正交试验法优化香附总黄酮提取工艺

1、正交试验法优化香附总黄酮提取工艺【摘要】目的优选香附总黄酮的提取工艺。要领以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为观察因素，以总黄酮含量为测定指标，接纳正交试验优化香附总黄酮的最正确提取工艺。结果香附总黄酮的最正确提取工艺为乙醇体积分数70%、料液比115、提取时间45in、提取次数为2次。结论该提取工艺不变，得当香附总黄酮的提龋【关键词】香附;总黄酮;正交试验;提取工艺abstrat:bjetivetptiizetheextratintehnlgyfttalflavnidsfryperusrtundus.ethdsrthgnalexperientasdesignediththentent

2、fttalflavnidsasindex,andithethanlnentratin,theratifaterialandslvent,extratingtieandfrequenyasfatrs.resultstheptialextratintehnlgyasasflls：70%ethanl,theratifaterialtslventf115,extratingfr45inand2ties.nlusintheextratintehnlgyissteadyandsuitablefrextratingttalflavnidsfryperusrtundus.keyrds:yperusrtundu

3、s;ttalflavnids;rthgnalexperient;extratintehnlgy香附为莎草科多年生草本莎草(yperusrtundusl.)的枯燥根茎，性辛、微苦、微甘、平,归肝、三焦经，具有疏肝理气、调经止痛的成果1。香附重要含有挥发油、黄酮类化合物、三萜类化合物、甾醇类、生物碱、糖类、酚类等化学身分2。现有研究已证实黄酮类化合物在治疗冠心并老年性痴呆、脑血栓、神经体系疾病等方面有明显结果，还具有抑菌、抗癌等作用，且无副作用，已开拓出很多种药品和保健食品3-5。已有的文献资料未见有关香附黄酮类物质提取工艺的研究报道，故本试验对香附总黄酮的提取工艺以及含量举行开端研究，为香附总黄

4、酮的进一步研究开拓提供资料。1仪器与试药1.1仪器agilent8453e型紫外-可见分光光度计(美国安捷伦公司);bp211d电子阐发天平(德国sartrius);kq-500超声仪(昆明市超声仪器，功率500，频率40khz);层析柱(2.514)。1.2试药香附药材购自安徽亳州药材市场，经湖北医药学院隶属人民病院药学部雷龙副传授断定为莎草科植物(yperusrtundusl.)的枯燥根茎;芦丁比较品(批号：10080-202206)购自中国药品生物成品检定所;聚酰胺(3060目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂);水为重蒸水;别的试剂均为阐发纯。2要领与结果2.1供试品溶液的制备取香附粉末

5、(过2号筛)3.0g，细密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(6090)50l，超声提取30in，弃去石油醚液，待样品中残留的石油醚全部挥去后，按实行要求参加差异体积乙醇(差异体积分数)超声提取差异时间、次数，放凉后滤过，滤液置80水浴锅上浓缩至适量。称取聚酰胺3g，以样品溶液拌样后置80水浴锅上加热至无醇味，装入层析柱中。用蒸馏水100l、20%(体积分数)乙醇50l、60%(体积分数)乙醇300l依次举行洗脱，网络60%(体积分数)乙醇洗脱液，置水浴锅上浓缩，用60%(体积分数)乙醇定容至25l，即得。2.2比较品溶液的制备细密称取已枯燥至恒重的芦丁比较品20.08g，置10l容量瓶中，加60

6、%(体积分数)乙醇溶解至刻度，摇匀，即得。2.3测定波长的选择取供试品溶液和比较品溶液各1l，置于10l容量瓶中，参加5%(质量浓度)nan2溶液0.3l，摇匀，安排6in，再参加10%(质量浓度)al(n3)3溶液0.3l，摇匀，再安排6in，参加4%(质量浓度)nah溶液4l，加60%(体积分数)乙醇定容到10l，安排15in，即得。用紫外分光光度计举行扫描，结果两者在499.9n处均有最大汲取，应选择500n作为测定波长。2.4线性干系观察2.5单因素观察以乙醇体积分数、料液比、提取时间为观察因素，观察其对总黄酮提取率的影响。结果见图1。psa6381a.乙醇体积分数;b.料液比;.提取

7、时间图13个因素对总黄酮提取率的影响figure1theeffetntheextratinyieldf3fatrs由图1可知，乙醇体积分数在80%时香附总黄酮提取率最高，当乙醇体积分数继承进步，总黄酮提取率反而落落;总黄酮提取率随着料液比的增大而升高，当料液比为115时到达最大值;提取时间为40in时总黄酮提取率最高。2.6正交试验在单因素观察的底子上，选择乙醇体积分数(a)、料液比(b)、提取时间()、提取次数(d)4个因素为观察因素，以总黄酮提取率为指标，接纳l9(34)正交试验表摆设试验，确定香附总黄酮的最正确提取工艺。结果见表1-3。由表2、3可知，各个因素对香附总黄酮提取率影响程度从

8、大到小依次为：乙醇体积分数提取次数提取时间料液比，4个因素对提取率的影响均无统计学意义。结合现实消费的必要，选择最正确提取工艺条件为a1b22d2，即乙醇体积分数70%，料液比为115，提取时间为45in，提取2次。表1因素程度表表2正交试验结果与直不雅阐发表3正交试验方差阐发表2.7验证试验别离取3份同一产地香附粉末，细密称定，按上述确定的最正确工艺举行提取，测定总黄酮提取率。结果表白，3份香附总黄酮均匀提取率为0.35215%，rsd=2.11%，表白该提取工艺公正、不变。3讨论3.1在试验中实行把样品用石油醚脱脂后直接将醇提液举行显色后再扫描，结果提取液在500n处并无最大汲取，大概是其

9、他身分对黄酮测定滋扰较大所致。而用聚酰胺富集纯化香附总黄酮类物质后其乙醇洗脱液经扫描，最大汲取波长为500n，与芦丁显色后的最大汲取波长同等。3.2在观察聚酰胺柱洗脱溶剂时，接纳了水、体积分数别离为20%、40%、60%、70%、80%的乙醇液举行洗脱，测定各洗脱液中总黄酮含量。结果表白用60%(体积分数)乙醇洗脱时总黄酮含量最高，体积分数为70%和80%乙醇的洗脱液中险些检测不到总黄酮，应选择的洗脱步伐为：先用100l水洗去无机盐离子，再用20%(体积分数)乙醇50l洗去酚类身分，末了用60%(体积分数)乙醇300l举行洗脱，网络60%(体积分数)乙醇洗脱液。3.3正交试验结果提示，本次试验

10、所观察各因素对提取率的影响均无统计学意义，推测与各因素选择范畴过窄有关。能否进一步低落乙醇体积分数或(和)延伸提取时间，以使香附总黄酮被最大限度地提取出来，尚需继承开展实行研究，从而包管终极确定的提取工艺的有用性和科学性。【参考文献】1刘成彬,张少聪,李彼苍.香附的当代药理研究希望j.灼烁中医,2022,24(4):787.2黄险峰,彭国平.香附化学身分及药理研究希望j.中药材,2022,26(1):65.3谢明杰,宋明,邹翠霞,等.超声波提取大豆异黄酮j.大豆科学,2022,23(1):27.4ngarjanavanavaniehn,anakits,prnpakakuls,etal.inhibitryeffetfseletedthaiediinalplantsnna+,k+-atpasej.fitterap