物，舒张血管，降低前后负荷，降低心肌耗氧量，缓解心绞痛。 1867年- 应用于临床(直接舒张血管) 1977年- 硝酸甘油 NO cGMP 舒张血管 2001年 降钙素基因相关肽介导硝酸甘油舒血管 降钙素基因相关肽(CGRP)感觉神经的主要递质，37个氨基酸组成，强效舒血管作用 CGRP介导硝酸甘油的舒血管作用(工

5、作假说) 硝酸甘油 NO cGMP CGRP ? 舒张血管CGRP介导硝酸甘油舒血管作用的依据： 1、CGRP广泛分布血管组织 2、CGRP强效舒血管作用 3、硝酸甘油不良反应搏动头痛伴随颈静脉血中CGRP浓度升高 4、NO促进CGRP释放(硝酸甘油释放NO) 5、硝酸甘油与CGRP半衰期均非常短硝酸甘油的舒血管作用（离体大鼠胸主动脉环）CGRP介导硝酸甘油舒血管作用NitroglycerinNTG+CGRP8-37NTG+CapsaicinCGRP8-37: CGRP受体阻断剂Capsaicin(辣椒素): 感觉神经递质耗竭剂硝酸甘油对血压、CGRP的影响Methylene blue(MB)

6、:鸟苷环化酶抑制剂Capsaicin(辣椒素): 感觉神经递质耗竭剂人体CGRP是否介导硝酸甘油舒血管？ 硝酸甘油 NO cGMP CGRP( )? 舒张血管线粒体醛脱氢酶(SNP)正常野生型纯合子（n=9)，504(谷氨酸）携带突变等位体（n=9)，504(赖氨酸）硝酸甘油舌下含服（0.5 mg）指标：血压 心率 血浆CGRP浓度 淋巴细胞CGRPmRNA 表达硝酸甘油对血压、心率的影响. ：ALDH2*1/*1 ; : ALDH2*2 ( n=9). *P0.05, #P0.05, *P12) Wu RR, Zhao JP, Jin H et JAMA. Lifestyle interve

7、ntion and metformin for treatment of antipsychotic-induced weight gain: a randomized controlled trial. JAMA 2008; 299(2):185-93. (IF28) (2008年中国百篇最具影响国际学术论文)Li H, Xie H, Liu W, Hu R, Huang B, Tan YF, Xu K, Sheng ZF, Zhou HD, Wu XP, Luo XH. A novel microRNA targeting HDAC5 regulates osteoblast differ

8、entiation in mice and contributes to primary osteoporosis in humans. J Clin Invest. 2009;119(12): 3666-77. (IF15)Wu F, Yang LY, Li YF, Ou DP, Chen DP, Fan C. Novel role for epidermal growth factor-ike domie 7 in metastasis of human hepatocellular carcinoma. Hepatology. 2009; 50(6): 1839-50. (IF10)研究

9、生获奖情况全国优秀博士学位论文奖1名(彭军)全国优秀博士论文提名奖4人(鲁蓉，周智红，邓盘月，姜德建)湖南省优秀博士学位论文奖7人湖南省优秀硕士学位论文奖11人注意理论成果：感性认识上升为理性电刺激对肠系膜血管张力的影响血管受交感缩血管神经(NE)和感觉舒血管神经(CGRP) 两种神经支配,电刺激释放NE和CGRP.2. 耗竭感觉神经递质CGRP后,电刺激兴奋交感神经(NE)表现缩血管效应增强.3. 阻断交感神经后,电刺激兴奋感觉神经(CGRP)表现为舒血管效应.肠系膜血管,辣椒素耗竭感觉递质(CGRP)后,电刺激兴奋交感神经(NE)缩血管效应增强（Li YJ , at al., Eur J

10、Pharmacol, 1992)阻断交感神经后,电刺激兴奋感觉神经(CGRP) 表现为舒血管效应理论成果：外周血管张力是交感缩血管（NE)和感觉舒血管（ CGRP）两种神经活动的净效应.理论成果：内源性NOS抑制物是AS形成的重要促进物第三节 科研过程需要注意的几个问题1.解放思想,标新立异 科研是探索未知,应具有敢为人先的意识。敢于标新立异，向权威挑战，敢于提出假设 1964年，HM，Temin提出RNA可以作为模版，逆向产生DNA 心脏是泵血器官也是分泌器官2.抓住苗头，逐步深入 新生物活性多肽: 生物学特性 生物学效应 受体 信号转导途径 病理生理意义降钙素基因相关肽（CGRP）与高血压

11、： CGRP是否与高血压发生有关？自发性高血压大鼠与原发性高血压患者CGRP浓度降低，在高血压动物，耗竭CGRP可加剧血压升高 高血压时血中CGRP降低原因？辣椒素受体配体（调节CGRP的合成与释放）的转运体活性降低 转运体活性降低的原因？内源性一氧化氮合酶抑制物浓度升高 促进内源性CGRP合成与释放的化合物是否能降压作？吴茱萸次碱原发性高血压患者血压与CGRP变化SHR与2K1C大鼠血压与CGRP的变化(Li D, et al., J Hypertens, 2009)SHR与2K1C大鼠DRG中，-CGRPmRNA表达的改变 （Real-Time PCR）CGRPmRNA的表达SHR与2K1

12、C大鼠血浆CGRP与AEA浓度的变化SHR，2K1C AEA转运体活性变化(淋巴细胞)花生四烯酸乙醇胺(AEA)为辣椒素受体（VR1）的内源性配体，调节CGRP释放。SHR CGRP浓度降低是否与AEA水平有关？AEA需在AEA转运体作用下进入膜内（VR1结合位点在细胞膜内侧），才能发挥作用。CGRP浓度降低是否与AEA转运体活性降低有关？SHR，2K1C血浆中ADMA与NO水平变化ADMA降低AEA转运体活性AEA转运体活性降低的原因（NO/ADMA）一氧化氮合酶抑制剂(ADMA)降低AEA转运体活性CGRP与高血压ADMAAEA转运体活性AEA激动VR1CGRP合成与释放高血压发生发展CG

13、RP介导吴茱萸次碱抗高血压连续口服吴茱萸次碱对苯酚诱导的高血压大鼠血压的影响 J Hypertens. 2004; 23: 1819-1829吴茱萸次碱的降压作用连续口服吴茱萸次碱对CGRP水平的影响背根神经节血浆连续口服吴茱萸次碱对背根神经节CGRPmRNA表达的影响-CGRP (318 bp) -actin (422 bp) -CGRP (264 bp) -actin (422 bp)-CGRPmRNA-CGRPmRNA连续口服吴茱萸次碱对脊髓后角CGRP水平的影响胸段腰段吴茱萸次碱增加肠系膜上动脉CGRP阳性感觉神经纤维密度3 勤奋学习，刻苦钻研 不断扩大知识面，了解新进展，善于借鉴相邻

14、学科的先进成果。 生理学的成果（肾素-血管紧张素），毒理学的成果(巴西蛇毒成分的研究)，开阔了药物化学家思路研究，研发抗高血压药卡托普利（ACEI） 慢性肾功能不全病人血浆一氧化氮合酶抑制物升高（解释高血压），引入研究动脉粥样硬化内皮功能不全一氧化氮 1980年，Furchgot发现内皮细胞舒张因子（EDRF），即一氧化氮（nitric oxide，NO）， 1998年，获诺贝尔奖。 调节血管张力 抑制血小板聚集 抑制平滑肌细胞增殖 抗氧化 NO抗动脉粥样硬化因子 NO生物利用降低的原因: L-精氨酸水平 L-精氨酸转运体活性 NO氧化灭活 NOS活性（辅因子） 内源性NOS抑制物L-精氨酸N

15、O瓜氨酸ADMANOS()内源性一氧化氮合酶抑制物： 非对称二甲基精氨酸（ADMA）HNNH2CCH2CH2CH2CHH2NCOOHL-arginineHNCH3H3CNADMANNHCH3CH3SDMANHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNH内源性一氧化氮合酶抑制物促动脉粥样硬化形成依据：1、血管内皮受损是AS形成的始动环节 (Ross,1976) 2、NO舒张血管，抑制血小板聚集，抑制 平滑肌细胞增殖，NO内源性抗AS因子 3、外源性NOS抑制剂（NO合成 ）促动脉 粥样硬化形成工作假说：某些致AS因素ADMA血管内皮受损促AS形成ApoE缺

16、陷小鼠血浆中ADMA的变化(Xiao H, et al., Life Sci, 2007)A: C57BL/6J (16 W)B: C57BL/6J + ADMA (16 W)C: ApoE/ (16 W)D: ApoE/ + ADMA (16 W)E: ApoE/ (20 W).高甘油三酯病人血浆ADMA水平的变化(Yang TL, Eur J Clin Pharmacol 2006)*#ADMA与疾病动脉粥样硬化 (Yu XJ 1994)高血压 (Perticone F 2005)外周动脉闭塞性疾病 (Boger RH 1997)糖尿病 (Fard A 2000)胰岛素抵抗 (Chan NN 2002)衰老 (Bode-Boger SM 2005)老年痴呆（ 阿尔茨海默病）(Abe T 2001)阻塞性呼吸暂停综合征 (Ohike Y 2005)勃起功能障碍 (Wierzbicki AS 2006)甲状腺功能低下 （ Hermenegildo C J 2002）4 一丝不苟,艰苦奋斗 不畏艰险,百折不挠,拼搏牺牲的精神 (日本学者,单个神经细胞记录LTP，2年间记录6个细胞) “只有在那崎岖的道路上不畏艰险攀登的人们,才有希望达到光辉的顶点.”5.认真观察,实事求是严肃认真的态