6第五章、常见病原微生物的检测

1、.PAGE ：.；PAGE 14程编号： 教案、讲稿 总学时：30学时食品卫生检验第五章 常见病原微生物的检测2学时第一节 禽流感病毒第二节 布鲁氏杆菌第三节疯牛病病毒第四节炭疽杆菌 适用专业：食品工程与科学 授课班级：食工20033 授课教师： 王 长 远 黑龙江八一农垦大学食品学院2005年2月22日教 学 进 度 计 划周次学时教 学 内 容备 注1绪 论1微生物检验根本知识、常规鉴定技术1食品检验样品的采集与处置1食品微生物检验目的8食品中毒性微生物的检验2常见病原微生物的检验2肉与肉制品中的微生物及其检验2乳与乳制品中的微生物及其检验2罐头食品中的微生物及其检验2其它食品中的微生物及

2、其检验第五章 常见病原微生物的检测 第一节 禽流感病毒禽流感是禽流行性感冒AvianInfluenza，AI的简称，这是一种由甲型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定为类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。 不仅是鸡，其它一些家禽和野鸟都能感染禽流感。按病原体的类型，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类。非致病性禽流感不会引起明显病症，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道病症，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。最近国内外由H5N1血清型引起的禽流感称高致病性禽流感，发病率和死亡率高，感染的鸡群经常“全军覆没。发病率和死亡率都很高，危害

3、宏大。最早的禽流感记录在年，意大利发生鸡群大量死亡，当时被称为鸡瘟。到年，科学家证明其致病病毒为甲型流感病毒。以后，这种流行性疾病被更名为禽流感。就最近年的记录，年月至月，英国伦巴第地域迸发禽流感，到次年月万只病禽被捕杀。年月，美国加州迸发禽流感，当年月疫情分散到内华达州和亚利桑那州。到年月，仅加州就销毁多万只鸡；月，荷兰发生禽流感，人类感染者达人，并出现死亡病例。自年月以来，禽流感在亚洲十多个国家和地域肆虐，呵斥数千万只家禽被宰杀销毁，染病死亡者已达数十人。禽流感被发现多年来，人类并没有掌握有效的预防和治疗方法，仅能以消毒、隔离、大量宰杀禽畜的方法防止其蔓延。高致病性禽流感迸发的地域，往往蒙

4、受宏大经济损失。一、生物学特性 1、形状学特点禽流感病毒是正粘病毒，流感病毒属的一个成员。禽流感病毒具有A型抗原,属于A型流感毒,列为禽流感病毒类。本病毒颗粒呈球形、杆状或长丝状,为多形性。其直径为80120nm,外表有一层棒状和蘑菇状的纤突，有囊膜,囊膜下面有一层膜蛋白,紧紧地包裹着呈螺旋状对称的核衣壳。2、禽流感病毒的分型流感病毒分为三个不同的抗原型,即A、B、C三型。其中B、C两型仅能对人致病,A型可对人、猪、马和禽致病。根据病毒外表的两种糖蛋白血凝素HA和神经氨酸酶NA可将A型流感病毒分成假设干亚型。目前已有15种HA和9种NA。 A型禽流感各亚型毒株对禽类的致病力是不同的。历史上高致

5、病性的禽流感都是由H5和H7引起的，但并非H5和H7都是强毒。A型流感病毒的抗原性不断发生变异，这种变异是由HA和NA引起的，尤其是HA的变异最为常见。不同宿主的病毒也易发生基因置换。病毒的这一特征,加之感染动物复杂,使本病的防治难度加大，这也是流行了一个世纪的禽流感至今仍无良好的治疗和防治措施的主要缘由.3、抵抗力对热的抵抗力较低，6010分钟，702分钟即可致弱，普通消毒剂能很快将它杀死。低温冻干或甘油保管可使病毒存活多年。4、流行病学禽流感在家禽中以鸡和火鸡及某些野禽的易感性最高，并呈急性致死性传染病。鸭、鹅及其它水禽类的易感性较差，多为隐性感染或带毒，有时也能大批死亡。鸽子可带毒，但很

6、少自然发病。迄今对本病的流行病学知识了解得不非常清楚，普通以为是带毒的候鸟将其作世界性传播。已证明在野鸭的肠道中可存在病毒。我国学者韩冲与徐为燕等1980在南京鸡鸭加工厂的外观安康的鸭群随机取86只鸭泄殖腔棉拭子进展检查,以接种鸡胚和血清学方法，证明其中15例分别出了A型流感病毒；这些结果均阐明在自然界中存大有大量的禽流感病毒,带毒的野禽能将病毒大量排出于体外,经过不同途径将其传播给鸡和火鸡。强毒可使易感家禽直接发病,弱毒可在家禽体内反复传代增殖，发生变异为强毒。1992年以来世界发生禽流感的情况：从1991年10月至1997年3月间公开报导发生高致病性禽流感的国家有澳大利亚H7N3,巴基斯坦

7、H7N3和墨西哥(H5N2,此外其它在东半球分别到的毒株,均为低致病性的。意大利、德国在分别从鸡体分别出H9N2型,其它鸡的毒株分别是南非1992年H7N1型,1994年H5N9型，法国1995年H6N5型，意大利1995年-H3N2型,西半球的加拿大分别于1991、1992、1995、1996年报导火鸡和平胸鸟发生禽流感，而H6亚型最为普遍。美国从国内的家禽中尚未分别到高致病性流感病毒，H1N1亚型最为普遍，至少以9个州分别到这个毒株。 1993年,禽流感病毒又袭击了笼养鸟。法国、英国、南非、赛浦路斯、意大利相继报导从笼养鸟中分别到H4N6亚型禽流感病毒.5、临床病症和病理变化禽流感的病症极

8、为复杂.根据禽类的种类鸡、火鸡、鸭、鹅及野鸟等以及病毒的亚型类别的不同，表现各种各样的变化：有最急性、急性、亚急性及隐性感染等。埋伏期普通较短，通常为45天，体温急剧上升至43.344.4.c，精神沉郁、拒食、病鸡很快陷于昏睡形状，有些颈部出现向后改动的神经病症。病鸡多呈急性死亡，有的也能够出现呼吸道病症，咳嗽、打喷嗖，气管出现咯音，流泪等病症，羽毛蓬松，产蛋率下降，死亡率高低不等。二、诊断 1、病原的分别病原的分别和鉴定可以从活体或尸体分别病毒。用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分别到病毒，可用不同大小的棉拭子擦取气管或泄殖腔，然后将拭子放入灭菌的保管液2550%甘油盐水、肉汤或1000u

9、/ml青霉素和10mg/mL链霉素的细胞维持液中。病料的采取时间很重要,普通在感染初期或发病急性期采取。如转为后期那么因机体已构成足够的抗体而不易分别到病毒.2、病毒分别通常用鸡胚来进展。接种910日龄鸡胚尿囊腔，继续孵育4872h。如资料中含有病毒时，那么接种48h鸡胚死亡，但在多数情况下初代分别时鸡胚多不死，为此需将经72h未死的鸡胚置冰箱内冻死后，搜集尿囊液作第二代接种。如第二代接种的鸡胚仍不死亡，即可断定分别病毒为阴性。 3、血清学实验三、引见高致病性禽流感的其他知识鉴定高致病性禽流感的规范: 最近国际上评价禽流感病毒致病力的经典方法是接种易感鸡。按照国际规范，能引起接种鸡死亡75以上

10、的分别株，是高致病性毒株。虽然接种鸡是确定致病的“黄金规范，但它不能反响致死率小于75%的H5或H7亚型病毒的潜在致病力。因此0IE(国际兽疫局根据科学家的建议,推出新鉴定规范。 1 任何分别到A型流感病毒，用0.2mL1:10稀释的无菌尿囊液静脉或肌肉注射8只48周龄易感鸡,10天内的死亡率不低于75%。 2.对一切低致病的H5、H7毒株,血凝素切割位点的氨基酸序列与高致病性禽流感病毒一致。 3.H5、H7以外的A型流感病毒,可以致死15只鸡,在缺乏胰蛋白酶的情况下,能在CEF细胞上生长构成蚀斑。本病的防治 根据世界各国对禽流感的防治阅历，由于病毒抗原的多变性，因此目前用疫苗进展预防，其免疫

11、效果尚存在一定问题。本病在某些国家的部分地域虽仍有发生，但由于采取严厉的防治措施，得到了很好 的控制。因此在疑心有本病发生时，应尽快作出确证，采取严厉的隔离封锁和同群扑杀等综合措施,方能到达有效的控制。禽流感的传播途径是什么？禽流感的传播有病禽和安康禽直接接触和病毒污染物间接接触两种。禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体脏器组织中。因此病毒可随眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外，含禽病毒的分泌物、粪便、死禽尸体污染的任何物体，如饲料、饮水、鸡舍、空气、笼具、豢养管理器具，运输车辆、昆虫以及各种携带病毒的鸟类等均可机械性传播。安康禽经过呼吸道和消化道感染，引起发病。如何防备禽流感禽流

12、感被国际兽疫局定为类传染病，且变异后的病毒能要挟人类安康，但各国专家们说，及时、适当的预防措施可以使人类防止感染。 世界卫生组织最近发表的报告说，与病禽接触是禽流感病毒能够入侵人体的最主要途径之一，鲜活家禽市场能够是病毒传播的重要场所。因此，防止直接接触病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。 世卫组织还建议，豢养员、屠宰工人等经常与活禽亲密接触的人，必需做好维护任务，包括穿防护服、佩戴防护器具、及时接种流感疫苗、任务前后彻底消毒等。 注重本身安康、坚持良好的免疫力也是防止感染禽流感病毒的有效措施。在日常生活中，特别是在流感易迸发的季节，人们应留意多摄入一些富含维生素等加强免疫力的食物和药

13、物，并适当地进展体育锻炼，以添加机体对病毒的抵抗才干。 韩国、日本等出现疫情的国家规定，一旦发现禽流感疫情，有关部门要对疫点、疫区和受要挟区进展封锁。对疫点周围公里范围内的一切禽类全部扑杀并平安掩埋，对疫区周围公里范围内一切禽类按规定规范进展强迫免疫，并做好消毒任务。越南和日本等国专家还建议宰杀疫区内的全部家禽。 各国的权威专家已认定，食用烹熟的家禽肉、蛋不会传染禽流感。禽流感与其他流感有什么关系？除禽流感以外，常见的流感还有人流感、马流感和猪流感等。禽流感与人流感和人类安康的关系非常亲密。由于猪与人的种间差别较小，禽流感病毒可以在中间宿主(猪)体内与人流感病毒杂交，并产生能感染人的新的流感病

14、毒。禽流感病毒为何消灭不了？流感病毒为了生存而不断发生变异，以逃脱动物产生的特异性抵抗力。人们为了预防禽流感也研制出了各种疫苗。但机体在产生特异性抗体后，病毒为逃脱机体的扑杀而不断地发生着变异，这样原有的抗体即失去作用，病毒就可使动物重新发病。因此就目前的防疫技术和手段而言，禽流感病毒是消灭不了的。第二节 疯牛病病毒今年71岁的美国得克萨斯州妇女伯内尔贝兹上月去世，而医生疑心她能够感染了疯牛病病毒。据美联社报道，贝兹因患稀有的“克雅氏症于10月16日去世。这种病有两种方式。第一种被称为变异型克雅氏症，与疯牛病有关，是由人食用了患有牛海绵状脑病的牛的神经组织引起的，这种病能在人际间传染。另一种较

15、普遍的被称为普通克雅氏症，每年全美大约有1万人死于这种疾病，其中85缘由不明。贝兹的家人也不清楚她能否食用了患疯牛病的牛肉，因此非常担忧。据她的家人说，贝兹是今年夏末患病的，在生命最后时辰，她不断处于昏迷形状。据悉，美国国家普里昂疾病病理监测中心将对贝兹的脑部进展解剖，确定她是得了变异型还是普通克雅氏症，结果将于2周内公布。今年6月，佛罗里达州一名妇女因患变异型克雅氏症去世，这也是美国目前独一一例知的变异型克雅氏症致人死亡的病例，其家人以为她是十多年前在英国吃了疯牛病牛肉而感染此病的。 一、 认识疯牛病牛海绵状脑病Bovine spongiform encephalopathy, BSE，又称

16、疯牛病，是一种进犯牛中枢神经系统的慢性的致命性疾病，由一种非常规的病毒朊病毒Prion引起的一种亚急性海绵状脑病，这类病还包括绵羊的痒病、人的克-雅氏病Creutzfeldt-Jakob Syndrome , CJD又称早老痴呆症以及最近发现的致死性家庭性失眠症等等。共同特征是：生物体的认知和运动功能严重衰退直至死亡。其中人的克-雅氏病是一种稀有的主要发生在50-70岁的可传播的脑病，产生的危害极大。1996年3月20日，英国政府宣布，英国20余名克-雅氏病患者与疯牛病传染有关，引起世界的震惊。为此，英国将疯牛病疫区的1100多万头牛屠宰处置，呵斥了约300亿美圆的损失，并引起了全球对英国牛肉

17、的恐慌。据英国2000年3月5日报道出生的一名婴儿能够是世界上第一例经过母体感染疯牛病的患者。这名婴儿一出生医生就发现他患有疯牛病。现实上，消费这名婴儿的孕妇已是疯牛病患者。扫描显示，这名妇女大脑纤维组织出现疯牛病患者的典型损坏病症。这一音讯证明，疯牛病可经过孕妇胎盘垂直传播，是典型的遗传二、认识朊病毒朊病毒是一类非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一种不含核酸仅有蛋白质的蛋白感染因子。其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对蛋白酶具有抗性。正由于这种构造特点，使其具有易溶于去污剂、有致病力和不诱发抗体等特性，给患病动物及人类的诊断和防治带来很大费事，给人类和动物的安康和生命带来严重的要

18、挟。朊病毒颗粒耐高温，即使加热到360仍有感染力，植物油的沸点160一170也缺乏以灭活，耐甲醛、强碱；朊病毒颗粒对一些理化要素的抵抗力之强，大大高于知的各类微生物和寄生虫，其传染性强、危害性大的特性极不利于人类和动物的安康。法国专家发现，导致疯牛病等疾病的朊病毒从一类动物传染给另一类动物后，即这种病毒跨物种传播后，其毒性更强，埋伏期更短。三、病症临床表现为脑组织的海绵体化、空泡化，星形胶质细胞和微小胶质细胞的构成以及致病型蛋白积累，无免疫反响。病原体经过血液进入人的大脑，将人的脑组织变成海绵状，好像糨糊，完全失去功能。受感染的人会出现睡眠紊乱、失语症、肌肉萎缩和进展性痴呆等病症，并且会在发病

19、的一年内死亡。该病有常染色体家族遗传倾向，并且有一个新的克雅氏病的报道该病与牛海绵状脑病有潜在的联络。此病的病理学特征包括以小脑和大脑皮层为主的海绵样变性和朊病毒的出现。四、疯牛病的传染与防治牛的感染过程通常是：被疯牛病病原体感染的肉和骨髓制成的饲料被牛食用后，经胃肠消化吸收，经过血液到大脑，破坏大脑，使失去功能呈海绵状，导致疯牛病。人类感染通常是由于下面几个要素：1、食用感染了疯牛病的牛肉及其制品也会导致感染，特别是从脊椎剔下的肉普通德国牛肉香肠都是用这种肉制成；2、某些化装品除了运用植物原料之外，也有运用动物原料的成分，所以化装品也有能够含有疯牛病病毒化装品所运用的牛羊器官或组织成分有：胎

20、盘素、羊水、胶原蛋白、脑糖；3、而有一些科学家以为“疯牛病在人类变异成“克-雅氏病的病因，不是由于吃了感染疯牛病的牛肉，而是环境污染直接呵斥的。以为环境中超标的金属锰含量能够是“疯牛病和“克-雅氏病的病因。如今对于疯牛病的处置，还没有什么有效的治疗方法，只需防备和控制这类病毒在家畜中的传播。一旦发现有牛感染了疯牛病，只能坚决予以宰杀并进展焚化深埋处置。但也有看法以为，即使染上疯牛病的牛经过焚化处置，但灰烬依然有疯牛病病毒，把灰烬倒在堆田区，病毒就能够会因此而散播。目前，对于这种毒毒终究经过何种方式在家畜中传播，又是经过何种途径传染给人类，研讨的还不清楚。第三节 布鲁氏杆菌布氏杆菌属Brucel

21、la是一类革兰氏阴性的短小杆菌，牛、羊、猪等动物最易感染，引起母畜传染性流产。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地。我国部分地域曾有流行，现已根本控制。布氏杆菌也是帝国主义者列为失能性生物战剂之一。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种，20个生物型。我国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌，其中以羊布氏杆菌病最为多见。病畜为传染源，人患病主要由畜传染，人与人之间传染时机极少。经消化道、呼吸道、生殖器官、眼结膜和损伤皮肤都可感染。 布氏杆菌病已不是以往以为只是发生在牧区和山区，而在城市和农区也有发生。一、生物学性状1、形状染色本菌属初次分别培

22、育时多呈小球杆状，毒力菌株有荚膜，经传代培育渐呈杆状，革兰氏染色阴性。2、培育特性本菌为严厉需氧菌。牛布氏杆菌在初次分别时，需在510%CO2环境中才干生长，最适温度37，最适的pH6.67.1,营养要求高，生长时需硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸钙等，实验室常用肝浸液培育基或改良厚氏培育基。此菌生缓慢，培育48小时后才出现透明的小菌落，鸡胚培育也能生长。3、抵抗力在自然界中抵抗力较强，在病畜的脏器和分泌物中，普通能存活4个月左右，在食品中约能生存2个月。对低温的抵抗力也强，对热和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯霉素和四环素等均敏感。二、致病性和免疫性本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌具有荚膜，

23、能抵抗吞噬细胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现菌血症。由于内毒素的作用，病人出现发热、无力等中毒病症，血流中细菌逐渐消逝，体温也逐渐衰退。细菌在细胞内繁衍至一定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。本菌多为细胞内寄生，治疗难于彻底，易转为慢性及反复发作，在全身各处引起迁徒性病变。布氏杆菌喜欢在生殖器官子宫和宰九中繁衍，特别偏爱怀孕子宫，致使胚胎绒毛发生坏死，胎儿胎盘与母体胎盘松动，引起胎儿死亡或流产。布氏杆菌病最危险之点是患畜几乎不表现病症，但能经过分泌物和排泄物(乳、精子、阴道分泌物、粪、尿)不断向外排菌，待别是随流产胎儿、胎衣和羊水排出大量病原菌，成为最危

24、害的传染源。排出的病原菌对外界环境有相当强的抵抗力，如在胎衣中能存活4个月，在水、土、粪、尿中存活3个月，在皮毛上存活1-4个月，在冻肉中存活2-7周，在乳中存活10天至1年。因此生活和消费环境-旦遭病原污染。不论人或畜，在几个月内部有被感染的能够。三、主要病症人感染布氏杆菌较家畜严重，病情复杂，表现乏力，全身脆弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、不规那么热或不发热。盗汗或大汗，睾丸肿大，一个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸痛，运用普通镇痛药不能缓解，由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为能吃不能活懒汉，故该病又被称作懒汉病。病灶发生在生

25、殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。家畜患病没有治疗价值。应全部淘汰，消灭传染源。人患病，病情复杂，与多种疾病相类似，临床难于鉴别，易发生误诊。普通医院初诊误诊率在25以上。凡有与易打动物或其产品接触史者，在发生类似布氏杆菌病表现时，应及时向临床医生提示，作布氏杆菌检查，以免误诊，贻误治疗，力争早确诊早治疗。布氏杆菌病多项选择用四环素与链霉素结合运用。也可用复方磺胺加链霉素。最近以为利福平与强力霉素结合治疗，治疗好后很少复发。 四、微生物学检验本菌传染性大，要留意防止实验室污染。一分别培育急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相肝浸液培育基一半斜面，一半液体置3710%CO2环境中培育，每隔

26、2天检查一次，如无细菌生长那么摇荡培育基，使液体浸过斜面上，有细菌生长，可依鉴定工程确定能否为布氏杆菌。经一月培育无细菌生长，可报告阴性。二血清学检查通常作凝集实验，断定凝集效价1：50可疑，1：100以上为阳性。效价增高4倍以上时，更有诊断价值。第四节炭疽杆菌美国国内先后传出了几例病人感染炭疽病的音讯，目前已有1名感染者死亡。在该事件中，邮件成为恐惧武器炭疽病菌的代名词。至15日，美国已有12人因直接或间接接触夹带有炭疽杆菌的邮件而受感染。美国卫生与效力部部长汤普森不无忧虑地说：很多人整天惶惶不安，要知道，美国还从未蒙受过这样的生物病菌袭击。美有关部门在经过调查后否认了自然感染的缘由，曾经初

27、步认定此事能够与恐惧袭击有关。 美国专家曾经指出，假设把炭疽当成生物武器运用，其杀伤力不逊于氢弹，足以呵斥整个城市和地域堕入瘫痪形状。美国国会技术评价局在1993年发表的报告估计，假设向华盛顿特区放射100公斤炭疽孢子，13万300万人能够丧生，其损伤力即使不超越氢弹也会跟氢弹一样。报告补充说，这类攻击的特征是一座城市或地域忽然出现大批类似流行感冒的急性病人，死亡率高达80%或更高，将近一半的死亡是发生在2448小时内。专家说，万一迸发生物攻击，重点应该放在及早鉴定是不是炭疽孢子上，接着通知危险地域。早日接受抗生素疗法是必要的。另外，虽然这类疫苗的供应量有限，但事后注射疫苗也是必要措施之一。炭

28、疽杆菌Bacillus anthraci属于需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。平常，牧民、农民、皮毛和屠宰任务者易受感染。皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不就放松警惕。一、生物学性状一形状染色炭疽杆菌菌体粗大。陈列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性，本菌在氧气充足，温度适宜2530的条件下易构成芽胞。在活体或未经解剖的尸体内，那么不能构成芽胞。芽胞呈椭圆形，位于菌体中央，其宽度小于菌体的宽度。构成荚膜是毒性特征。炭疽杆菌受低浓度青霉素作用，菌体可肿大构成园珠，称为“串珠反响。这也是炭疽杆菌特有的反响。二培育特性1、本菌专性需氧，在普通培育基中易繁衍。2、最适温度为37，最适pH为7.27.43、在琼脂平板培育24小时,粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸延繁衍所致4、在510%绵羊血液琼脂平板上，菌落周围无明显的溶血环，但培育较久后可出现轻度溶血。菌落