含EAB基团的两亲接枝聚膦腈载药自组装体的构建及抗肿瘤作用评价

1、含EAB基团的两亲接枝聚瞬睛载药自组装体的构建及抗肿瘤作用评价纳米技术的迅速发展极大地推动了纳米载药系统在癌症治疗中的应用。近年来,一类被称为聚合物囊泡的新颖纳米自组装体吸引了人们的注意。相较于自组装胶束仅能装载疏水性药物,聚合物囊泡以类似脂质体的结构特点,不仅能装载疏水性药物也能装载亲水性药物,甚至能共载亲疏水性两种药物,极具开发潜力。本文选取聚膦腈作为聚合物主链,以分子量2000的聚乙二醇单甲B!(mPEG沟亲水性侧链和对氨基苯甲酸乙酯(EAB)为疏水性侧基进行修饰,通过mPEG/EA投料比调节,合成一系列PECg枝率不同的两亲性接枝聚瞬月青(PEP),又对聚合物结构进行核磁共振(NMR)

2、、傅里叶红外光谱(FT-IR)和凝胶渗透色谱(GPC)表征。采用普通透析法即可简便制得该系歹J聚合物的纳米自组装体。通过TEMfficryo-TEM观察,PEG接枝率为0.89形成胶束,0.86形成过渡态,0.79至0.67形成囊泡。为考察PEP装载亲疏水性药物的能力，本文分别以水溶性化疗药物盐酸阿霉素(DOX-HCl)及其脱盐产物疏水性阿霉素(DOX)f乍为模型药物，采用透析法装载，结果表明聚合物中疏水基团EAB接枝率上升将促进PEP的药物装载。尤其,PEP-5装载DOXHCl或DOX匀能获得高载药量(LC)和包封率(EE)。其中，载DOXHCl的PEP-5系统(PEP-5-DH)LC为16

3、.23%,载DOX勺PEP-5系统(PEP-5-D)LC为15.55%,两者对应EE均高于90%,PEP-5-DH为97.30%,PEP-5-D为93.30%。经2D1H-1HNOES擀测，证明载体与药物间存在极强分子间作用力,有利于载药。药物释放实验表明，DOX-HCl从PE崂药系统白释放较DOX夬，且与pH条件有关。MCF-7细胞毒性实验发现,载体本身几乎无毒。PEP-5-DH与游离DOXHCl毒性相近，而PEP-5-D,由于药物水溶性不佳释放缓慢，导致细胞毒性减弱。由PEG窗饰形成的纳米自组装体被广泛报道具有增强渗透与滞留（EPR）效应相关的肿瘤被动靶向性，能降低化疗药物毒副作用，因此本

4、课题构建了MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型，对PEPS药系统进行体内评价。结果表明,PEP载体、药物亲水性及给药方案均对药效产生不同影响。实验过程中，PEP载药的剂型相比游离DOXHCl毒性明显减小。药效方面,虽然2mg/kg每天1次连续3天方式的给药总量比5mg/kg每3天给1次共3次的方式更低,但2mg/kg对应组的疗效更佳。采用相同的给药方式,PEP-5-DH的抑瘤效果明显优于PEP-5-D,已与游离DOXHCl相当，但安全性却较游离DOXHCl显著提高，达到了降低化疗药物毒副作用的同时，不牺牲药物疗效的目的。为克服MCF-7/Adr月中瘤细胞对阿霉素的耐药性，本文还利用PEP自组装囊泡的独

5、特结构共载DOXHCl或DOXf口氯唾（CQ）。CQ*一种传统抗疟药物，但也被报道具有抗肿瘤药物增敏作用,已在临床试验中进行研究。与之相关的机制可能是抑制耐药蛋白的外排，也可能与促癌干细胞（CSC）凋亡相关。细胞毒性实验发现阿霉素和CQW合用药可显著逆转耐药，通过Chou-Talalay联合指数法计算证实两者具有协同作用且随CCt匕例的增加而增强。为了更好的地模拟体内环境，本文构建了耐药性MCF-7/Adr细胞3D月中瘤球模型，并采用激光共聚焦（CLSM斯层扫描及扫描电镜（SEM对各试验组的月中瘤球内渗透剂抑瘤效果进行评价。相比游离DOXHCl只能停留在月中瘤球表面，CQ和DOXHCl联合用药能更好地渗透进入月中瘤深部，渗透效果最好的是按DOXHCl和CQ以1:1比例共载的PEP剂(PEP-DHC-1),能完全渗透进入月中瘤深部，且给药7天后,肿瘤球明显瓦解。流式凋亡才测证实PEP-DHC-处理的月中瘤球凋亡率也最高,提示该载药自组装体有望在动物体内逆转耐