植物组织培养实验基本步骤

1、植物组织培养实验基本步骤一、植物激素的配置常见激素：二氯苯氧乙酸（2, 4D）、蔡乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚一3 丁酸（IBA）1、生长素类：（1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根 的分化，诱导愈伤组织（2）、常见生长素：二氯苯氧乙酸（2, 4D）、蔡乙酸（NAA）。NAA被广泛用于生根，2, 4D有利于愈伤组织的诱导和生长。IAA 容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。（3）、溶解方法：用少量1mol/L NaOH或95%酒精预溶解，再加 蒸馏水定容，以前者为好。（4）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存2、细胞分裂素组织培养中，细胞分类素主要

2、促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上 分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂， 细胞伸长，细胞分化和器官形成。（1）溶解方法：用少量（1ml） 1mol/L HCL预溶解，再加蒸馏水定 容。（3）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 三、培养基的制备与灭菌（一）、培养基的制备1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器 皿等放在指定位置。2、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母 液和植物激素加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添 加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体 积。3、充分混合后，用1mol/L

3、NaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为培 养基要求pH值。4、趁热把培养基分装到广口瓶中。封好瓶口。待灭菌。（二）、培养基的灭菌灭菌温度及灭菌时间：121C（1.06kg/cm2）下灭菌20分钟。（如是 实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121C（1.06kg/cm2）下 灭菌30分钟）1、检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。把分装好的培养 基放入灭菌锅的消毒桶内。2、盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间 参数，开启电源加热灭菌。3、灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌 锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已 灭菌

4、的培养基。4、刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致 部分培养基沾附在瓶壁。放置在水平桌面上自然冷却。在室温下放置 1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查 没有杂菌生长的方可使用。四、无菌操作技术和接种1、接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种 用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种房间紫外 灯，照射约30min，然后关闭紫外灯。打开房间换气扇及微开超净工 作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。（此步由专人 统一负责）2、接种室灭菌过程中同时对外植体进行表面灭菌。先将接种材料在 流动的自来水下涮洗干净，吸干水份后切成大约70mm长的片段放进 500ml烧杯中，用蒸馏水冲洗2次，倒掉蒸馏水后倒入0.1%的升汞水 消毒，将材料淹没浸泡约10分钟（期间用镊子搅拌几次）。3、把在消毒液中的接种材料转移到超净工作台上。用无菌镊子将已 完成灭菌的接种材料转移到烧杯中，用无菌水清洗3次，每次不少于 1分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除去消毒液。最后一次清洗后转移到无菌托碟上，将接种材料切成一定大小（花托 0.5cm2、茎段 0.5-1cm）。4、取下培养瓶的盖子用火烧灼瓶口。用镊子将外植体轻轻插入到琼 脂上，立即盖上盖子。5、操作完后将镊子等器械浸入75%酒精中。操作器械需