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文档简介

1、免疫学实验第二次实验33 学号：10205501071对流免疫电泳 实验内容2【原理】对流免疫电泳（CIEP）： 基于抗体抗原的等电点彼此不通，在通电的琼脂凝胶中抗体向负极泳动，抗原向正极泳动。一般抗体（IgG）的等电点位pH59,血清蛋白抗原的等电点位pH45,所以在pH8.28.6的缓冲溶液中，抗体所带的负电荷较少，正电荷较多,同时还受电渗作用，向负极泳动；抗原带正电荷少负电荷多，分子也较小，电泳迁移快。在抗体和抗原的对向泳动时，两者相遇于最适比例处形成白色沉淀线，可肉眼观察得到结果，此结果为阳性结果。电渗作用（电渗是电场中溶液对于固体的相对移动，琼脂是酸性物质，在碱性缓冲液中带负电，而与

2、它接触的溶液带正电，因此液体向阴极移动，产生电渗） 3【材料】正常人血清兔抗人血清，等电点：8.00.05UpH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液、生理盐水1%离子琼脂板用0.05U巴比妥钠盐酸缓冲液配成打孔器、图样板、毛细吸管电泳仪，电泳槽4【步骤】制离子琼脂板先用生理盐水50ml加1.2g琼脂隔水煮沸融化，再加50mlpH8.60.05mol/L巴比妥缓冲液继续隔水煮沸至澄清，取融化的琼脂3.54ml，浇于载玻片上，待其冷却 加样对应孔号加试剂放入电泳槽开启电泳仪调整电压为30V电流强度为68mA通电1h电泳完毕取出琼脂板观察实验结果打孔（孔径3mm,孔距3mm）51311112221号内加入抗人血清；2号加入人血清；3号加入生理盐水作对照抗原抗体6【注意事项】1、 浇板时，琼脂面要铺平。 2、加样时不要起气泡，勿溢出琼脂孔。3、抗原、抗体的量应相接近，如抗原量过多，可造成 假阴性结果，须通过稀释抗原加以解决。4、电泳

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