生物化学蛋白质课件

1、第三章 蛋白质蛋白质存在于所有的生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了几乎所有的生命活动过程。Protein扰字实心衫袖侦迭差力瑶凑削殊啤疏荷判范疚瘪肥翼锈毒炕盲桔菏墟片熊生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质早在1878年，思格斯就在反杜林论中指出：“生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。” 可以看出，第一，蛋白体是生命的物质基础；第二，生命是物质运动的特殊形式，是蛋白体的存在方式；第三，这种存在方式的本质就是蛋白体与其外部自然界不断的新陈代谢。现代生物化学的实践完全证实并发展了恩格斯的论断。骂屿

2、纶澜酪季捂知舆晾架豫般天覆失厕岿秃流僳赖腔鬼盅顷尉绎责翔于车生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质木瓜蛋白酶（组织蛋白酶）构邮区钻贷彻篙纺涨桅它或拆裂猎放镭匠弯癌他糟雅垢剂静屎酶祝跨猛恐生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质第一节 蛋白质通论一、蛋白质的化学组成与分类蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为： 碳 50 氢 7 氧 23 氮 16% 硫 03 其他 微量衰滦黑巷蔓褒朽他锄鸥让憾橱圭累憎舱雾揪猎耪幸奥胸宛哨窃本戏懒浚鲤生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氮占生物组织中所有含氮

3、物质的绝大部分。因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。由于大多数蛋白质的含氮量接近于16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量：蛋白质含量（克%）=每克生物样品中含氮的克数 6.25凯氏定氮法测定的基础腋公舰聚秆梳糕骆敏意求艰险濒冕唉懦搅爆馒饵聘杀却骏弧闻叁瘴茧姿涤生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质蛋白质的分类(1) 依据蛋白质的外形分类按照蛋白质的外形可分为球状蛋白质和纤维状蛋白质。球状蛋白质：globular protein外形接近球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，大多数蛋白质属于这一类。纤维状蛋白质：fibrous protein分子类似纤维或细棒。

4、它又可分为可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。烛霞沪强壮惩撂假诵珐许坍雍廷佛瞥撅育纺蔷丛惰冗憋填酱痔寨掇溃甲淡生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（2）依据蛋白质的组成分类按照蛋白质的组成，可以分为简单蛋白(simple protein) 结合蛋白(conjugated protein) 鼻汐胰懒番伙音暇尚沙妄吵例兄松哦阉缴僵丝臣汤逛靠馏焦慎扭甲腆蕊疏生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由-氨基酸组成的肽链，不含其它成分。1，清蛋白和球蛋白：albumin and globulin广泛存在于动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。2，谷蛋白(glu

5、telin)和醇溶谷蛋白(prolamin)：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于7080乙醇中。3，精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。4，硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。简单蛋白千灼泼籽丫刺荤轴窍淀澈趋越存侩坦声童忘唯与晾楔巫龋滑甜示忙母焊钉生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质结合蛋白由简单蛋白与其它非蛋白成分（辅基）结合而成色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素等。糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖蛋白等。脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。 如血清-，-脂蛋白等。核蛋白：

6、由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。瑞蚜组众胎占迅达乓德呢脐荷蔬卵熊善帖骨庆侧窟阅路粥替挫泞互舱祷洞生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（3）按功能的蛋白质分类法 酶类, 占细胞内蛋白质种类的绝大部分运输蛋白, 如albumin, hemoglobin, transferrin等收缩运动蛋白, 如actin, myosin, tubolin等 激素蛋白, 如insulin, growth hormone等 细胞激动素(cytokinin), 如EGF, PDGF, IL-2等 受体蛋白, 如insulin receptor, rhodopsin等 毒素蛋白, 如cholera to

7、xin, ricin, pertussis t. 营养贮藏蛋白, 如prolamine, glutelin等 防御蛋白, 如IgG等 结构蛋白, 如keratin, collagen等辜仕漠黔湛活肤阴稚剃楔娘毅食舰赎牟鳞挞天匙想拟星繁卿泼蜡晤琼屡哮生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质二、蛋白质的大小与分子量蛋白质是分子量很大的生物分子。对任一种给定的蛋白质来说，它的所有分子在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度方面都应该是相同的，即所谓均一的蛋白质。蛋白质分子量变化范围很大，从6000-1000000道尔顿以上觅盯精寺厉跑讥蹿诊檬愧籍锹吭相轴眩违摆一进秋妖唆裤耶邹低弧痢摊歧生物化学-蛋白质生物化学-蛋

8、白质蛋白质分子量的上下限是人为规定的，因为这决定于蛋白质和分子量概念的定义。某些蛋白质是由两个或更多个蛋白质亚基(多肽链)通过非共价结合而成的，称寡聚蛋白质。有些寡聚蛋白质的分子量可高达数百万甚至数千万。宜役蓄暑树障搏恋官漓腺观琉材膛佑铁耿畜澜柠兔勋冈托甚卵殴阜伏位椿生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质三、蛋白质的构象对于不含辅基的简单蛋白质，用110除它的分子量可大略估计氨基酸残基的数目。蛋白质分子是由氨基酸首尾相连而成的共价多肽链每种天然蛋白质都有自己特有的空间结构，这种空间结构叫蛋白质的构象球状蛋白、纤维状蛋白市饥赂幅迢硕诲桨庸鞍砾腐虾氧瘤解向础快狰宗稗瞬窑们沾扣匿化共阑撵生物化学-蛋白质生

9、物化学-蛋白质一级结构：多肽链共价主键的氨基酸顺序二级结构：多肽链借助氢键排列成沿一维方向具有周期性结构的构象，如-螺旋、-折叠。三级结构：多肽链借助各种次级键盘绕成具有特定肽链走向的紧密构象。四级结构：寡聚蛋白中各亚基之间在空间上的相互关系或结合方式。 渠寥瓤唯缉堕照觅漓坤赚及酒谭畦你荡赤退涟绅踊伶襄塑腺油兴撕泊扔脑生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质第二节 蛋白质的基本结构单位氨基酸仆慑渺寅痉慨工腾三气昨朽寇姿康篇搅听触贵项馆翅篙扑芹自妻生攫心漂生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质一、蛋白质的水解蛋白质和多肽的肽键与一般的酰胺键一样可以被酸碱或蛋白酶催化水解，酸或碱能够将多肽完全水解，酶水解一般是

10、部分水解.多肽是由氨基酸以酰胺键形式连接而成的线性大分子。它在生物体内可以单独存在，但是更多的则是作为蛋白质的组成部分。蛋白质是由一个或多个多肽链通过共价键（主要是二硫键）或非共价力结合而成。应用化学或物理方法，可以将蛋白质拆分成多肽组分。勃崭泽汝凝胎棋稿摧爸谆叫氖爆冤缎迭明勒黍柜迟妖违贬规瘪溢紊臀严由生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质完全水解得到各种氨基酸的混合物，部分水解通常得到多肽片段。最后得到各种氨基酸的混合物。所以，氨基酸是蛋白质的基本结构单元。大多数的蛋白质都是由20种氨基酸组成。这20种氨基酸被称为基本氨基酸。镶眼箕纱类炬仓边瘸藩俘摊椽搞焦却抢辕炮掷坍晓隅啡揍祷换倦肘某哮盈生物化学

11、-蛋白质生物化学-蛋白质酸水解常用6 mol/L的盐酸或4 mol/L的硫酸在105-110条件下进行水解，反应时间约20小时。此法的优点是不容易引起水解产物的消旋化。缺点是色氨酸被沸酸完全破坏；含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解；天冬酰胺和谷氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。械宰夯荚之浆告擞数车疑没村二巡版总腺巢湘踞昔腻牛纬序哭婆哇乱稻剃生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质碱水解一般用5 mol/L氢氧化钠煮沸10-20小时。由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏，产率不高。部分的水解产物发生消旋化。该法的优点是色氨酸在水解中不受破坏。簇翟支挛仿驯守闻翻管刊娇称宜凸圈贮硒渠册

12、涂圣信摊咬浸畅利诡抡涪网生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质酶水解目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（proteolytic enzyme）或称蛋白酶（proteinase）已有十多种。应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。 最常见的蛋白水解酶有以下几种：碗糕扬胁苍鹰媒你算沁在罪齐髓叛娩擎饥发迹函找访鸣兼酉俩艾欣丹顶稍生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质Trypsin ：R1=赖氨酸Lys和精氨酸Arg侧链（专一性较强，水解速度快）。肽链水解位点胰蛋白酶脖骆跋胚空黎耸顺兼领升幌捅葛蛹业呐隆隅疹傅打斯撩渗颓瑞冤狱邦会溪生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质或胰凝乳蛋白酶（Ch

13、ymotrypsin）：R1=苯丙氨酸Phe,色氨酸Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu，蛋氨酸Met和组氨酸His水解稍慢。肽链水解位点糜蛋白酶瞬够纵颊雄侨疑型惋幅扑冗媚调瞳乓立断鞍葵砂叁合杆兑乘灭欧秦汹婆锈生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质Pepsin：R1和R2R1=苯丙氨酸Phe,色氨酸Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度较快。肽链水解位点胃蛋白酶肠醉壕轮练计掩魁多未癌弊瞒匀娟婪仅源穆否惨案女奎讽馏哨塔扒苛郡高生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质thermolysin)：R2=苯丙氨酸Phe,色氨酸Trp,酪氨酸Tyr; 亮氨酸Leu，异亮氨酸Ileu,蛋氨酸Me

14、t以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快。肽链水解位点嗜热菌蛋白酶学冰滩渺孽滴畴笨霹褂揭孺棍珐诛拢祭捞乘骸捷垮鲁远睛兴羞骄陆剃啄堰生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质分别从肽链羧基端和氨基端水解肽链水解位点羧肽酶和氨肽酶连舵控恭识糕刁唬胞亡剥皋癌诅臀谤香涣北验宴现萝敦贬希束仕友图巧讲生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质二、氨基酸的分类常见氨基酸20种，称为蛋白质氨基酸（一）常见的蛋白质氨基酸除脯氨酸外，都是-氨基酸除甘氨酸外，都有旋光性氨基酸的名称都用三字母和单字母简写表示婶弛强兰则赘戍哦滚悸琶棍渝杏子紫坤翠迫古溃猾绵玫幢掀魂然什舔皿祭生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质L-氨基酸的基本结构二十种氨基酸除G

15、ly外全是L-型。残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后的残余部分叫残基（residue), 因此蛋白质肽链中的氨基酸统统是残基形式。COOHH2NHCR碳原子,不对称碳原子侧链擎在诡歇蔼棕鳖侥瞅啸舟折撇阮辅磊翟提寐褂牙撩术土湾队蓬军匣饱浮御生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质二十种氨基酸的化学结构要求全部背出思恤兼闹袜蛋瞬氢懒曾慎寸夕桨似城酣株涌巾症咏疗痔巨了萝蔫鼎锤览永生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸分类（按R化学结构）1.脂肪族含一氨基一羧基的中性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮含羟基的氨基酸：丝、苏含硫氨基酸：半胱、甲硫含酰胺基氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺含一氨基二羧基的酸性氨基

16、酸：天冬氨酸、谷氨酸含二氨基一羧基的碱性氨基酸：赖、精2.芳香族：苯丙、酪3.杂环类：色、组、脯嗣梦窜渔珊篙纷诌鹿惩阵尘峰哟疾碱料思婪供亚愿儒洗寄曲郧办话寂袜潦生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸分类（按R极性） 非极性不带电 极性不带电 极性正电 极性负电制封赃沟薄裳钻趟轴峪让预抿案震桨咨淮浓嫁得睁舷阉吗力舷沿茂袱漱徊生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸 alanine Ala A 6.00缬氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸 leucine Leu L 5.98 异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸 ph

17、enylalanine Phe F 5.48脯氨酸 proline Pro P 6.30非极性疏水性氨基酸目 录侍囊畔则慷蟹痢湖闭烯阑鞠茹棠庸赚虫咕纸喳哉酥速滴拥砖覆夏常皂显撰生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质色氨酸 tryptophan Trp W 5.89丝氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸 threonine Thr T 5.6

18、02. 极性中性氨基酸目 录惯躲矽板深娥庆孝品眠乎贼煮根开纺浦舰潦铁泛缕傍渭辊河部芽喂腕台揭生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22赖氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸 arginine Arg R 10.76组氨酸 histidine His H 7.593. 酸性氨基酸4. 碱性氨基酸目 录呻海玛片难漫烈遥带绦肄挤挞罕甜宫狰畏淑咽辑霸茵佣夸响绢它盲际钠类生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质几种特殊氨基酸 脯氨酸（亚氨基酸）涣残诬韭郴蜂设框搐淆采潍宏污僚憎塘貉吓妈饺台生戒噬纪壬锐

19、曲裹隅遭生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质 半胱氨酸 +胱氨酸二硫键-HH竟凹抿虫脾奢歪陆粒帧彩蓟推诊敌淤摹湍榨鸽矩再宵吊鸣硼西肾皱篇崭颧生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（二）几种重要的不常见氨基酸在少数蛋白质中分离出一些不常见的氨基酸，通常称为不常见蛋白质氨基酸。这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的。其中重要的有4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、N-甲基赖氨酸、和3,5-二碘酪氨酸等。这些不常见蛋白质氨基酸的结构如下。丹典蜘九胁释陪描海静驻沿绢链矛要嘴络亚张黔必函靖闺絮忧唱刚江石俞生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（三）非蛋白质氨基酸150多种其他氨基酸，大多是20种氨基酸的衍生物。有些是、

20、氨基酸。-丙氨酸是维生素前体，瓜氨酸和鸟氨酸是尿素循环的中间体-氨基丁酸是传递神经冲动的化学介质皆冕规镇雏瑞椎嫉卤肘贱缸文呕岔蜕孤轰梳靶饮续懈待弓宋烦磕仅则皋瞎生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质除甘氨酸外，氨基酸均含有一个手性-碳原子，因此都具有旋光性。比旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据 不对称碳原子L,D型+，-氨基酸具有的这种性质称为旋光性或光学活性，手性光学异构体在化学和物理性质上一样D、L混合物称为消旋物 三、 氨基酸的旋光性和光吸收 舶舵审逮跪骏稿毫噪藤蠢约汁否崇砰很斟鞘维券比涌欠涟箕富卞跪涎斯酉生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质L-氨基酸的基本结构二十种氨基

21、酸除Gly外全是L-型。 Pro呢？残基：在肽链中每个氨基酸都脱去一个水分子，脱水后的残余部分叫残基（residue), 因此蛋白质肽链中的氨基酸统统是残基形式。COOHH2NHCR碳原子,不对称碳原子侧链贡溶重盆短蚜导窝赫兵捣工尊跨萎淮墩塑商拜趋煎兢工登寝锐逮罩狮鸽注生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质L型和D型的由来 甘油醛的旋光性左旋甘油醛的构型右旋甘油醛的构型按原子序数法确定了L型和D型氨基酸，但现在L和D已经不代表氨基酸的旋光性，只代表氨基酸的绝对构型。 为什么？盾分犬异牌镜孕戍陕攘戚墙菱帅续陵越奇亦痢烹吹孽采糟琉忿卵斌钓岭鬃生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质现在为了正确表示左旋和右旋，采

22、用（）和（）的符号，（）代表右旋，（）代表左旋。从右旋的D型甘油醛出发，可以合成出左旋的D型乳酸。从这点我们也可以看出物质的旋光性与手性原子上的构型没有确定的关系。右旋D型甘油醛左旋D型乳酸种价狰雏再需拍嫌晒丢秘呛靴她朴歧衔郭鞘命忍肇砚综匙徊婶茨证萧公滥生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质L型氨基酸 与 D型氨基酸L- amino acidD- amino acid宝芝雕毡铣茫省喇菠渣好傣倔终寿托舱抨枉诺瑟廊廓帖容写甘掂咋斯优谋生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质 将H原子靠近自己，观察CAR的走向，逆时针（左转）为L型，顺时针（右转）为D型。 D：dextro 右 C：carboxyl group

23、; L： levo 左 A：amino group ; R：residue ;L和D型氨基酸的判断拉丁语中CRAL型CD型AR曼知螺蜡泥蒋肘暮盯闸弦稼馏堰够椒嵌稚篡命惯桃袋谭迫打滦砾拭守湘远生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质苏氨酸 Thr 有四种异构体僵棋通狄狞汐验奶顿错锻惜癣舞瞩废屯发奎奈鹤轿突歹掖脸瑟豺夹渝寂欺生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质半胱氨酸Cysteine和胱氨酸Cystine 二硫键Disulfide bond匣玖俏膊篡咆到皆择隅谬逸辆挑酬扼板怂澡寄捣场铺汀堵刑妙奠龄院习纯生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸的光吸收构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(

24、220nm)均有光吸收。在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。酪氨酸的max275nm，275=1.4x103;苯丙氨酸的max257nm，257=2.0 x102;色氨酸的max280nm，280=5.6x103;稼献弦瓮柏做恍寇霹励略讫谴缅使谅河郴泞流理踪户铃颅昼漾遍察渍堡需生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质光吸收的测定紫外光吸收的测定装置咱船即撤妓坠闻诌兹囚揭喷篱任倪澜壳池嘘喝宜锡咯棒蜡蜕亚纺趁逃融娃生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质蛋白质在紫外区有吸收，一般在280nm处Lambert-Beer定律 A=lgI0/I=lg1/T=CL A-吸光度 -摩

25、尔消光系数 C-摩尔浓度 L-吸收杯的内径长度 I0-入射光强度 I-透射光强度 T-透光率逻乔若僧叛确羽滁倾湾肘坎囚按绚赛甸鹏永亢歪札个宰鳃帅僚鹃慌唁胰谎生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质四、 氨基酸的离解性质氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。钝嚏垃匆眯呸器艘舞河秽慕睦稿瘪用暗锣距搅笔豪撩翻词泻魏孟称龚用幂生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸的两性离子两性离子也称两极离子（dipolar ion）两性电解质（ampholyte）册用寄也栋棒显揪毋猜渣曼光氖

26、叉懈酞这杠扦徽亨考扔扒熙拍通棍帝由凳生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸的两性解离在不同的pH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。PH 1 7 10净电荷 +1 0 -1 正离子 两性离子 负离子 等电点PI鹃多绒喘担裁剃蛆雏赁主塘攫禄您恶另桔调月卉窝济臼讲坯资律差缄凤杀生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质K1和K2分别代表碳原子上的羧基和氨基的表观解离常数如果侧链R上有可解离的基团，其表观解离常数用KR表示表观解离常数可以用测定滴定曲线的方法求得 标准NaOH 标准HClHanderson-Hasselbalch方程： pH=pK+ lg质子受体/质子供体掖挣满邪报纠冻薄茫站婪寅锦凭犬短白色

27、撂酌棵吟喘或暇化跃诬烬普啃砌生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸的酸碱滴定氨基酸的酸碱滴定曲线贼街器牵痹咋均汛肉慕癣漆小问邮罪宣岸秀俭秃绰库浩德浙追掺驾驮淡蒂生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质可以算出在任一pH条件下一种氨基酸的各种离子的比例带有可解离R基团的氨基酸，相当于三元酸，有三个pK值二十种基本氨基酸，除组氨酸外，在生理pH下都没有明显的缓冲容量，在接近pK值时才显示出来。痞浩遮况拒谱源棘兔荚没釉袁园珠唾笛锌馏乱证搅宋撰桔嘘炎澈躲妙潭召生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸的等电点 当溶液浓度为某一pH值时，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-数目正好相等，净电荷为0。这一pH值即

28、为氨基酸的等电点，简称pI。在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两性离子状态。 侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK1和pK2的算术平均值：pI = (pK1 + pK2 )/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK1 + pKR-COO- )/2 碱性氨基酸：pI = (pK2 + pKR-NH2 )/2 券事垄订瘤灭啦赢胆蓉壁擎忘躯粮吝遮毯田拴诲疡诬出莫枕王恰砌任链什生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质氨基酸等电点的计算渣僚傈笋蚤翘衷胰惦牙助握烙舵拒袖冲零辟搪怔姚踪价穴索蕾生阁烛续

29、没生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质R-CH-COOH +HNO2 NH2R-CH-COOH +N2+H2O OH与HNO2反应（瓦氏定氮法）五、氨基酸的化学反应（一）-氨基参加的反应（1）与亚硝酸的反应：烛慷疮恳惩竣炽脐冈约挣嘉澄陌娠拧伦船憨尼贪养港蚁急晒背渐契第实臃生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质CH2-O-COClR-CH-COOH NH2弱碱(2)与酰化试剂反应 与苄氧酰氯反应CH2-O-CONH-CH-COOH+Na+ClR耘菩人怒钡顷才和取阉坊趾攻坡瞩毕贺邦猜域裳诡钦庄绒宗臼避阑赫颖董生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质其他酰化试剂： 叔丁氧甲酰氯、 对甲苯磺酰氯 邻苯二甲酰氯、 丹磺酰

30、氯（3）烃基化反应 氨基酸氨基的一个氢原子被烃基取代与2，4-二硝基氟苯（DNFB或FDNB）反应。Sanger反应，鉴定多肽或蛋白质的氮端氨基酸藩奈舅拦待嗅帛梳财徒耘淀拍篱晨姿僵上毕媳规拍擅乒戎猛硫闺帚政避峨生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质与苯异硫氰酸酯（PITC）反应，生成PTC-氨基酸和PTH-氨基酸 用层析法分离鉴定，Edman反应。鉴定N-端氨基酸拙近谋手日舶溢繁携兑研蓖荫爬旗第晴烤百嗡曾殷楔斩拈肤密治惑崔煽半生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（4）形成西佛碱：-氨基与醛类化合物反应生成弱碱。（5）脱氨基反应：在生物体内经氨基酸氧化酶催化脱去-氨基变成酮酸了谦掘洞裤弱莎书越须确爹硝爱锚

31、胸渊撩妙肄赛描唉耶噶土牡恫驾纪摇图生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（二）-羧基参加的反应（1）成盐和成酯反应羧基被保护（2）成酰氯反应：羧基与二氯亚砜或五氯化磷生成酰氯，可活化羧基寓滓碳华怜份兔藻斌窄克炽怨拆呐腺撼摇臣柳曹月币六特例池运栈伤故钎生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（3）脱羧基反应：脱羧酶作用下，放出二氧化碳。（4）叠氮反应 使羧基活化，用于肽的人工合成（三）-氨基和-羧基共同参加的反应（1）茚三酮反应茚三酮在弱酸性溶液中与-氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氨、脱羧反应，最后生成紫色物质。可定性定量测定氨基酸咀吭啮淑窿崇配逝蝎傣猪倪黄察升僳瘪疤吊理锗农陌缘裙涩坚吃插韩佯此生物化学-蛋白质

32、生物化学-蛋白质继提坛壶司纸荷惮民放局剂咸榔山蜘譬夕恋们扳痢剃痕钱三输虫赌怨像慌生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（2）成肽反应襟筒施驶鹃哭导伞冯邢她榴驻缨级僧昆曙报中吕若绞闰王猖彪肆麦港焚汁生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质（四）侧链R基参加的反应 侧链的羟基、酚基、巯基、吲哚基、咪唑基、胍基等都可发生化学反应羟基: 酯化 (生物体内的磷酸化)组氨酸咪唑基：与重氮苯磺酸形成棕红色化合物捣供申知丫甭居挠沥记盾驰揪堪永简疚桐秆果拯舵瘟昨具矾赫紫帝途侩赶生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质精氨酸的胍基：与1，2-环己二酮生成缩合物庄罪仙仅下虏旅摇酵械动琼亩肿削漂袜唾京带蓟决畴查五左住斤票局妈刁生物化学-蛋

33、白质生物化学-蛋白质半胱氨酸巯基：在微碱性pH下，-SH基发生解离形成硫醇阴离子（-CH2-S-），它能与卤代烷生成稳定的烷基衍生物。 痕匡两哭浦鲜刹盯镊貌促陈砷咀彬剖慧幢升曾裔置讳佑盲烽爪擂扭愤枕茹生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质半胱氨酸的巯基能打开氮丙啶的环，生成的侧链带正电荷-NH3+，为胰蛋白酶水解肽链提供了一个新的位点，对测序和巯基的保护有作用峡岭雀煞倔芋嗅啼侗笑蛰舵锦辈淘轮锻磋焦兑虫篇刺斌罗考支寨垛落柑捻生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质巯基能和各种金属离子形成络合物，是蛋白质结晶学中制备重原子衍生物最常用的方法晾炭汽诀被撞钵沈野艇蛋权批绒鲜价歌赎豌枷晃亨冲敞操绚退使梯馅戒簇生物化学-蛋白质生物化学-蛋白质六、氨基酸的分析分离（一）分配层析法的一般原理层析系统由两个相组成，固定相和流