现代分子检测技术在食品品质控制中的应用及优势

1、现代分子检测技术在食品品质控制中的应用及优势一、转基因食品检测转基因食品也称基因改造食品或基因修饰食品 ( GeneticallyModifiedFood，GMF)。近几年，随着转基因食品的快速发展，转基因食品的安全性受到广泛关注，因而对转基因食品的检测是非常必要的。利用PCR 方法检测转BT 基因水稻原理：由于 Bt 水稻基因中含有CaMV35S（花椰菜花叶病毒）启动子、根瘤农杆菌的NOS终止子和Cry1Ac基因，因此，在检测水稻中是否含有转基因水稻成分时，可选择检测CaMV35S启动子、NOS终止子和Cry1Ac基因的存在与否，如果存在，即可说明其中存在转基因水稻成分。方法：经DNA的提取

2、，PCR扩增，通过凝胶电泳来判断样品是否为BT转基因水稻实验步骤1将新鲜嫩叶放于瓷质的研钵中，将人适量的液氮进行研磨，待叶片磨至粉末状后加入适量的CTAB。2500l 65预热的CTAB 70保温30min，不时颠倒混匀。3450l酚/氯仿/异戊醇，颠倒混匀至溶液呈乳浊状但不要震荡，离心10000rpm， 3min，取上清。4加入450 l 氯仿，混匀后离心10000rpm，3min，取上清。5加入600l异丙醇，颠倒混匀，-20放置30min。612000rpm，4/5min，弃上清。7用800l预冷的70乙醇洗涤沉淀（注意不要吹散沉淀）。8离心后吸去残余乙醇。9待乙醇挥发后加入20-50l

3、 TE缓冲液（含1RNase A），温和混匀。10取5l样品进行琼脂糖凝胶电泳，其余的样品-20保存。CaMV35S 启动子是一段长 195bp 的碱基序列，如图1所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在200bp左右。电泳结果NOS终止子是一段长165bp的碱基序列，如图2所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在100bp至200bp中间位置。Cry1Ac基因是一段长301bp的碱基序列， 如图3所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在300bp左右。tRNALeu： 植物叶绿体内源参照基因，长180bp，如图4，经PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，

4、其条带位置在200bp左右。在这种方法中，DNA 的提取是关键，PCR 的成功与否关系到整个实验的准确性。核酸检测能为转基因水稻的筛选鉴定及为安全性评价提供直接的数据，成为转基因水稻安全性检验中一项重要的技术手段。二、天然毒素的检测技术ELISA（酶联免疫吸附剂测定）试剂盒检测黄曲霉毒素黄曲霉毒素： 1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。 B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。 Analyte = antigen Analyte =

5、antibodyIncubate, wash酶联免疫(ELISA)原理：1. Coat solid phase withantigen when analysing antibody antibody when analysing antigen2. Block free binding sites. Incubate. Wash. Analyte =antigen Analyte =antibody3. Add sample. Incubate. Wash Analyte =antigen Analyte =antibody4. Add conjugate. Incubate. Wash.

6、Analyte =antigen Analyte =antibodyE E E E5. Add substrate 6. Incubate, stop, measure colour change Colourless ENZYMEODCONCENTRATION江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立了检测食品中总黄曲霉毒素的间接竞争 ELISA 检测方法，为开展全国性总黄曲霉毒素污染调查提供了技术支持。龚燕等通过改进产处理，使ELISA检测黄曲霉素灵敏度达到0.1g/kg。二、现代分子检测技术在食品检测中的优势分子检测技术作为一种基因水平的检测技术，具有灵敏度高、选择性好、响应快等优点，是新时期食品安全的战略制高点之一，也是食品安全领域关注的热点之一。例如，黄曲霉毒素传统的检测方法较繁琐、成本高、准确度差。薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法，由于其检测周期长，程序复杂，所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。近几年出现的新检测方法是在传统检测方法的基础上，将酶联免疫技术应用于毒素的检测。相关科研单位研制的酶联免疫(ELISA)试剂盒，检测食品中的黄曲霉毒素 B