培养基以及其配制

1、关于培养基及其配制第一张，PPT共五十一页，创作于2022年6月培养基形态不同：固体培养基、液体培养基培养过程不同：初代培养基、继代培养基其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 营养水平不同：基本培养基、完全培养基一、培养基的种类第二张，PPT共五十一页，创作于2022年6月二、培养基的组成 植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢；c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳 定、电荷平衡等点化学方面的作用；d、发育方面，特定的元素影响植物的形态

2、发生和组织、 器官建成。第三张，PPT共五十一页，创作于2022年6月其它添加物固化剂植物生长调节剂有机营养成分无机营养成分培养基组成无机营养成分+有机营养成分=基本培养基第四张，PPT共五十一页，创作于2022年6月Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史。B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充该元素来预防和恢复。C、该元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。第五张，PPT共五十一页，创作于2022年6月国内外公认的高等植物所必需的营养

3、元素有16（17）种： C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni） 在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。第六张，PPT共五十一页，创作于2022年6月根据植物体内含量多少，可把这些元素分为大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上； C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 9种微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下 有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl 7种按照国际植物生理协会的建议： 所需浓度 0.5mmol/L的元素为大量元素 所需浓度 0.5mmol/L的元素为微量元素第七张，PPT

4、共五十一页，创作于2022年6月1、大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。 P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。 K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。第八张，PPT共五十一页，创作于2022年6月Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。第九张，PPT共五十一页，创作于2022年6月2、微量元素 在微量元素中，

5、铁的使用最大 ： 一些氧化酶的组成成分 叶绿素形成的必要条件 使用乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）鳌合物防止铁的沉淀第十张，PPT共五十一页，创作于2022年6月 硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系 铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长 锰参与植物的光合、呼吸代谢 钼参与氮素的代谢 氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。第十一张，PPT共五十一页，创作于2022年6月缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。 桃树第十二张，PPT共五十一页，创作于20

6、22年6月缺铜症状： 新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。 枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。 菊花第十三张，PPT共五十一页，创作于2022年6月缺锰典型症状： 叶脉间失绿褪色，但叶脉仍保持绿色，脉间出现坏死斑，缺素症状由幼叶开始。 菜豆第十四张，PPT共五十一页，创作于2022年6月缺钼典型症状：叶较小，叶脉间失绿,有坏死斑点，且叶边缘焦枯，向内卷曲。十字花科植物缺钼时叶片卷曲畸形，老叶变厚且枯焦。 白菜第十五张，PPT共五十一页，创作于2022年6月缺硼典型症状： 受精不良,籽粒减少 ，“花而不实”， “蕾而不花”； 根尖、茎尖的生长

7、点停止生长，而形成簇生状； 常引起各种腐烂病。 马铃薯第十六张，PPT共五十一页，创作于2022年6月3、碳源 碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。 糖类物质特点： 具有热易变的性质 利于吸收和利用 使用浓度一般在2%5% 提供能源和调节渗透压第十七张，PPT共五十一页，创作于2022年6月4、维生素类 以各种辅酶的形式存在 参与多种代谢活动 对生长，分化等有很好的促进作用 主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素 常用维生素有VB1和VB6 第十八张，PPT共五十一页，创作于2022年6月5、肌醇 环己六醇 细胞壁的构建材料 参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动 促进

8、活性物质发挥作用第十九张，PPT共五十一页，创作于2022年6月6、氨基酸 蛋白质的组成成分 有机氮源 可直接被细胞吸收利用 培养基中常用的是甘氨酸7、天然复合物 促进某些愈伤组织和器官的生长 化学成分不明、复杂 天然营养混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物第二十张，PPT共五十一页，创作于2022年6月8、琼脂 是使用最普遍的凝固剂用量一般在610g/L之间颜色以浅、透明度高好，洁净为上品 除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。第二十一张，PPT共五十一页，创作于2022年6月9、活性炭 吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 抑制外植体褐变 防止玻璃苗的产生 促进培养物生

9、长和分化 促进生根缺点： 没有选择性10、抗生素 防止外植体内生菌造成的污染活性炭第二十二张，PPT共五十一页，创作于2022年6月11、生长素类 促进细胞伸长和分裂 促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 诱导愈伤组织形成 溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 常用的生长素： IAA(吲哆乙酸) NAA (奈乙酸 ) 2,4-D(二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸)第二十三张，PPT共五十一页，创作于2022年6月生长素作用强弱顺序：IAANAAIBA2,4-D强弱2，4-D常用于诱导愈伤组织，IBA和NAA常用于生根第二十四张，PPT共五十

10、一页，创作于2022年6月12、细胞分裂素类 促进细胞分裂和分化 诱导胚状体和不定芽的形成 延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成 用于离体成花的调控 溶于0.51.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中 常用的细胞分裂素： KT (激动素) BA(6-卞基腺嘌呤) ZT(异戊烯氨基嘌呤)玉米素第二十五张，PPT共五十一页，创作于2022年6月13、赤霉素类和脱落酸 A、赤霉素类 组织培养中不常使用 加速细胞的伸长生长 促进细胞的分裂 主要是GA3 B、脱落酸 抑制细胞分裂和伸长 促进脱落和衰老 促进休眠和提高抗逆能力第二十六张，PPT共五十一页，创作于2022年6月14、水作用：是植物原生质体的组成

11、成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。 注意：用蒸馏水，最好是双蒸水；以保持培养基成分的精确性。大规模生产时可用自来水。第二十七张，PPT共五十一页，创作于2022年6月1、MS培养基 无机盐浓度高 高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 含有一定数量的铵盐 营养丰富 不需要添加更多的有机附加物（一）、几种常见培养基的特点第二十八张，PPT共五十一页，创作于2022年6月（二）、White培养基 1943年由White为培养番茄根尖而设计 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 无机盐浓度较低 使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果第二十九张，PPT共五十一页，创作于2022年6月（三

12、）、B5培养基 1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计 含有较低的铵盐 较高的硝酸盐和盐酸硫胺素第三十张，PPT共五十一页，创作于2022年6月（四）、N6培养基 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药培养。第三十一张，PPT共五十一页，创作于2022年6月AgNO3:作用：抑制乙烯活性，防止玻璃化苗的出现浓度：1-10mg/L抗生素：种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等。作用：可防止外植体内生菌污染。浓度：520mg/L。第三十二张，PPT共五十一页，创作于2022年6

13、月1、 母液(stock solution)的配制和保存所谓母液是欲配制液的浓缩液。意义: 保证各物质成分的准确性 配制时的快速移取 便于低温保藏。三、 培养基的配制第三十三张，PPT共五十一页，创作于2022年6月单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml 。混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等 母液的配制方法：第三十四张，PPT共五十一页，创作于2022年6月 培养基母液的配制 第三十五张，PPT共五十一页，创作于2022年6月MS母液配制：MSI 大量元素

14、 20X MSII 微量元素 200X MSIII铁 盐 200X MSIV有机 物 200X MSV肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml第三十六张，PPT共五十一页，创作于2022年6月将1、2、4、5称好放入烧杯分别溶解混合，将3最后混合，再定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用500mL甲1、2、4、5500mL乙3 定容贴标签1L MS I X20 2013.9.26 HXH注： Ca2+和S042-混合后易沉淀。第三十七张，PPT共五十一页，创作于2022年6月将17称好放入烧杯分别溶解混合，定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用1000mL17 定容贴标签1L MS II X200

15、2013.9.26 HXH第三十八张，PPT共五十一页，创作于2022年6月MS (铁盐)配方用量mg/L200X（mg）称量(g)1.FeSO47H2O27.855605.562.Na2EDTA2H2O37.374607.46将1称好放入烧杯甲溶解，将2放入烧杯乙溶解，再混合定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用1L500mL甲1500mL乙2混合定容贴标签 MS I X200 2013.9.26 HXH第三十九张，PPT共五十一页，创作于2022年6月将1、2、3、4称好放入烧杯分别溶解混合，定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用1000mL14 定容贴标签1L MS IV X200 2013.9

16、.26 HXH第四十张，PPT共五十一页，创作于2022年6月将肌醇称好放入烧杯溶解定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用1000mL1溶解定容贴标签1L MS V X200 2013.9.26 HXH第四十一张，PPT共五十一页，创作于2022年6月母液配制时应注意事项：母液配好后放人冰箱内低温保存（4），用时再按比例稀释。其中III、IV、以及激素类物质应以棕色瓶盛装。母液使用前摇动瓶子，如有沉淀、絮状物、微生物污染应停止使用取样时移液管要对应取样，防止交叉污染第四十二张，PPT共五十一页，创作于2022年6月第四十三张，PPT共五十一页，创作于2022年6月2、培养基的配制：MSBA2NAA

17、0.2糖3.0琼脂0.7 pH=5.8 MS：MS I 50 mlMS II 5 mlMS III 5 mlMS IV 5 mlMS V 5 ml BA：20ml; NAA：2ml 糖：30g; 琼脂：7gV贮备液用量V配制/浓缩倍数V激素贮备液 C激素*V配制/0.1mg/ml第四十四张，PPT共五十一页，创作于2022年6月培养基的选择培养基基本培养基 植物激素 培养基的选择在实质上讲就是设计营养物质与激素（种类、用量）的最佳组合。第四十五张，PPT共五十一页，创作于2022年6月筛选培养基常用的试验方法： 单因子试验 多因子试验 逐步添加和逐步排除试验第四十六张，PPT共五十一页，创作于2022年6月1、 单因子试验只变动一个因子，通过试验找出该因子的影响及影响程度。如： MS+BA2+NAA （0.1、0.5、1.0mg/L） MS+BA+NAA0.1 （1.0、2.0 、3.0 mg/L）不能反映各种单因子成分之间的组合效果与相互影响 第四十七张，PPT共五十一页，创作于2022年6月2、 多因子试验对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验。 第四十八张