款冬花及其所含生物碱对小鼠肝脏毒性作用的研究

1、款冬花及其所含生物碱对小鼠肝脏毒性作用的研究【摘要】目的探究款冬花提取物、总生物碱部位、非生物碱部位和克氏千里光碱senkirkine对小鼠肝脏的毒性作用。要领小鼠灌胃赐与款冬花水提液、醇提液、总生物碱、非生物碱、克氏千里光碱及腹腔注射克氏千里光碱，一连给药7d后，测定体重变革、肝脏指数，血清中GT，GPT，TBIL的含量，并举行肝脏病理构造学查抄。效果总碱组、克氏千里光碱口服和腹腔注射组明显按捺小鼠体重增长，血清生化指标明显升高，克氏千里光碱两组的肝脏指数显着增长。病理切片表现，水提组与比拟组形态学无差异；总碱组形态学有所改变，肝细胞呈轻度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死，肝小叶及汇管区未见炎细

2、胞浸润；克氏千里光碱两组肝细胞均呈差异程度细胞水肿，可见肝细胞点状和碎片状坏死，肝小叶及汇管区可见少量炎细胞浸润。结论在所给剂量下，水提液无肝脏毒性，用药宁静；总生物碱、克氏千里光碱有显着的肝脏毒性。【关键词】款冬花肝脏毒性小鼠血清生化指标病理构造学Abstrat：bjetiveTstudythehepattxiityftheaterandethanlextrats,thettalalkalidandnn-alkalidpartsfFlsFarfarae,asellassenkirkine,apyrrlizidinealkalidislatedfrFlsFarfaraeinie.ethdsie

3、eregiventheaqueusandalhliextratsraly,thettalalkalidandnn-alkalidparts,senkirkine(senkirkine-IG),respetively,andalsintraperitnealgivensenkirkine(senkirkine-IP),fr7days.HepatiinjuryeffetsereeasuredbyexperientaldatafbdyEight,effiientfliver,levelsfGT,GPTandTBILinserufuse;histlgialexainatinfuseliverasals

4、arriedut.ResultsThettalalkalids,senkirkineIGrIPsignifiantlyinhibitedtheeightgainandinreasedthelevelsfGT,GPTandTBILinserufie;thesenkirkine-IGandIPbviuslyinreasedtheeffiientfliver.parediththentrlgrup,theresultsfhistpathlgiexainatinftheuselivershedthattheliversfietktheaqueusextraterentinjured,thenestkt

5、hettalalkalidsereslightlyinjured,andthenestksenkirkine(IGandIP)eresignifiantlyinjured.nlusinTheaqueusextratfFlsFarfaraeisnttxitliverfieattheexperientaldse,butthettalalkalidsandsenkirkinearetxitliverfie.Keyrds：FlsFarfarae;Hepattxiity;ie;Serubiheialindiatrs;Histpathlgiexainatin款冬花为菊科植物款冬Tussilagfarfar

6、aL.的枯燥花蕾，又称冬花，性温、味辛，具有润肺下气、止咳化痰之成果，临床上重要用于新久咳嗽、喘咳痰多、劳嗽咳血等症1，为止咳平喘方剂中的常用中药。但是，化学身分的研究表白款冬花中含有具有肝脏毒性的吡咯里西啶生物碱hepattxipyrrlizidinealkalids,HPAs2。据报道，款冬花药材中含的HPAs有seneinine和senkirkine3，以是其临床利用的宁静性引起了天下各国的器重4，部门国度明令抑制利用款冬花5。款冬花的毒性到底怎样，是否可以在临床上继承利用，如今尚无实行性文献报道。为了探究款冬花的毒性及其巨细，本研究就款冬花差异提取物水提物，醇提物，提取部位(总生物碱部

7、位，非生物碱部位)，以及HPAs单体克氏千里光碱senkirkine对小鼠有无肝脏毒性举行了研究。1质料与要领1.1质料、药品及仪器款冬花，购于安徽亳州，经中国药科大门生药学研究室张勉传授断定为款冬TussilagfarfaraL.的枯燥花蕾。水提组：款冬花药材加10倍量水热回流提取3次，归并提取液，浓缩至0.5g/l；醇提组：款冬花药材加10倍量90乙醇热回流提取3次，归并提取液，接纳乙醇，浓缩至0.5g/l；总碱组总生物碱部位：醇提液接纳至无醇味，用2.5稀盐酸调pH至23，酸水用氯仿萃取接纳氯仿得残渣I，待用后，酸水层用5稀NaH调pH至1011，碱水用氯仿萃取，接纳氯仿即得；非碱组非生

8、物碱部位：上述氯仿萃取后的碱水用稀盐酸调至中性，与残渣I归并，浓缩至折合生药量为0.5g/l，即得；克氏千里光碱由本研究室从款冬花中分散得到。总碱和克氏千里光碱以0.5%-Na混悬，供小鼠灌胃用。谷丙转氨酶测定试剂盒GPT，批号20220423；谷草转氨酶测定试剂盒GT，批号20220423；血清总胆红素测定试剂盒TBIL，批号20220423；均为南京建成生物工程研究所产物。离心机，常州国华电器。1500酶标仪，TherEletr公司。1.2动物IR小鼠，雄性，体重202g，江苏南京青龙山动物生殖场提供。1.3要领取康健小鼠70只，随机分成7组，每组10只，别离为空缺比拟组、水提组、醇提组、

9、总碱组、非碱组、克氏千里光碱口服senkirkine-IG组和腹腔注射senkirkine-IP组。此中水提组、醇提组、总碱组、非碱组和senkirkine-IG组以0.2l/10g灌胃，1次/d；senkirkine-IP组以0.2l/10g腹腔注射；比拟组灌胃等量-Na溶液。一连给药7d，正常饮食饮水。在第7天给药1h后，称重，摘眼球取血，离心取血清检测GPT,GT，TBIL，并摘取肝脏称重，盘算肝脏指数肝重g/体重g。取同一部位肝脏，福尔马林结实，HE染色，不雅察病理变革6。2效果2.1对体重、肝脏指数的影响见表1。与比拟组比拟，总碱组、克氏千里光碱口服组和腹腔注射组对小鼠正常的体重增长

10、有显着按捺作用，按捺程度为senkirkine-IP组senkirkine-IG组总碱组。水提组、醇提组、非碱组均对小鼠正常的体重增长未见按捺作用。克氏千里光碱口服组和腹腔注射组肝脏指数明显增长。表1款冬花提取物对小鼠体重及肝脏指数的影响(略)2.2对血清GPT，GT，TBIL的影响见表2。水提组的各项生化指标与比拟组比拟均无差异。与比拟组比力，醇提组、senkirkine-IG和IP组使GT程度明显升高，总碱组、非碱组与比拟组的差异均具有统计学意义；总碱组、senkirkine-IG和IP组均使GPT程度明显升高，醇提组、非碱组有明显差异；总碱组使TBIL明显升高。表2款冬花提取物对小鼠血清

11、GT，GPT，TBIL的影响(略)2.3对肝脏构造形态的影响见图1。由小鼠肝脏病理切片效果可见，与空缺组a比拟力，水提组b和醇提组形态学无显着差异；非碱组d和总碱组e肝细胞呈轻度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死，肝小叶及汇管区未见炎细胞浸润；Senkirkine-IGf和senkirkine-IPg组肝细胞呈差异程度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死和碎片状坏死，肝小叶及汇管区可见少量炎细胞浸润。3讨论?中国药典?部2022年版收载款冬花的临床用量为逐日59g最高用量为15g7，本实行水提组剂量按人体重折合为约600g/d，为临床高剂量的60余倍(为最高用量的40倍)，其各项指标与空缺组比均无差异，病理

12、构造切片表现形态学正常，提示只要不超量利用，款冬花水煎液是宁静的。同剂量的醇提组与水提组比拟，除血清GPT，GT数值较空缺组有所升高外，其他各指标均与水提组无差异，未出现显着肝脏器质性病变，其药用的宁静性有待进一步的研究。总碱组和非碱组血清GPT，GT，TBIL数值均升高，肝细胞呈轻度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死，肝小叶及汇管区未见炎细胞浸润，别的总碱组还明显按捺小鼠体重增长，提示存在必然的肝脏毒性。Senkirkine-IG和IP组均明显按捺小鼠体重增长，血清GPT，GT，TBIL数值明显升高，肝脏指数明显增长。肝细胞呈差异程度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死和碎片状坏死，肝小叶及汇管区可见少量

13、炎细胞浸润，提示有显着的肝脏毒性，与文献报道的吡咯里西啶类生物碱具有肝脏毒性同等。本实行效果表白，款冬花根据其传统的用量59g/d和用法水煎入药是宁静的，没有显着的肝脏毒性。这大概是由于款冬花中的吡咯里西啶类生物碱含量很低以是总碱组折合成生药的量很大，并且该类生物碱极性又较小不易溶于水，致使水煎液中毒性物质的量远远低于致毒剂量。【参考文献】1国度药典委员会.中国药典，部S.北京：化学产业出书社，2022：233.2濮社班,徐德然,张勉，等.中药款冬中肝毒吡咯里西啶生物碱的L/Sn检测J.中国自然药物,2022,2(5)：293.3RederE.ediinalplantsinhinantainingpyrrlizidinealkalidsJ.Pharazie,2000,55(10):711.4曾美怡,李敏民,赵秀