月季的花药培养(经典)

1、共三十八页菊花(jhu)的组织培养共三十八页1.植物组织培养的概念(ginin)、原理、过程；2.激素扛杆及其作用3.外植体及其消毒过程比较4. MS培养基与微生物的培养基比较知识(zh shi)要点共三十八页5.菊花的组织培养的特定条件6.花粉发育要经历的阶段(四分体时期、单核期、双核期等)7.确定花粉是否(sh fu)处于适宜发育期的方法8.比较植物组织培养技术与花药培养技术的异同点共三十八页 指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整(wnzhng)植株的一种无菌培养技术。又称：植物(zhw)离体培养一、植物

2、组织培养的概念共三十八页概念(ginin)：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质植物(zhw)组织培养原理：植物细胞的全能性共三十八页什么叫分化？其实质是什么?什么叫脱（去）分化、再分化？愈伤组织的细胞有什么特点？如何(rh)控制细胞的脱分化与去分化？ 阅读32页解决下列(xili)问题：二、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达 共三十八页二、植物(zhw)组织培养的基本过程共三十八页愈伤组织(zzh)共三十八页三、影响(yngxing)植物组织培养的因素：1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不

3、同组织培养难度不同2、培养基的配制(MS培养基) 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸(yn sun)、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上部新萌生的侧枝共三十八页3、不同植物激素使用(shyng)顺序使用顺序 实验结果 先生长素，后细胞分裂素 有利于细胞分裂但不分化 先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 共三十八页4、不同植物(zhw)激素使用量生长素/细胞分裂素比值结果 比值高时 促根分化，抑芽形成 比值低时 促芽分化，抑根形成 比值适

4、中 促进愈伤组织生长 共三十八页思考：以下培养基出现的现象反应了什么(shn me)问题？生长素/细胞分裂素高 利于根和愈伤组织的形成适中 利于根芽的分化共三十八页5、pH、温度、光照（菊花组培） pH=5.8 温度控制在1822 每日光照12h6、消毒在培养的整个(zhngg)过程中，都需要是一个无菌环境共三十八页制备(zhbi)MS固体培养基外植体消毒(xio d) 接种 培 养栽 培四、实验操作 移 栽冲洗酒精无菌水冲洗氯化汞无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭毒共三十八页1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作(cozu)（酒精、酒精

5、灯灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个(zhngg)操作过程中，是如何来实现无菌环境的？共三十八页结果(ji gu)分析与评价（一）对接种操作(cozu)中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格共三十八页课题(kt)延伸（略）练习1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长(shngzhng)，如一些细菌、真菌等的生长(shngzhng)。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的

6、无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。共三十八页菊花(jhu)的组织培养再分化(fnhu)材料性质、营养物质、调节物质、环境条件外植体的消毒接种基本原理:细胞的全能性基本过程:脱分化愈伤组织影响因素：操作流程：配制MS固体培养基培养移栽栽培共三十八页共三十八页 植物(zhw)的花药培养在育种上有什么意义？花粉粒（1N）单倍体植株（1N）二倍体纯合子植株（2N） 缩短了育种(y zhng)周期，为新品种的培育开辟了新途径。共三十八页花的结构(jigu)共三十八页花丝(hu s)花药：囊状结构(jigu)，内有很多花粉

7、 花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。（一）被子植物的花粉发育雄蕊基础知识共三十八页（一）被子植物的花粉(hufn)发育共三十八页1花粉(hufn)母细胞（2n）4个小孢子(boz)(小孢子(boz)四分体)（n）减分有分1个花粉管细胞核（n）1个生殖细胞核（n）有分2个精子单核居中期（n）单核靠边期（n）花粉发育过程：共三十八页注意(zh y)：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子(jngz)在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一

8、次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。两个精子和一个营养核的基因型相同。共三十八页（二）产生花粉植株(zhzh)的两种途径形成原因：主要取决于培养基中的激素的种类(zhngli)及其浓度的配比共三十八页体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常(fichng)相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。共三十八页（三）影响花药培养的因素1、材料的选择 不同植物 同一植物的不同生理状况(zhungkung)（花期早期初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 此外，植株生长条件、材料低温预处理

9、、接种密度等2、培养基的组成共三十八页实验操作材料选取材料和消毒接种和培养共三十八页（一）材料(cilio)选取 通过(tnggu)镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法：醋酸洋红法。 某些植物的花粉细胞核不易着色， 采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 共三十八页为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难(kn nn)？答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。共三十八页二、材料(cilio)的消毒：花蕾

10、（70酒精）大约30s（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分（1氯化汞溶液）24min（无菌水）冲洗 月季(yuj)花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 共三十八页三、接种(jizhng)和培养剥取花药(huyo)接种花药培养分化培养基培养鉴定和筛选不要损伤花药？要彻底除去花丝？常常会出现染色体倍性的变化？每个培养瓶接种 （710 ） 个花药？花药长出愈伤组织还要转移到哪？主要原因是营养核和生殖核融合造成的共三十八页植物组织培养技术(jsh)与花药培养技术(jsh)的异同点项目相同点不同点植物组织培养技术离体的植物组织经

11、脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染色体数无需加倍。花药培养技术取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。共三十八页2、基因型为AaBb的水稻（条染色体）的花药通过无菌操作，接入试管后，在一定条件下培养成试管苗。（）愈伤组织是花粉细胞分裂形成的不规则的细胞团，愈伤组织必须从培养基中获得（）（ ）和小分子有机物等营养物质。（）要促进(cjn)花粉细胞的分裂分化，培养基中应有（）（ ）两种激素。愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，由芽发育成叶茎。这一过程必须给予光照，其原因是（）

12、利用光能制造有机物促进试管苗生长发育。（）试管苗的细胞核中有（）条脱氧核苷酸链。试管苗的基因型有： 水无机盐生长素细胞分裂素叶24AB Ab aB ab共三十八页3（9分）草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低(jingd)。品质变差。运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗。草 莓微型繁殖的基本过程如下：外植体 愈伤组织 芽、根 植株请回答：（1）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取_ 作为外植体，其依据是_ _ 。（2）在过程中，常用的MS培养基主要成分包括大量元素、微量元素和_，在配制好的培养基中，常常需要添加_，有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织。接种后25d，若发现外植体边缘局部污染，原因可能是_ 。（3）在过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是_ 。茎尖、根尖茎尖、根尖不含病毒(bngd)有机物植物激素外植体消毒不彻底 培养基中生长素类物质和细胞分裂素类物质用量的比值偏低共三十八页内容摘要菊花的组织培养。4. MS培养基与微生物的培养基比较。8.比较植物组织培养技术与花药培养技术的异同点。如何控制细胞的脱分化与去分化。不同植物的组织培养难度不同。同一种植物的不同组织培养难度不同。2、培养基的配制(MS培养基)。（二）是否完成了对