细胞培养试题答案

1、细胞培养填空题1什么是无血清培养基？与普通培养基有什么区别？参考答案：无血清培养基(serum free medium, SFM):是不需要添加血清就可以 维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白 或大量蛋白组分。基本成分为基础培养基及添加组分两大局部。添加组分可能 包括纤连蛋白、层粘连蛋白等贴壁因子、胰岛素、转铁蛋白、硒等。填空题2谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么？参考答案：以0.2niol/L的L-谷氨酰胺配制为例：称取L-谷氨酰胺2. 92g,加 注射用水100mL充分搅拌混匀。用0.2iini滤膜正压过滤除菌。溶液应在4c 下避光保存，2周内使用。以7

2、. 5%NaHC03的配制为例：称取NaHC037. 5g溶于100ml蒸储水中过滤除菌。填空题3什么是个性化培养基？它有什么优点？参考答案：根据细胞类型、培养方式和生产工艺等特点所定制的培养基，即个 性化培养基。个性化培养基在国外生物制药企业被普遍采用，个性化培养基可 以为细胞生长提供充足的营养物质，能提高细胞的生长速率、培养密度、以及 延长细胞维持时间；也可以为细胞生长提供均衡的营养供给，减少细胞有害代 谢物质的积累，降低对细胞生长的危害；同时对贴壁细胞而言，能增加细胞的 贴壁性，并降低培养过程中剪切力对细胞的损伤；个性化培养基可以根据各户 的特殊需求减少或不使用动物源成分，从而使生物制品

3、平安性更有保障。填空题4碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？参考答案：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无 臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分 解，在65以上迅速分解，在270C时完全失去二氧化碳，在干燥空气中无变 化，在潮湿空气中缓慢分解。填空题5GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定？ 参考答案：GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不填空题34细胞培养的基本方法有哪几种？参考答案：（1）初代细胞培养：贴壁细胞初代培养、组织块培养法、悬浮细胞的初代培养；（2）传代细

4、胞培养：悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代、贴壁生长细胞 传代；（3）球体细胞培养；（4）悬浮细胞培养：成批培养、连续培养、微载体细胞培养法填空题35简述细胞冻存、复苏和运送的方法。参考答案：（1）细胞冻存方法：预先配制冻存液（含20%血清培养基、 10%DMS0）；取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入新鲜培养液，低速离心5 分钟；弃上清液，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液，分装至冻存管 中。密封后标记冻存细胞名称，日期，细胞状态也可标记，冻存者姓名。（细 胞冻存是慢冻的过程：4cl小时，-201小时，-80过夜，液氮中保存）（2）细胞复苏方法（快融）：从液氮中取出冷冻管，迅速投入37

5、38水浴 中，使其融化（1分钟左右）。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。 低速离心10分钟。去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。（3）细胞运送方法：冻存运送：液氮中；充液法：细胞传代后贴壁，瓶内充满培养液，密闭封口，保温携带。填空题36制备单细胞悬液的方法主要有哪些？参考答案：（1）悬浮细胞的别离方法是离心法，最简单方法是采用 1000r/min的低速离心lOmin。（2）实体组织材料的别离方法有机械别离法和消化别离法，机械别离法包括切 割别离法（组织培养法）和机械挤压别离法；消化别离法包括胰蛋白酶消化 法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和胶原酶协同用法、EDTA消化法。填空题37进行细胞培

6、养的基本条件包括哪些？参考答案：（1）无污染的环境。无毒和无菌培养环境是保证培养细胞生存的 首要条件。（2）适宜温度。人体细胞的适宜温度为36.5C+0.5C,偏离时，会影响细胞 代谢，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力比对高温强。（3）气体和pH值。开放培养时（碟皿或培养瓶松盖培养），一般置于95%的空气加5状。2混合气体环境中。参与三竣酸循环，产生能量供给细胞生长、增 殖和合成各种所需成分。多数细胞缺氧不能生存。C02既是细胞代谢产物，也是 细胞所需成分，作用是维持培养基的pH值，细胞要求。（4）营养物质。包括糖，无机盐，氨基酸，维生素，促细胞生长因子等。牛血 清是提供生长因子和细胞所需物质

7、的来源。（5）渗透压。260-320m0sni/L培养基填空题38体外培养包括几类？什么是组织培养技术？参考答案：体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养三类；组织培养技术 是指：从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件 下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。填空题39试述原代细胞培养的基本概念、原理、优缺点及实际意义。参考答案：1）概念：一般指细胞从组织中别离在体外生长至传代之前的细胞 培养。这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比拟能代表原组织的类型并表达 原组织特性。缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。2）原理及优缺点：细胞培养是将确定所选组织用剪碎的小组织

8、块或别离的单个 细胞进行培 养，这种培养失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增 殖，特性化，获得遗传 背景相同的群体，可以保存。培养选材一般来自胚胎组 织；因此比成体组织更易生存和生 长。这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组 织干细胞（ESC）,它们具有更高的自我更新和多能分化的能力。3）实际意义：组织（细胞）培养对医学、生命科学的意义培养的组织器官或细胞，能再一定范围和程度上反映生命活动规律和机体功 能特点。培养的细胞为生命科学和生物医学各种研究奠定了物质基础。如药物 筛选，疗剂评价，新生物制品研发，研究病毒及其他微生物，发现新的传染因 子，组织工程中的支撑技术等。细胞培养技术已经成为

9、商品化生物技术产品的核心。如目前可提供的产品， 病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、 白介素和集落刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等；酶类：组织型纤溶酶原激活 剂；激 素：EP0和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤 生产的各种单克隆 抗体；细胞本身（如干细胞）；皮肤重植等。4）组织（细胞）培养的局限性：细胞（组织）培养，包括器官培养终归是离体 培养，缺少 生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医学生物实验过 程及对结果的评估都必须考虑这些。填空题40试述“克隆”的基本概念并举例说明其在细胞培养工作中的实

10、际意义。参考答案：1）克隆：指通过一定方法获得由单个细胞无性繁殖形成的细胞集 落。2）实际意义：A.检验医学诊断试剂：单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点， 广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技 术。目前，单克隆抗体商品化试剂盒广泛应用于：病原微生物抗原、抗体的检测；肿瘤抗原的检测；免疫细胞及其亚群的的检测；激素测定；细胞因子的测定。B.蛋白质的提纯：单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在 一个惰性的固相基质上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待别离的抗 原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱 充分洗脱后，

11、改变洗脱液的离子强度或pH,欲别离的抗原与抗体解离，收集洗 脱液便可得到欲纯化的抗原。填空题41粘附生长型细胞根据形态分为几种类型，试述各型主要特点。参考答案：1）粘附型细胞（Monolayer cells）：附着在某一固相支持物外表 才能生长的细胞。A.成纤维细胞型：形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规那么，三角形，胞质向外伸 出23个长短不等的片状伪足，中有卵圆形核。生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞一细胞接触易断 开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。B.上皮细胞型：形态：类似体内的上皮细胞，扁平、不规那么多角形，中有圆形核。生长特点：

12、易相连成片，相靠一紧密相连一成薄层一铺路石状生长时呈膜状 移动，很少脱离细胞群而单个活动。C.游走型细胞：培养需要支持物，分散生长，不连接成片，在培养皿中生长位 置不定，处于活跃的游走或变形运动，因此外形不规那么且不断变化，密度大连 接成片呈多角形不易与其他类型的细胞区别。D.多型性细胞：无规律的形态，细胞分胞体和胞突。胞突细长形，似丝状伪 足，胞体略呈多角形。填空题42简述细胞系的生长过程及各期细胞的特点。参考答案：1）原代培养期：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞 在传代之前称为原代培养。组织到第一次传代时间大约为14周。特点：培养细胞成分混杂，呈现异质性。细胞活跃移动，分裂，但不

13、旺盛，多呈二倍体核型。原代与体内原组织形 态结构和功能活动基本相似，适宜进行疫苗制备、药物测试、移植等。为保持 二倍体体细胞性质，应在初代或传代后早期冰冻。2）传代培养期：首次传代开始经反复传代一直到培养细胞开始衰退之前的全部 时间。初代培养细胞一经传代便称之为细胞系（cell line） o特点：细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系（diploidcellline） 一般细胞在10代以内冻存。细胞逐渐进入去分化状态。原本成分混杂的培养物中，某一种增殖能力较强的细胞会逐渐处于优势，比 例越来越大，而将其它数量较少比例较小的细胞逐渐淘汰掉。3）衰退期：细胞仍然生存，但不增殖或增殖很慢

14、，最后衰退死亡。轮廓增强， 色泽变暗，胞质出现颗粒样及空泡状结构。在细胞生命期阶段，少数情况下，在不明原因的影响，细胞可能发生自发转 化。标志之一，是细胞获得不死性即持久性增殖能力，这样的细胞群体称“无 限细胞系”。核型大多变成异倍体，接触抑制消失。填空题43试述癌细胞系鉴定要点。参考答案：培养的肿瘤细胞生长成形态上单一的细胞群体或细胞系（或株） 后，需要做一系列的细胞生物学测定，主要的目的在于：证明所培养的细胞系 确实来源于原体内具有恶性的细胞，而非正常细胞或其它细胞。1）形态观察：主要观察细胞的一般形态，如大体形态、核浆比例、染色质和核 仁大小、多少等以及细胞骨架微丝微管的排列状态等。2）

15、细胞生长增殖：检测细胞生长曲线、细胞分裂指数、倍增时间、细胞周期时 间。3）细胞核型分析：检测核型特点，染色体数量、标记染色体的有无、带型等。4）软琼脂培养：检测集落形成能力。5）异体动物接种：向异体动物体内（皮下）接种细胞悬液，观察成瘤能力。6）其它：根据需要还可做同位素标记、组织化学成分分析，荧光显微镜观察 等。填空题44试述进行成体干细胞研究有哪些优势。参考答案：1）成体干细胞那么可从患者自身获得，而不存在组织相容性的问题，治疗时可防止长期应用免疫抑制剂对患者的伤害。此外，少量的骨髓切除 治疗有助于形成局部造血嵌合体，可使异体成体干细胞的治疗成为可能。2）成体干细胞不会引发畸胎瘤。3）成

16、体干细胞也具有类胚胎干细胞的高度分化能力。在人体发育的过程中，可 能成体干细胞是存留在多种组织中具有多系分化能力的亚全能干细胞群体，这些细胞都具有相同或相似的细胞表型，在适合的微环境下可分化成多种组织细 胞。填空题45简述干细胞研究的意义。参考答案：干细胞在生命科学的各个领域都有着重要而深远的影响，如移植治 疗、克隆动物及转基因动物的生产、细胞组织和器官的修复、组织工程等有着 广阔的应用前景。1）移植治疗：移植治疗目前已成为治疗疾病的一个重要手段，如器官移植、细 胞移植等。2）克隆动物及转基因动物的生产：利用这项技术人们还可以将一些在发育过程 中非必需的基因敲除（knock out）,在体内进

17、行功能缺失研究；还可以通过基 因功能获得性突变，使特定基因在发育的某一时期表达，从而研究该基因在胚 胎不同发育时期中的作用。3）转基因干细胞基因治疗：现有的基因治疗有两类：转基因细胞治疗核酸治疗。4）为发育生物学研究提供理想的体外模型：胚胎干细胞提供了在细胞和分子水 平上研究个体发育过程中极早期事件的良好材料和方法。5）高效新型药物的发现、筛选及动物和人类疾病的模型：胚胎干细胞提供了新 药物的药理药效、毒理及药物代谢等研究的细胞水平的研究手段。利用胚胎干 细胞体外分化的细胞组织检验筛选新药，可大大减少药物实验所需实验动物的 数量及其人群数量。总之，干细胞研究对细胞组织移植治疗，体外研究动物、人

18、胚胎的发生、发 展，新的人类因发现，药物的筛选和致畸实验及克隆动物、转基因动物等领域 将产生重要的影响。填空题46试述杂交瘤技术制备单克隆抗体三个基本环节和两个决定因素。参考答案：三个基本环节1）浆细胞瘤细胞系，骨髓瘤细胞NS1或SP2/0,需通过8-氮鸟喋吟选择出来, 有利于HAT选择培养基筛选。而且NS1或SP2/0必须是对数生长期，细胞密度 控制在lCT/mi,细胞活力达95%,进行细胞融合时细胞数。2）免疫鼠脾细胞良好、合适，大多数情况下，并不需要高度免疫；3）融合剂良好合适,50%PEGo两个决定因素1）选择培养基（HAT）2）饲养细胞（104/ml以上）：来自同系小鼠的胸腺细胞或腹

19、腔巨噬细胞填空题47简述杂交瘤技术产生的三个技术基础。参考答案：1） B淋巴细胞与骨髓瘤细胞：B淋巴细胞（B lymphocytes）：接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异 性抗体，在体液免疫中具有重要功能。本身是一种终末分化细胞，通常不再进 行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡一一短命细胞。骨髓瘤细胞（myeloma cells）：恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可 永远分裂和存活一一长命细胞。没有抗体分泌。经筛选HGPRT 一或TK 一。2）细胞融合技术：分泌抗体短命脾细胞（B淋巴细胞）、长命不分泌抗体骨髓瘤 细胞、分泌抗体长命杂交瘤细胞。3）杂交瘤细胞的筛选：用HAT选择培养基进行筛

20、选，只有杂交瘤细胞被筛选 出。填空题48简述原代肿瘤细胞制备过程及其考前须知及如何建成永久性细胞系。参考答案：癌细胞建系的方法和程序相似于正常细胞，包括标本收集和处理、 原代培养、传代、换液、冻存、复苏等过程。1）取材：取材部位非常重要，要挑选活力较好的部位，一般是癌组织最外层最 活跃细胞。注意去除标本中混杂的间质组织。2）别离：机械方法、酶消化法，其中酶消化法是分散癌细胞的好方法。3）接种细胞：消化后制备的癌细胞，培养时应有足够的细胞密度，通常接种细 胞浓度为5义IO,/M, 37培养。4）成纤维细胞过度生长的去除：常采用机械刮除法、反复贴壁法等。5）选择性培养基：选择性培养基是针对特殊细胞

21、生长的营养要求设计的。在癌 细胞建系中，选择性培养基的应用是提高癌细胞体外存活、抑制成纤维细胞生 长的关键技术改进。6）饲养层：在培养器皿底部接种能形成接触性抑制的成纤维细胞饲养层，可以 有利于癌细胞生长和抑制癌组织中正常成纤维细胞过度生长。7）及时换液癌细胞系建立考前须知：取材应选择活力较好的部位，尽快培养且要防止污 染。及时去除生长的成纤维细胞。掌握好传代时间，细胞没有长到足够量时不 要急于传代。早期应先以高浓度接种，再逐渐降低。对于增殖能力低的细胞， 应放入饲养层中培养，并加入一些促生长物质。精心传代、换液、防止污染， 需经半年以上的细胞培养，方能够到达建立细胞系的目的。如何建成永久性细

22、胞系：建立癌细胞系需要在体外进行长期培养和传代，传代 50次以上才能被认为是永久性细胞系。建系过程需要不断冻存以防细胞系中 断。填空题49试述细胞体外培养的条件。参考答案：体外培养细胞的基本要求主要包括细胞接种、培养液成分、酸碱度、气体条件、温度、水的纯度及无菌条件。1）细胞接种：接种细胞密度选择对数期的细胞接种。2）营养物质:天然培养基：营养成分复杂，包括血清、组织浸出液、淋巴液、水解乳蛋白 等；成培养基：包括水、无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸等；3）酸碱度：细胞能耐受的pH范围是6.6-7.8,最是的pH为7.2-7.4,要依靠 缓冲系统调节，主要是CO2-NaHCOs系统。4）气体：细胞

23、生长需要，主要用于调节细胞培养的pH,同时也用于合成细胞 物质。5）温度：最适宜生长的温度为3537；6）水：一般使用的是去离子水或三蒸水，适宜细胞培养；7）抗生素：加入两性霉素可控制微生物的生长。填空题50比拟天然和合成培养基的优缺点。参考答案：1）天然培养基：最初的体外细胞培养，均采用天然培养基。其主要取自动物体液或从动物组织中别离提取。优点：营养丰富，培养效果良好；缺点：成分复杂，来源受限，影响对某些实验产物的提取和结果的分析，易发 生支原体染。2）合成培养基：细胞在体内生存生长所需物质的种类和数量，用人工方法模拟 合成的。优点：标准化生产，组分和含量相对固定本钱低。缺点：缺少某些成分，

24、不能完全满足体外细胞生长需要。填空题51简述体外培养细胞的主要生物学特点。参考答案：去分化；贴壁铺陈；接触抑制；密度依赖性生长抑制填空题52简述血清的优缺点参考答案：1）优点：血清中含有基本的营养物质血清中含有激素与生长调节因子血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子血清中含有结合蛋白血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质血清中含有pH缓冲物质血清中含有蛋白酶抑制剂2）缺点：血清中也存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质血清的成分不明确，影响对结果的分析对多数动物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性液体，只有 在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种 细 胞在体内的正

25、常状态。血清也具有潜在的细胞毒作用，除了特异性抑制成分、细菌毒素以及脂类成 分之外，还含有多胺氧化酶等。不同动物、不同批次的血清成分和活性差异较大，使得培养结果不稳定。需要分批筛选，而且永远不可能保持批次间的一致；在培养液中使用血清会增加本钱，尤其是对于动物细胞的大规模培养以及使用胎牛血清培养的情况更如此；血清中有时所含的生长因子水平缺乏而需要补充，假设补充过量会抑制细胞生 长。培养批次与血清批次不同，生长因子水平是难以控制的。填空题53试述目前体外细胞培养中广泛使用最多的天然培养基类型及其作用。参考答案：天然培养基（液）的种类很多，包括生物性体液（如血清、血浆）、组织浸液（胚胎浸液）、水解乳

26、蛋白等。1）血清：血清中含有基本的营养物质血清中含有激素与生长调节因子血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子血清中含有结合蛋白血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质血清中含有pH缓冲物质血清中含有蛋白酶抑制剂2）胚胎浸出液（embryonic extract）是早期动物细胞培养中应用的天然培养 基，如鸡胚浸出液、牛胚浸出液等。胚胎浸出液主要成分为大分子蛋白和小分 子氨基酸，有促进细胞生长的作用。3）水解乳蛋白（lactalbumin hydrolysate）为乳白蛋白经蛋白酶水解的产 物，含有富的氨捻酸:是常用的天然培养基，可用于许多细胞系和原代细胞的培养。填空题54简述细胞培养过程中如何进行微生

27、物污染防治。参考答案：1）把好每一个关口，尽可能禁止任何有污染的物品进入培养操作 环节；2）抗生素：一般用常用量的夕10倍作冲击疗法。用药2448h后，再换常规培 养液。3）加温处理：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放置在41作用510h,最长不超过18h后，以杀灭支原体。4）动物体内接种：将支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借动物 体内的免疫系统消灭支原体。待一定时间后取出细胞，做原代培养再进行繁 殖。填空题55简述细胞培养污染的种类及污染的预防措施。参考答案：种类：（1）物理污染：温度、放射线、震动、辐射等；（2）化学污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物质的残留；（

28、3）生物污染（支原体污染）：外界的动物、微生物如霉菌、细菌、支原体和 其它类型的细胞都可能侵入培养环境引起污染。预防措施：（1）良好的规章制度：只有相关人员才可进入细胞培养区，细胞培养区必须和 其他区域分开，细胞培养区应布局合理；（2）良好的无菌操作：所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌，吸入 或吸出液体时防止倾倒，不要触碰细胞培养瓶的瓶口，清洁区和污染区的材料 应单独处理；（3）保持工作区清洁：常规清洗地面和台面，定期清洁水浴箱、CO2孵箱、生 物平安柜等，及时清理废弃物；（4）合理利用抗生素（5）建立细胞库：消除了隐蔽污染的潜在危害（6）细胞污染的检测填空题56细菌污染参考答案：包括

29、所有混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的 异物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质及细胞。培养的细胞被细菌污 染均会造成细胞受损和死亡，是细胞培养工作的大敌。细胞发生污染时，常有培养液变浑浊和PH发生改变等现象，镜下观察细胞变 形、生长缓慢或分裂相消失，以及细胞圆缩脱落等现象。常有抗生素预防该污 染。填空题57克隆化参考答案：专指一般DNA在与载体DNA分子重组后，重组DNA分子由载体导入 宿主细胞内，依赖载体的复制能力在宿主细胞中进行扩增，形成一个无性繁殖 系的过程。填空题58融合剂参考答案：两个或两个以上的细胞融合过程中，能促使细胞融合并使细胞融合 的频率显著增大的物质，如

30、仙台病毒，PEG等。填空题59成体干细胞参考答案：在胎儿、儿童和成人组织中存在的具有自我更新、多向分化潜能和 增殖特性的多能干细胞，统称为“成体干细胞”。填空题60干细胞参考答案：是指具有无限或较长期的自我更新能力、多种分化潜能和高度增殖 能力的细胞。稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨 酰胺供利用。GlutaMAX-1二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟， GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全 降解。填空题6购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？参考答案：研究人员在冷冻细胞之培养时出现细

31、胞数目太少，大都是因为离心 过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后 不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。但对于DMSO敏感的细 胞，还是复苏细胞时，用离心去除DMSO比拟好。填空题7培养细胞时应使用5%还是10%C02,或者根本没有影响？参考答案：一般培养基中大都使用HCO37co327H,作为pH的缓冲系统，而培 养基中NaIIC03的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaIIC03 含量为每公升3. 7g时，细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCOs为每公 升1. 5g时,那么应使用5沈。2培养细胞。填空题8如何消除组

32、织培养的污染？参考答案：当重要的培养细胞污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首 先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离 开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反响实验 确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐确实定毒性水平和消除培养污 染的实验步骤。1）在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓 度。2）分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围 内，把选择抗生素加入

33、到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐以下浓度， 0. 25, 0. 50, 1. 0, 2. 0, 4. 0, 8. Omg/mlo3）每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4）确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2 3倍浓度的抗生素的培养液 培养细胞2 3代。5）在无抗生素的培养基中培养细胞一代。6）重复步骤4。7）在无抗生素的培养基中培养46代，确定污染是否以已被消除。填空题9为什么要在溶解的一周内使用贮存在4c冰箱中的液体胰蛋白酶溶液？参考答案：胰蛋白酶在4就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟, 就会变得不稳定。填空题10细胞株参考答案：通过选择法或克隆法形成

34、法从原代培养物或细胞系中获得特殊性质 或标志，并保持这些特性的培养物。填空题11简述细胞计数步骤。参考答案：1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后 按下式计算：细胞数/ml =4大格细胞总数/4X 10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，假设细胞团 占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。填空题12简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过 程。参考答案：通常，体

35、外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段： 原代培养期：也称初代培养，是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代 之前的这一阶段。此期的细胞呈现出活跃移动的特点，可见细胞分裂，但不旺 盛。处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的 相似性。细胞群具有明显的异质性，细胞间的相互依存性强，在软琼脂培养基 培养时细胞集落形成率很低。.传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期，原代培养的细胞 经传代后常被称做细胞系。一般情况下，正常体细胞在传代10-50次左右后， 细胞分裂的能力就会逐渐减弱，甚至完全丧失，细胞便进入衰退期。衰退期：处于衰退期的培养细胞，增殖速率已经

36、变得很慢或不再增殖，直至 最后衰退死亡。以上特点，主要是针对体外培养的机体正常细胞，对于体外发生转化的细胞和 肿瘤细胞而言，永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力， 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。每代贴附生长细胞的生长过程：游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。时间：10分钟一 4小时贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。底物：玻璃、塑料、胶原、其它 细胞等潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为624 小时。对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最正确，最适合进行实验研 究。停止期（平台期）：细

37、胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂机制：接触抑制、密度限制填空题13细胞培养中血清的主要作用是什么？参考答案：（1）提供基本营养物质；（2）提供贴壁和扩展因子（3）提供激素及各种生长因子；（4）提供结合蛋白（5）对盲养中的细胞提供某些保护作用 填空题14简述消毒灭菌的常用方法、要求条件及主要应用范围。参考答案：物理消毒灭菌法紫外线：用于空气，操作台外表和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。消 毒时间：30min （至少）；紫外杀菌功能除了紫外本身以外，还可以由产生的臭 氧来完成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。过滤：0. 22 um （适用于液体）湿热（高压蒸气灭菌法）15磅，121C,

38、20min各种物品有效消毒压力和时间不同，一般要求如下：培养用液、橡胶制品10磅10分钟布类、玻璃制品、金属器械等15磅20分钟干烤：160C, 2小时（适用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即翻开箱 门，以防冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。化学消毒灭菌法：75%酒精主要用于操作者的皮肤，操作台外表及无菌室内的壁面处理。1 2%。新洁尔灭主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。抗生素主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。细胞培养中最常用的抗生 素是青霉素（常用浓度是100u/ml）与链霉素（100ug/ml） 不要在原代培养 中加入抗生素。填空题15收集细胞时一般常用的转速和时

39、间是多少? 参考答案：转速：1000r/min；时间:5min填空题16运送细胞的比拟简便的方法是哪一种，简述其过程。参考答案：一是用液氮或干冰保存运输，效果较好，但需用特制容器如小液 氮罐等，又因液氮和干冰蒸发均较快，适于空运，比拟麻烦；二是充液法运 输，比拟简便。充液法运输操作如下：选生长状态良好的细胞，待达80%或90%汇合时，去掉旧培养液换入新培养 液，量要到达培养瓶的颈部（过满易污染），保存少许空间，塞紧瓶塞，空气 过多运输中气泡运动易使细胞脱落；妥善包装和运送；一般在不超过四五天到达目的地的情况下，对细胞活力无 严重影响；到达后，倒出大局部培养液，保存正常量，置37培养，次日传代。

40、填空题17简述台盼蓝排除检测法原理参考答案：原理：由于死细胞的细胞膜通透性发生改变，某些染料可大量进入 却不被排出，因而细胞呈色。而活细胞反之，能排出进入细胞内的染料，因而 不易着色。此法的原理即是利用死、活细胞对染料的不同反响而区分开两种细 胞。最常用的为“台盼蓝排除检测法”活体染色与细胞计数：将1滴细胞悬液（贴壁细胞可经0. 25%胰蛋白酶溶液消化后，吹打制成细胞 悬液）与2滴台盼蓝液混合后，滴入细胞计数板。2min后，在显微镜下计数至少200个细胞。未着色的为活细胞，呈蓝色的为 死细胞。计算活细胞百分比。考前须知：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否那么，局部活细胞也会着色，会 干扰实验结果

41、。填空题18 细胞汇合（Confluent）参考答案：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。填空题19细胞富集参考答案：当细胞别离纯化并不完全彻底，培养物中能到达以某种细胞为主 （占绝大多数）的程度。填空题20消化液 参考答案：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白 酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA）,其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶 原酶。在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中别离（散）出单个的细胞； 在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长外表并离散成单个细胞。填空题21全能干细胞参考答案：如ES细胞。全能干细胞可以分化成人体的各种细胞，这些细胞构成 人体的

42、各种组织和器官。更多内容请访问睦霖题库微信公众号填空题22试述细胞培养的基本概念、原理、优缺点及实际意义。参考答案：1）概念：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织）， 模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并 维持其结构和功能的方法。2）原理及优缺点：细胞培养是将确定所选组织用剪碎的小组织块或别离的单个 细胞进行培养，这种培养失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增 殖，特性化，获得遗传背景相同的群体，可以保存。3）实际意义：组织（细胞）培养对医学、生命科学的意义培养的组织器官或细胞，能再一定范围和程度上反映生命活动规律和机体功 能特点。培养的细胞为生

43、命科学和生物医学各种研究奠定了物质基础。如药物 筛选，疗剂评价，新生物制品研发，研究病毒及其他微生物，发现新的传染因 子，组织工程中的支撑技术等。细胞培养技术已经成为商品化生物技术产品的核心。如目前可提供的产品， 病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、 白介素和集落刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等； 酶类：组织型纤溶酶原激活剂；激素：EPO和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状 病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的各种单克隆抗体；细胞本 身（如干细胞）；皮肤重植等。4）组织（细胞）培养的局限性：细胞（组织）培养，包括器官培养终归是离体 培养

44、，缺少生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医学生物实验过 程及对结果的评估都必须考虑这些。填空题23简述体外培养用液的种类及用途。参考答案：主要包括：培养液（维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织 细胞培养时最重要的条件。）、缓冲液（中和培养液中的酸性物质）、平衡盐 溶液（配抗生素、消化液、洗涤细胞等）、消化液（别离细胞）、血清、pH调 整液和抗生素等其它常用液。填空题24与胚胎干细胞相比拟，成体干细胞有哪几个特点？参考答案：（1）成体干细胞体积小，细胞器稀少，RNA含量较低，在增殖过 程中处于相对静止状态，在组织结构中位置相对固定。（2）成体干细胞数量很少，其基本功能是参与组织更新

45、，创伤修复及维持机体 内环境稳定。（3）成体干细胞常处于一个有干细胞细胞基质、对干细胞的增殖和分化起调控 作用的各种信号分子的特定微环境或称生物位中，干细胞是自我复制还是分化 为功能细胞，取决于所在的微环境和自身的功能状态。（4）成体干细胞没有确定的来源。填空题25简述干细胞研究的主要内容与问题。参考答案：1 .主要内容1）干细胞的别离与鉴定2）干细胞的自我更新3）干细胞的定向分化4）干细胞的临床应用2 .问题1）胚胎干细胞建系及定向诱导成组织细胞的分子机制;2）成体干细胞横向分化的条件；3）各种组织的成体干细胞库的建立及临床治疗试验；4）细胞移植的免疫排斥问题。填空题26简述原代培养、传代培

46、养、二倍体细胞、克隆细胞株的概念。参考答案：原代细胞：直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培 养物。传代细胞：初代培养细胞从第一次传代培养后具有增殖能力的细胞群。二倍体细胞：细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相 同的细胞群。克隆细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞别离培养或通过筛选的 方法，由单个细胞增殖形成的细胞群。填空题27简答基因转导的目的和用途，并列举细胞内基因转导的常用方法。参考答案：将外源性基因（或基因组DNA）导入细胞的技术称为基因转导。目的：使外源基因能整合入受体细胞基因组中。用途：研究基因表达、结构和功能。培养细胞是最适宜的对象。基因转导，尤 其对于检测癌基因，更为常用。常用方法：染色体转导、细胞融合技术、磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微 注入法、逆转录病