3.性传播感染sti的临床分子诊断

1、(STI)的临床分子学南方医院检验科分子)中心STI病原学30多种病原体性、垂直HIV/HSV/HPVNG/CT/TP/MG真菌细菌CALSTI病原学寄生昆虫原虫虱TVSTI监测的20122008沙眼衣原体（CT）最常见的STI细菌菌（）NG的耐药性毛（TV）TV是最常见的可治愈的单纯疱疹（HSV）HSV-2是溃疡的首位病原体非洲率最高:30%to80%ofwomenand10%to50%ofmenbeinginfected1999-2004约17%亚洲数据有限STI的隐匿性/不典型性特点选择合适的筛查/检测方法，覆盖合适的人群可显著提高阳性率在STI监测中的作用明确提供试验应可筛查典型和不典

2、型及不易的STI评估病原学提供STI的流行数据以利于系统化管理提供药敏试验以辅助临床治疗选择用药STI病原学物、溃疡刮片、疱液、尿液、血液、脑脊液、羊水、直肠拭子、STI样本类型多咽拭子、皮屑。血液生殖道尿液物分子生物学：免疫学：POCT抗原/抗体形态学：湿片涂片染色暗视野培养法：可培养的细菌/支原体/衣原体NAATs核酸探针、分子生物学方法核酸扩增（NAATs）是STI的临床革新！更高的检测敏感性特异性好有商品试剂无创性更好的替代传统方法/补充不是万能的质量控制常见的NAATsTranscription-Mediatedlification, TMA (APTIMACombo 2,AC2,G

3、en-Probe)转录介导扩增反应Real Time-PCR (Rochelicor/cobas，Abbott m2000)Strand Displacement链臵换扩增反应lification, SDA (BD Probe Tec)Nucleic Acid Sequence-Based(Biomerieux) 依赖核酸序列的扩增lification，NASBA，Ligase Chain Reaction,LCR (Abbott LCx)停用多数NAATs可提供多重PCR同时检测NG和CTNAATs 商品化试剂及其靶部位制造商试剂名靶部位AbbottPlasmidM2000 (PCR)Pla

4、smidPlasmid/omp 16S rRNA16S rRNABDRoche GenProbeanonProbeTec ET (SDA)Cobas4800/licor CT/NG ,PCRAptima Combo 2 (TMA) NucliSens(NASBA, Biomerieux)NAATs 缺点：靶部位发生变异或缺失，导致假结果，至少需要以两处选择好的NAATs很重要！序列为靶部位市场占主导地位的CT/NG的NAATs检测技术：TM其它技术PCR 技术Roche6%3%27%64%SDA 技术BD数据来源：Gen-Probe Company（2009）real-time TMASATT

5、MA :主流检测技术 Gen-ProbeSAT技术与PCR技术扩增原理比较PCRSATDNARNARTcDNA30分钟内扩增1010倍RTT7RNA多聚酶TaqTaq1000copies2n 扩增1000n 扩增可以治愈的TP NG CTTVTVCTTPNG、隐蔽质粒cppB靶位点： 16SrRNA、porA 假、编码外膜蛋白、opa、胞嘧啶DNA甲基转移酶敏感性大大增加：宫颈拭子98.6%（vs 85.9%培养法）1526%病例仅表现为NAATs阳性（培养慢性）型使用抗生，女性隐后染某些直肠、咽拭子样本JCM 2010;48:3236-43.CID 2004;39:1387-90. NAAT

6、s检测（NG）缺点：无耐药性信息对其他性菌属可出现交叉反应，导致假阳性结果，需要用其他NAATs确证，或可用R-DNA确证，培养法确证注意：NG检测同时需要检测其他STI：包括CT、HIV、 NAATs检测（NG）敏感性90%特异性高达98100%靶位点：主要外膜蛋白 (MOMP)single copy/anismMOMP gene omp1 (=ompA)隐蔽质粒7-10 copies/ Most common NAATsanismfor commerl23S rRNA1000 copies/TMA/NASBAanismSex Transm Infect2010;86:470-3 NAATs

7、检测沙眼衣原体(CT)检测已被确认可用于男女性有或无症状的生殖道的检测敏感性90% ；特异性99%；优于目前所有培养和其他非培养方法（可提高2050%的阳性率）；最佳的样本：女性直肠和咽拭子也拭子；初段尿但需要自行确认不再其他的非培养和非的方法敏感性时效性MMWR / March 14, 2014 / Vol. 63 / No. 2CT/NG双试验NG阳性率（MSW通常1%以下）显著低于CT双重中较低量的有可能漏检（CTNG时），主要是在尿液标本的检测时口咽部/直肠拭子检测在MSM人群中的重要意义NG阳性率37%结果解释补充试验 ?生殖道样本阳性后不再常规需要复查;任何临床和实验室需求可补；咽

8、拭子用有假阳性的需要用其他无假阳性的确认。补充试验与初次实验结果不一致的解释可疑/不确定重新取样,基于临床和病史进行结果分析检测是否治愈培养是金标准;CT治疗3W仍可NAAT+;NG治疗2W仍可NAAT+;尚待评估TV是全球最广泛流行的可治愈的STITV+HIV风险增高MMWR / June 5, 2015 / Vol. 64 / No. 3Sex Transm Infect. 2015 March ; 91(2): 8186TV-NAATsFDA-已通过样本类型：生殖道拭子（包括自取）、宫颈拭子、尿液暂时未通过FDA的NAATSVVC：念珠菌Mg：生殖支原体炎HSV-HIV风险增高NAATs

9、HSV2+，优点：显著提高敏感性 (尤其在复发性HSV及中枢神经系统中）；可以区分HSV1/2比培养的阳性率高分子生物学检测STI综合征即将用于临床根据临床综合征选择复合检测炎的多重PCRNG+CT+MG+UU溃疡TP+HSV+提高STI的和鉴别杆菌能力BV(细菌性病）多种细菌的多重PCR炎的多重PCR检测BV+Cal+TV检测STI病原体耐药分子的与临床选择NAATs方法送检本类型患者临分期与疗背景分子&质量控制患者临床表现选择样本评价结果质量控制选择试剂操作技术实验环境PCR分析前应具备的基本实验条件及管理要素实验体系选择仪器：高质量的仪器意味着高精度，高可靠性，高重复性试剂盒：不同厂家试

10、剂盒的检测效果差别很大（内标vs外标），需SFDA，不得使用科研试剂盒体系搭配：试剂盒并不适用于所有PCR仪器，对应的PCR仪必须选择适用的试剂盒，并且进行评价验证后方可使用人力资源鉴于PCR 的特殊性，需要配置管理、质量监督及日常操作并针对性学习和培训后，考核合格后上岗，检测方法学检测方法的局限性检测的特异性和敏感性检测的精密度的特异性和敏感性的价值检测试剂交叉反应型偏倚干扰商品试剂试剂试剂盒说明书操作手册同一项目准备几种不同检测试剂盒（针对不同的靶），比较不同试剂的核酸提取，扩增效率，择优选择，备用分析前质量控制标本、运送和保存早尽早采样快标本应尽快送检，不检测的标本放入低温容器内送检。短

11、时间可低温保存，冻存的标本忌反复冻融近标本应尽量取自病变部位或接近病变部位多标本的量不能太少净避免污染标本，选择合适的样本标本尿液：口，初段尿物（CT/UU/-DNA等病原）采样时要采到上皮细胞NG最好采取宫颈充分洗涤拭子子标本保存&标本长期保存和建库适当温度保存标识清楚、记载详细保存时间信息化管理超低温冰箱/柜常温冰箱低温冰箱/柜液氮罐分析中质量控制Department of Healnd Human Servi, Centers forMedicare and Medicaid Servi. Clinical laboratoryimprovement amendments of 1988; final rule. 57Federal Register 7170 (codified at 42 CFR 493.1265); 57Federal Register 7176 (codified at 42 CFR 493.1445(e)(5).核酸提取DNA不同标本类型采用不同提取方法4保存，长时间-20保存RNA不同标本类型采用不同提取方法严格按照操作手册，避免降解-20保存，长时间-70保存制定标准化的核酸提取文件分析中质量控制手工操作为主，固定，熟练操作，保持手法的一致性不同厂家提取试剂盒不可混用按质量管理手册进行分析后质量控制可疑结果同一方法