植物愈伤组织培养

1、学院班级 教师 姓名 学号植物愈伤组织培养生命科学技术学院08级生物工程臧忠靖邢宏堃20084082028植物愈伤组织增殖和分化培养摘要：愈伤组织是指外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分 生细胞，继而由其衍生的细胞分化成的薄壁组织。在植物的组织培养中，从一块 外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：启动期、分裂期和形成期。 启动期指细胞准备进行分裂的时期。分裂期是指外植体细胞经过诱导以后 脱分 化，不断分裂、增生子细胞的过程。分裂期愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结 构疏松，颜色浅而透明。分化期是指在分裂的末期，细胞内开始出现一系列形态 和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生

2、不同形态和功能的细胞。愈伤组织的生长与微生物相同，均呈“s”型，分为延迟生长期、指数生长 期和静止生长期。在延迟期内，刚接种的的愈伤组织尚未完全适应心的环境，不 能很好地吸收营养物质，生长缓慢；在指数生长期，生长加速，培养物鲜重急剧 增加；培养后期，即静止期，培养基中养分几乎消耗尽，不能提供培养物增殖所 需的营养物质，生长几乎停滞。愈伤组织分化主要有两条途径，即器官发生途径和体细胞胚胎途径。前者 又分为直接发生和间接发生两种。直接发生方式是指器官到器官，比如由茎尖到 不定芽等，间接发生途径是指由外植体脱分化后形成愈伤组织，然后再有愈伤组 织喜宝发生再分化形成组织和器官。愈伤组织如何分化受多种因

3、素的影响，如植 物物种、品种、培养基中化学成分及其使用量、酸碱度、生长素和细胞分裂素的 种类及其配比、培养时的温度、光照等等。生长素和细胞分裂素的配比在外植体脱分化和培养体再分化过程中使用。由于培养目的的不同，外植体取材物种不同、取材部位不同，其内源激素的的含 量与比例不同，培养时培养基中需要添加的外源激素的种类及其配比亦不同。细 胞分裂素比例高时，有利于芽的分化，反之，生长素高时，促进根的分化。关键词：愈伤组织，增殖，分化实验目的1.1学习愈伤组织增殖的方法1.2 了解愈伤组织分化的原理1.3学习诱导愈伤组织分化的方法实验材料、试剂及设备2.1仪器设备超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、无菌水2

4、.2试剂培养基母液、CH （水解酪蛋白）、蔗糖、琼脂，2,4-D, 6-BA, NAA2.3实验材料新鲜的胡萝卜、菊花花瓣实验步骤3.1培养基的配制3.1.1愈伤组织的增殖培养基配方：胡萝卜：MS 基本培养基+2,4-D 2mgL+0、2mg/l 6-BA+CH 200mg/l+3%蔗 糖+0/8% 琼脂pH5.8母液吸取量（ml）=配制培养基的数量（ml）/母液扩大数量生长调节剂吸取量（ml）=培养基要求的含量/母液每ml的含量3.1.2菊花花瓣生芽培养基配方：分化培养基（先生芽）;MS基本培养基+2mg/l 6-BA+0.2mg/l NAA+3%蔗糖 +0.8% 琼脂pH5.8母液吸取量（

5、ml）=配制培养基的数量（ml）/母液扩大数量生长调节剂吸取量（ml）=培养基要求的含量/母液每ml的含量3.2灭菌培养基及器具灭菌培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决 于温度，常用的灭菌温度为121C，所需时间应随要灭菌的液体的容积变化而变化 灭菌结束后待温度下降到50C以下，才能取出已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌。植物材料的灭菌植株各部分的表面携带着各种微生物，他们是植物组培的污染源，所以在接种 培养前必须进行彻底的表面消毒；组织内部侵染的真菌或细菌很难消除，这些组织 一般淘汰不用。消毒前需用流水清洗植物材料表面污垢，再用无菌洁净滤纸吸干水 分。植物材料的灭菌

6、需在超净工作台内进行，可选择不同的灭菌剂进行植物组织表 面消毒。同时注意，表面消毒剂对植物组织也是有毒的。因此，应当选择消毒剂的 浓度和时间，尽量减少组织的死亡。灭菌后，需用无菌水反复冲洗，彻底洗去表面 消毒剂。如：胡萝卜消毒：将胡萝卜用洗涤灵清洗，擦干，切段。进超净工作台后，先用75% 酒精擦洗切段，擦干后，在2%次氯酸钠中浸泡5秒钟，用无菌水冲洗10次，无菌 滤纸吸干，用灭过菌的打孔器取材。准备工作就绪后，可以进行接种。3.3按照无菌操作，小心挑取愈伤组织3-5，放置到分化培养基或增殖培养基中。 注意标明接种日期和外植体名称。3.4放置培养室培养，2周后统计愈伤组织分化情况，并计算分化率。分化率（%）=（生芽愈