上海市自然科学基金标书2

1、学科代码0303上海市自然科学基金项目课题申请书（2003版）课题编号课题名称谷氨酸转运体差异表达与脑缺血后癫痫关系的实验研究起止年月2003年11月-2006年11月依托单位上海第二医科大学附属仁济医院（盖章）通讯地址上海市山东中路145号联系电话邮政编码200001课题责任人邱永明手机Email HYPERLINK mailto:qiuzhoub qiuzhoub帐户名上海第二医科大学附属仁济医院帐号1001235909008905658 开户银行022539-黄埔支行南分2003年9月1日订填写说明一、填写申请书前，申请者应阅读当年的上海市自然科学基金项目申报通知。二、课题申请者应根据要

2、求逐条认真编写，表达要明确、严谨。外来语同时用原文和中文表达。三、本课题申请书编写请使用A4纸双面印刷，请不要采用胶圈、文件夹等带有突出棱边的装订方式，请采用普通纸质材料作为封面。请用计算机打印填报，各栏空格不够时，请自行加页。四、本课题申请书填写后，按隶属关系审批上报市科委一式六份。五、本申请书经正式审定后，即作为合同的附件，附于合同的正副文本之中。六、请在申请书封面上“学科代码”处填写学科代码。例如：“金属材料学科”则填写“E0100”。七、本提纲制订单位是上海市科学技术委员会。填写简表注意事项1课题名称：要确切反映申请资助的研究工作内容（限20字）。凡有多个的选择性栏目，请将所选项前的打

3、，且只能选择一项。学科代码：填写本研究课题所属学科。学科代码表A数理科学0100数学，0200力学，0300天文学，0400物理学1（凝聚态物性；原子和分子物理；声、光学和其他），0500物理学11（基础物理；核物理；粒子物理；等离子物理和其他）B化学科学0100无机化学，0200有机化学，0300物理化学，0400高分子化学，0500分析化学，0600化学工程及工业化学，0700环境化学C生命科学0100基础生物学，0200农业科学，0300医学与药学（0301预防医学与卫生学，0302基础医学，0303临床医学基础研究，0304药物学，0305中医药学，0306其他）D地球科学0100地理

4、学、土壤学和遥感，0020地质学，0300地球化学，0400地球物理学和空间物理学，0500大气科学，0600海洋科学E工程与材料科学0100金属材料学科，0200无机非金属材料学科，0300有机高分子材料学科，0400冶金与矿业学科，0500机械工程学科，0600工程热物理与能源利用学科，0700电工学科，0800建筑环境与结构工程学科，0900水利学科F信息科学0100电子学与信息系统，0200计算机科学，0300自动化科学，0400半导体科学，0500光学和光电子学G管理科学0100管理科学与工程，0200工商管理，0300宏观管理与政策一、简表课题名称大鼠脑缺血后癫痫发生机制的实验研究

5、研研究类别其它究起止年月2003年11月至2006年10月课申请金额5.0万元其它经费来源无题经费预算科研业务费实验材料费仪器设备费组织实施费其它费用（万元）2.00.2课题姓名邱永明性别男出生年月1965年10月负责职称教授学位博士专业神经外科人所在名称上海第二医科大学附属仁济医院详细地址上海市山东中路145号单位性质其它主管单位上海市卫生局主要本课题采用先进的全脑缺血后声源性癫痫模型及已有的大鼠大脑中动脉工女栓塞后癫痫模型，研究脑缺血后癫痫的发病机制，特别是谷氨酸-谷氨酸转研究运体系统在痫性发作中的作用及时空变化规律。同时，应用反义技术降低谷内容氨酸转运体的表达，应用GDNF诱导升高谷氨酸

6、转运体的表达，进一步探讨及意癫痫治疗的新途径，为临床最终攻克癫痫提供科学的理论依据和安全有效地义治疗方法，必将具有广阔的应用前景。该课题关于癫痫机制的在体研究研究（摘国内外尚属空白。要）预期研究成果（摘要）（限80字）二、立论依据本课题的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处癫痫与脑缺血关系密切，成为脑缺血的主要早期及晩期并发症之一（图一）。最常见于心脏骤停（cardiearrest）及中风患者。而颅脑外伤及蛛网膜下腔出血所致的癫痫，脑缺血亦为其主要原因。临床调查显示，脑缺血后痫性发作以早期发作多见，中风后24小时内发生率最高（43%）（1）。实验研究发现，大于50%的脑缺血患者

7、有明显的痫性发作，而“无抽搐”（NCS）痫性发作较实际估计更高。并且缺血后痫性发作参与脑缺血的病理过程，并可伴随缺血的全过程（PLEDs及IRDA），加重了缺血性损伤。形成脑缺血-痫性发作-脑缺血加重-痫性发作加重-残障（癫痫）的恶性循环。更有研究发现，脑缺血后最初一周的痫性发作与神经功能恢复及晩发癫痫的发生率密切相关。实验研究发现，脑缺血后癫痫的发作在半小时左右（4,5），且至缺血后2周的痫性发作仍为早发癫痫（earlyonset）。而超过两周的痫性发作称为晩发癫痫（lateonset）。以谷氨酸为主的兴奋性氨基酸在缺血后癫痫的发生中起着关键的作用，是缺血后痫性发作的“闸门”。大量研究显示，

8、脑缺血再灌流后，大量的兴奋性氨基酸聚集在胞外间隙，作用与突触后膜的离子型，代谢型及海仁酸受体，引起内向的钠钙离子流。膜电位去极化，痫性发作的阈值降低，诱发了痫性发作。同时，激发一系列下游事件，造成神经元的坏死或者凋亡。如何减轻兴奋性氨基酸的毒性作用，从而关闭缺血性损害的闸门，对于降低缺血后痫性发作，减轻缺血损害，具有极为重要的意义。Takagi等研究证明脑缺血后兴奋性氨基酸立即迅速升高并于1小时内降至基线水平，与缺血性的神经元损伤密切相关。这种兴奋性氨基酸的峰状释放（spikerelease）与痫性活动的后发放（afterdischarge）极不一致。Seki等在体研究表明，谷氨酸转运体不仅清

9、除胞外兴奋性氨基酸，而且还可以逆向转运将胞内的谷氨酸释放，导致胞外的谷氨酸升高，造成神经元的损伤（10）。Phillis等还发现应用竞争性的转运体阻滞剂可使前脑缺血时谷氨酸释放降低至少50%（11）。谷氨酸转运体的逆向转运及不同的时空变化导致的胞外兴奋性氨基酸的升高在脑缺血后的继发病理改变中（如痫性发作，神经元的凋亡及坏死）的作用研究甚少。BondeC等在离体海马脑片中研究发现谷氨酸转运体的逆向转运的确加重了氧-葡萄糖剥夺（0GD）诱导的神经元损伤（12）。在哺乳动物中枢神经系统中，兴奋性神经递质L-谷氨酸的浓度必须保持在低水平以保证突触活动时的较高的信噪比，并防止由于谷氨酸受体的过度激活而造

10、成神经元的损伤。此控制过程由高亲和力的钠离子依赖的分布于神经元或者周围神经胶质细胞膜表面的谷氨酸转运体来完成，即内源性的谷氨酸重吸收机制主要由谷氨酸转运体来承担，谷氨酸转运体重吸收及逆向转运是唯一有效的调节突触间隙兴奋性氨基酸浓度的机制（13）。谷氨酸转运体功能的变化直接影响着脑缺血性损害的后果及痫性发作的发生。目前，已克隆动物（人类）的谷氨酸转运体有五种，分别为：（图二）GLAST（EAAT1）,GLT1（EAAT2）,EAAC1（EAAT3,refs8,9）,EAAT4（refs9-11）,EAAT5（refs1-5）。免疫细胞化学研究发现前两种主要分布在胶质细胞上，而后三种则主要定位于神

11、经元细胞。EAAT4和EAAT1的研究发现，这两种谷氨酸转运体分布在突触外接近释放位点的突触周细胞膜上，这种分布有利于快速结合谷氨酸。并对突触后反应的幅度进行调节。EAAT4主要分布在小脑。EAAC1主要分布在大锥体细胞及浦肯野氏细胞，而并未分布在谷氨酸能神经元细胞膜上。EAAC1主要分布在皮质海马及尾-壳核，并且作为突触前后的成分而存在。GLT-1则分布在全脑（主要分布在前脑）的星型细胞膜上。GLAST主要分布在贝格曼神经胶质及小脑的分子层，同时也见于皮质及海马和深部小脑核（14。谷氨酸转运体的功能状态是决定缺血后神经元损伤程度及痫性发作等并发症的最重要因素。由此我们推测，缺血后由于谷氨酸转

12、运体的（GLT-1及EAAC1）的功能改变（neuroprotectivetoneurodegenertive）及逆向转运（reversaltransport）,从而导致谷氨酸在胞外间隙的再次大量聚集，是诱发脑缺血后痫性发作的主要作用机制。研究兴奋性氨基酸及其转运体在脑缺血及痫性发作时的变化规律，探讨其在癫痫发生发展中的作用，必将为癫痫的机制研究及治疗开辟崭新的途径。谷氨酸转运体是近年研究的热点，而对于在缺血导致痫性发作中的具体机制研究甚少。我们欲从兴奋性氨基酸及其转运体的变化及其相互调控的角度研究缺血后痫性发作的具体机制。本课题采用先进的全脑缺血后声源性癫痫模型及已有的大鼠大脑中动脉栓塞后模

13、型，通过转基因技术及反义技术，研究脑缺血后癫痫的发病机制，特别是谷氨酸-谷氨酸转运体系统在痫性发作中的作用。为临床最终攻克癫痫提供科学的理论依据和安全有效地治疗方法，必将具有广阔的应用前景。此项研究国内外尚属首次。生长因子，抗氧化因促生存机制如：热休克蛋白（HSP）,抗炎症细胞因子，生长因子，抗氧化I子/损害机制：兴奋性毒性，自由基，炎症反应，凋亡图一：脑缺血与癫痫损害与抗损害机制示意图GluttindsGliacellElutite扎iPresynapMwrAlilutwtiineOO嘴QLMT(EMH_JaLT-1W2)EM1EMT4FiA抽血iirQ,QSK4tlCfimHHgvrhUb

14、otregieGluRnflurotruaniBBiorPostsynapse注：Glutamine:谷氨酰胺Gliacell:胶质细胞Glutamate:谷氨酸MatabotropicGluR:代谢型谷氨酸受体VGLuT：囊泡谷氨酸转运体(突触前)Ionotropic:离子型谷氨酸受体Presynapse:突触前EAAT15：谷氨酸转运体15图二：兴奋性氨基酸及其转运体系统(15参考文献：1、SilvermanIE,RestrepoL,MathewsGC.Poststrokeseizures.ArchNeurol.2002Feb;59(2):195-201.2、AnthonyJ.Willia

15、ms,FrankC.Tortella.NeuroprotectiveeffectsofthesodiumchannelblockerRS100642andattenuationofischemia-inducedbrainseizuresintherat.BrainResearch932(2002)45-5.3、LamyC,DomigoV,SemahF,ArquizanC,TrystramD,CosteJ,MasJL;PatentForamenOvaleandAtrialSeptalAneurysmStudyGroup.Earlyandlateseizuresaftercryptogenici

16、schemicstrokeinyoungadults.Neurology.2003Feb11;60(3):400-4.4、LuXC,WilliamsAJ,TortellaFC.Quantitativeelectroencephalographyspectralanalysisandtopographicmappinginaratmodelofmiddlecerebralarteryocclusion.NeuropatholApplNeurobiol.2001Dec;27(6):481-95.5、R.G.Geocadina,R.Ghodadrab,T.Kimurac,H.Leib,D.L.She

17、rmanb,D.F.Hanleya,N.V.ThakorAnovelquantitativeEEGinjurymeasureofglobalcerebralischemia.ClinicalNeurophysiology111(2000)17791787.6、AfsarN,KayaD,AktanS,Sykut-BingolC.Strokeandstatusepilepticus:stroketype,typeofstatusepilepticus,andprognosis.Seizure.2003Jan;12(1):23-7.7、RaoVLR,RaoAM,DoganA,BowenKK,Hatc

18、herJ,RothsteinJD,DempseyRJ(2000)GlialglutamatetransporterGLT-1down-regulationprecedesdelayedneuronaldeathingerbilhippocampusfollowingtransientglobalcerebralischemia.NeurochemInt36:531-5378、WhiteBC,SullivanJM,DeGraciaDJ,ONeilBJ,NeumarRW,GrossmanLI,RafolsJA,KrauseGS.Brainischemiaandreperfusion:molecul

19、armechanismsofneuronalinjury.JNeurolSci.2000Oct1;179(Sl-2):l-33.9、LiptonP(1999)Ischemiccelldeathinbrainneurons.PhysiolRev79:1431-1568.10、SekiY,FeustelPJ,KellerRW,TranmerBI,KimelbergHK(1999)Inhibitionofischemia-inducedglutamatereleaseinratstriatumbydihydrokinateandananionchannelblocker.Stroke30:433-4

20、4011、PhillisJW,RenJ,OReganMH(2000)Transporterreversalasamechanismofglutamatereleasefromtheischemicratcerebralcortex:studieswithDL-threo-卩-benzyloxyaspartate.BrainRes868:105112.12、BondeC,SarupA,SchousboeA,GegelashviliG,NorabergJ,ZimmerJ.GDNFpre-treatmentaggravatesneuronalcelllossinoxygen-glucosedepri

21、vedhippocampalslicecultures:apossibleeffectofglutamatetransporterup-regulation.NeurochemInt.2003Sep-Oct;43(4-5):381-8.13、DanboltNC.Glutamateuptake.ProgNeurobiol.2001Sep;65(1):1-105.14、JacksonM,SongW,LiuMY,JinL,Dykes-HobergM,LinCI,BowersWJ,FederoffHJ,SternweisPC,RothsteinJD.Modulationoftheneuronalglu

22、tamatetransporterEAAT4bytwointeractingproteins.Nature.2001Mar1;410(6824):89-93.15、ShigeriY,ShimamotoK.Pharmacologyofexcitatoryaminoacidtransporters(EAATsandVGLUTs).NipponYakurigakuZasshi.2003Sep;122(3):253-三、研究方案1课题研究的总目标和创新点，主要研究内容及所需要解决的技术难点（专利技术二次开发课题要描述通过创新形成新的专利技术）。目标及创新：（1）通过研究脑缺血后兴奋性氨基酸转运体与癫痫

23、发生的关系，探讨缺血后癫痫的发病机理，是本课题的一个新思路。（2）在此基础之上，应用反义技术降低转运体的表达，应用GDNF诱导升高谷氨酸转运体的表达（upregulation）（BondeC，etal,2003），结合在体微透析技术（invivomicrodialysis,）进一步阐明癫痫发作的机制，同时，提供了有效的治疗手段。对缺血后癫痫的转运体在体反义阻断及GDNF诱导升高谷氨酸转运体的过表达研究，本实验尚属首创。（3）首次在癫痫模型中完整比较了两种转运体在转运胞外兴奋性氨基酸的作用及在痫性发作中的不同表达，进一步为痫性发作的机制及治疗提供丰富的理论依据。（4）首次完整选用了致癫痫的缺血模

24、型（包括全脑缺血及局灶性缺血），为全面认识及揭示脑缺血与癫痫的内在联系建立了了良好的操作平台。研究内容及技术难点：内容：（1）脑缺血致癫痫动物模型的制作。（2）痫性放电的记录，胞外谷氨酸浓度的检测，谷氨酸转运体表达及分布的特点。相应突触后神经元胞内钠离子及钙离子浓度变化特点。反义阻断及转运体过表达前行为学评分及神经功能评分。梗塞面积的计算。（3）反义寡核苷酸（ODNs）的设计及GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内立体定向注射。（4）反义阻断及转运体过表达后对谷氨酸浓度，谷氨酸转运体表达分布的影响，痫性放电变化及癫痫发生率，梗塞面积，行为学变化，神经功能评分的影响。（5）两种转运体在缺血后癫痫

25、发生中的作用的比较。关键问题：1、全脑缺血后声源性癫痫动物模型的制作及短暂性大脑中动脉栓塞（MCAo）后的长时程脑电检测。2、反义寡核苷酸（ODNs）的设计。3、在体立体定向微型真空泵侧脑室注射反义寡核苷酸及GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内立体定向注射。应用全脑缺血及局灶性脑缺血后痫性发作的动物模型相结合，通过反义技术研究癫痫发病机制及治疗手段，本课题尚属首创。动物模型的稳定及分子生物学技术的稳定至关重要。2拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析方法：（1）建立脑缺血后癫痫的动物模型：包括胸部挤压伤后的声源性癫痫模型（全脑缺血后癫痫模型）及大脑中动脉栓塞（MCAO）致痫性活动的

26、动物模型。（2）反义寡核苷酸立体定向侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化的实验研究根据已报道的大鼠的GLT-1及EAAC1的基因序列（Rothsteinetal.,1996）设计合成反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotides（ODNs）。正义及随机ODN作为对照。正义ODNs序列，反义序列及随机序列分别为5-ATCAACCGAGGGTGCCAACAATAT-3（GLT-1sense）,5-ATATTGTTGGCACCCTCGGTTGAT-3（GLT-1antisense）,5-AATTGTGTTAGCCCCCTCTGTTGA-3（GLT-1rando

27、m）,5-GCTCGGGATGCGACTGGC-3（EAAC1sense）,5-GCCAGTCGCATCCCGAGC-3（EAAC1antisense）,and5-GCGGATCCGTACGCCCAG-3（EAAC1random）.冻干的（ODN）溶解在人造脑脊液中。应用立体定位仪，准确定位大鼠侧脑室并预植微导管（参照PaxinosandWatson（1998）大鼠脑解剖图谱），渗透性微量真空泵埋置于大鼠颈部皮下以注射反义寡核苷酸。以1l/hr的速率恒速泵入侧脑室，平均每天注射60ug。5天注射后，大鼠分为全脑缺血组和局灶性脑缺血组及对照组。在体微透析技术及高效液相色谱检测海马及前脑各区的谷氨

28、酸浓度，收集透析液后，分离荧光检测。应用埋置皮层（10导联）电极，长时程动态监测受试动物的脑电活动。并将其分为缺血前及缺血后1小时，2小时，6小时，24小时，48小时，72小时，直至2周。观察癫痫发生率，行为学的变化，神经功能评分的变化。分析脑电功率谱的变化。TTC染色检测梗塞面积（计算）。应用westernblot及免疫细胞化学的方法检测上述模型中海马及前脑谷氨酸转运体GLT-1及EAAC1的表达及分布的影响。并研究此时，相应突触后神经元钠通道电流幅度，开放概率及游离钙离子（共聚焦显微镜，Fura-2荧光显色）浓度变化特点。光镜及电镜观察注射前后的形态学变化。应用TUNAL法检测神经元的凋亡

29、情况（3）GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射增加转运体的表达（upregulation）致缺血后痫性发作的变化的实验研究GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射，一周后，大鼠分为全脑缺血组及局灶性脑缺血组和对照组。在体微透析技术及高效液相色谱检测海马及前脑各区的谷氨酸浓度，收集透析液后，分离荧光检测。应用埋置皮层（10导联）电极，长时程动态监测受试动物的脑电活动。并将其分为缺血前及缺血后1小时，2小时，6小时，24小时，48小时，72小时，直至2周。观察癫痫发生率，行为学的变化，神经功能评分的变化。分析脑电功率谱的变化。TTC染色检测梗塞面积（计算）。应用we

30、sternblot及免疫细胞化学的方法检测上述模型中海马及前脑酸转运体GLT-1及EAAC1的表达及分布的影响。并研究此时，相应突触后神经元钠通道电流幅度，开放概率及游离钙离子（共聚焦显微镜，Fura-2荧光显色）浓度变化特点。光镜及电镜观察注射前后的形态学变化。应用TUNAL法检测神经元的凋亡情况（4）对比两种谷氨酸转运体在转运及逆向转运胞外间隙兴奋性氨基酸的作用及与缺血后痫性发作的关系。（5）统计学处理采用多组方差分析。方案：Long-Evans大鼠，随机分为2组：全脑缺血诱发声源性癫痫组及局灶性脑缺血诱发痫性发作组。每组又分为：反义寡核苷酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化

31、组，GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射增加转运体的表达（upregulation）致缺血后痫性发作的变化组及对照组。在体微透析技术及高效液相色谱检测海马及前脑各区的谷氨酸浓度，收集透析液后，分离荧光检测。应用埋置皮层（10导联）电极，长时程动态监测受试动物的脑电活动。并将其分为缺血前及缺血后1小时，2小时，6小时，24小时，48小时，72小时，直至2周。观察癫痫发生率，行为学的变化，神经功能评分的变化。脑电功率谱的分析。TTC染色检测梗塞面积（计算）。应用westernblot及免疫细胞化学的方法检测上述模型中海马及前脑酸转运体GLT-1及EAAC1的表达及分布的影响。并研

32、究此时，相应突触后神经元钠通道电流幅度，开放概率及游离钙离子（共聚焦显微镜，Fura-2荧光显色）浓度变化特点。光镜及电镜观察注射前后的形态学变化。应用TUNAL法检测神经元的凋亡情况。两种谷氨酸转运体GLT-1及EAAC1在缺血后痫性发作中的作用比较结果进行统计学分析。技术路线:反义寡核苷酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化形态学检测电镜光镜分子生物学检测转运TTC染色体表达westernblot免疫组化检测转运体的生化检测：谷氨酸浓脑电功率谱分析及表达及分布度共聚焦显微镜检测局部血流量的检测钠钙离子浓度Long-Evans大鼠立体定向预植注射导管及真空微量泵的皮下埋置全脑缺血

33、致癫痫模型及局灶性脑缺血致痫性发作模型的制作GDNF(胶质源性神经生长因子)的脑内多点立体定向注射增加转运体的表达(upregulation)可行性分析:3.课题的年度计划及年度目标2003.11-2004.3购买试验材料等实验准备工作。2004.4-2004.12建立脑缺血后癫痫的动物模型：包括胸部挤压伤后的声源性癫痫模型（全脑缺血后癫痫模型）及大脑中动脉栓塞（MCAO）致痫性活动的动物模型。反义寡核苷酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化的实验研究。-2005.12GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射增加转运体的表达（upregulation）致缺血后痫性发作

34、的变化的实验研究。-2006.6两种谷氨酸转运体GLT-1及EAAC1在缺血后痫性发作中的作用比较的实验研究。2006.7-2006.10实验成果全面总结，成果鉴定上报。预期研究成果、成果表达形式（能否申请并获得专利）及其考核指标1）完成动物模型的制作60只（Long-Evans大鼠）。2）明确反义寡核苷酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化。3）明确GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注增加转运体的表达致缺血后痫性发作的变化。4）两种谷氨酸转运体GLT-1及EAAC1在缺血后痫性发作中的作用比较。5）成研究论文4篇，其中，SCI收录1篇。四、研究条件与本课题相关的现

35、有工作积累和工作基础与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩1）本课题是在国家自然科学基金课题损伤性窒息导致多脏器损害的机制研究和卫生部课题损伤性窒息导致脑损害的中西医治疗实验研究的基础上申报的。前一课题己完成，通过了专家小组的鉴定，获得”国内领先，有独创性”的评价。后一课题正在总结结果中。全脑缺血的系列研究，使得我们对它有比较系统、深入的理解。2）作者一直追踪全脑缺血发生机制及治疗作用的最新研究进展。已掌握离体海马脑片制作技术获得了高质量的细胞外、内电记录以及脑缺血研究中多种分子生物学技术。作者于19961997年在美国进修期间，参加了哈佛医学院MassechuseteGeneral

36、Hospital神经生理学实验室进行的脑神经元保护的体内实验研究，该课题用Mg2+等化学物组成的“cocktail”作为治疗脑缺血的介质，发现其有重要的神经元保护作用。回国后申请并获批准了1998年卫生部课题迷走神经刺激治疗大鼠全脑缺血性癫痫的实验研究已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径工作条件已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划和落实情况）我校有较强的生化和分子生物实验室。本课题前期研究所需仪器设备和试剂药品较为常用，后期机制研究所需的试剂、免疫组化试剂盒均可购买，实验所需的方法已经掌握并有专职人员协助。已有的主要条件、仪

37、器设备我科为全国神经外科学“博士点”之一，具有专门的神经外科研究室，已有的主要条件和仪器设备：无菌操作室，超净工作台低温超速离心机，C02孵育箱、Olympus显微摄像装置，温控超速离心机（Heraeus），超低温冰箱（Sanyo）、流式细胞仪，电泳仪（M0DEL250）、PCR扩增仪。1神经外科解剖实验室2多功能立体定向仪3透射电镜电泳装置5流式细胞仪6超速离心机7图像自动分析处理系统&丹麦产多导生理监护仪所缺少的实验条件可由中科院神经所合作提供。五、申请者研究经历及目前承担其他研究课题资助情况主要研究工作经历及成果、近年来发表的主要论文、著作申请人简历邱永明，神经外科学副教授。1987年毕

38、业于福建医科大学，1990年获上海第二医科大学神经病学硕士学位。现为上海第二医科大学附属仁济医院神经外科副主任医师，副教授，上海第二医科大学神经外科研究室副主任。硕士研究生导师，一直从事神经外科临床和科研工作。1995年获上海市医学会颁发的“施思明奖”，1999年获上海第二医科大学优秀教师。2001年获上海市科技进步三等奖。1996-1997年作为访问学者在美国Tufts大学NewEnglandMedicalCenter和Harvard大学医学院MassechuseteGeneralHospital神经生理实验室从事脑缺血实验研究，研究题目：Markedneuroprotectionfollowingfocalcerebralischemiaintheratbyblockingneuronalfunction”1999年参加德国UniversityofMainz的神经内窥镜培训班。1997年完成国家自然科学基金项目“损伤性窒