基质金属蛋白酶MMP

1、基质金属卵白酶MMP彭惠,洪苏玲,陶永贤,彭彦,姜蓉【关键词】糖尿病视网膜病变；RTExpressinfatrixetallprtEinase2RNAinretinafdiabetihaster【Keyrds】diabetiretinpathy；RTPR；atrixetallprteinases；diabetihaster【摘要】目的：探究基质金属卵白酶(P2)在糖尿病视网膜病变(DR)产生生长中的作用及其机制.要领：用链脲佐菌素STZ诱导苍鼠糖尿病模子，提取视网膜中总RNA，半定量RTPR不雅察视网膜中P2RNA表达环境，HE染色不雅察光镜下视网膜的形态特性及变革，血清学检测苍鼠血清甘油三酯

2、(TG)，总胆固醇(T)和电化学发光法检测胰岛素水同等变革.效果：糖尿病苍鼠不但表现为高血糖,还表现为高TG血症.视网膜中P2RNA表达呈升高趋势,与正常比拟组比拟于造模后16k末时即差异具有统计学意义(P0.05).结论：此为研究基质金属卵白酶到场DR的发病机制提供了根据.【关键词】糖尿病视网膜病变；RTPR；基质金属卵白酶；糖尿病苍鼠0弁言糖尿病视网膜病变diabetiretinpathy,DR的产生气制至今尚未完全阐发，细胞外基质E，包罗基底膜的代谢非常被以为是产生DR时血管成效停滞的病理学底子.基质金属卵白酶Ps是一类Zn2+依靠的卵白水解酶，到场E的落解代谢.本研究应用链脲佐菌素st

3、reptztin,STZ诱导苍鼠糖尿病模子，不雅察视网膜中P2表达环境，为研究其在DR中的作用提供根据.1质料和要领1.1STZ诱导苍鼠糖尿病模子8k雄性仓鼠,体质量110130g,禁食12h后,腹腔注射STZ溶液40g/kg体质量,一连3d.德国拜耳公司快速血糖仪测定尾尖血空服血糖(氧化酶试纸法),血糖不变7d后,选用血糖13.5l/L的仓鼠为糖尿病(D)仓鼠(13只).实行一连16k,每2k测仓鼠体质量,血糖.正常比拟组(N)仓鼠(10只)予腹腔注射等体积柠檬酸钠柠檬酸缓冲液.1.2白腊切片HE染色与不雅察取眼球结实后标本通例脱水，白腊包埋，做5一连切片，按HE染色通例操纵举行，不雅察每组

4、视网膜在光镜下的形态特性及其变革.1.3血清学检测全主动生化阐发仪测定仓鼠静脉血血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(T).电化学发光法检测胰岛素程度.1.4视网膜中总RNA制备实行动物于16k在测体质量及空腹血糖后摘除眼球，剥离视网膜，液氮保存.Trizl美国Invitrgen公司提取总RNA，测定纯度和含量，10g/L甲醛变性凝胶电泳测其完备性.1.5半定量RTPR总RNA5g用逆转录酶SupersriptT11RT美国Invitrgen公司合成DNA第一链:P2上游和卑劣引物为5TGATTGAAGAAA3和5GGATATATGTT3;肌动卵白上游和卑劣引物为5GTGGGGGGGAA3和5TTT

5、AATGTAGAGATTT3.扩增条件为：P294预变性5in，941in,4950s,7245s共27个循环，72延伸5in，扩增产物长度为169bp；肌动卵白引物在扩增5个循环后参加，长度为500bp.15g/L琼脂糖凝胶电泳，BiRAD凝胶成像体系照相，SXiage软件阐发，P2RNA含量用P2与肌动卵白吸光度面积的比值表现.统计学处置惩罚：本研究数据以xs表现，接纳两样本均数比力的t查验举行统计学阐发.2效果2.1两组血糖及体质量的变革实行开始时,N组和D组仓鼠体质量别离为(1236)g和(1255)g,两组差异无统计学意义(P0.05).实行竣事时,N组体质量(13310)g与实行开

6、始时无明显变革(P0.05),而D组仓鼠体质量在实行第16k时落至(9815)g,前后差异有统计学意义(P0.01).实行开始和竣事时,D组血糖水均匀显着高于N组(P0.01);实行16k时胰岛素程度明显低于N组(P0.01，表1).表1正常比拟组和糖尿病苍鼠组的体质量、胰岛素和血糖程度(略).2.2正常比拟组和糖尿病鼠视网膜在光镜下的形态特性和变革见图13.2.3仓鼠血脂变革正常比拟组TG，T程度别离为(1.770.21)，(3.560.37)l/L;糖尿病组TG为6.542.04,显着高于正常比拟组(P0.01);而T程度(5.212.07)l/L与正常比拟组的差异无统计学意义(P0.05

7、).3讨论DR是糖尿病的严峻并发症之一，表现为微循环布局及成效上的紊乱，终极新生血管的形成.而在血管内皮细胞迁徙和增殖历程中，内皮细胞四周的E必需有选择地落解，操纵这一运动重要的就是Ps家属.Ps是一族到场E落解、其活性依靠金属离子Zn2+的庞大卵白酶家系.重要分为4大类：胶原酶：包罗P1和神经胶原P8，作用基质为纤维性胶原I，II和III；明胶酶：重要包罗P2和P9，是血管内皮下基质IV型胶原落解的关键卵白水解酶，对血管内皮细胞的游走起紧张作用；基质溶解素：P3和P7，作用底物普及包罗卵白多糖、层粘卵白、弹性卵白、明胶和前胶原前肽；膜型基质卵白酶：TP3.它的重要成效是：落解细胞外基质膜有用

8、身分、调治粘着、作用于细胞外组分其他卵白身分而启动埋伏的生物学成效、直接或间接到场胚胎发育、构造模子再塑及创伤修复等正常生理历程.显然本实行效果可以证明P2到场了早期糖尿病模子视网膜布局的重塑，对新生血管的产生大概有紧张作用.DRPs表达随病程希望升高，这大概是由于随着视网膜毛细血管基底膜的不竭增厚，可致视网膜毛细血管大量局促乃至闭塞，导致视网膜缺血、缺氧，由于缺氧可促使血管内皮细胞在局部开释细胞因子(如TNF，IL1)和血管活性物质(VEGF)诱导了Ps的表达升高，使视网膜毛细血管基底膜的加快落解，容许内皮细胞产生迁徙，随着增殖的内皮细胞打仗新的E大概产生的Ps的范例和或程度也就会差异了4-

9、5.如今外洋的研究多会合于对DR晚期阶段(prliferativediabetiretinpathy,PDR)已形成的新生血管膜举行阐发，而在此时细胞外基质的运动性生长和重塑早已启动.这重要是由于新生血管的形成包罗毛细血管内皮层下基底膜落解，内皮细胞迁徙和增殖，新生血管形成和新的基底膜形成等一系列历程.视网膜毛细血管内皮细胞的基底膜增厚及壁内周细胞的丧失是险些全部的DR早期构造学改变的一个标记，基底膜的增厚能影响很多成效如血管通透性，细胞粘附、增殖分化及基因表达等，其身分的改变一定引起血管成效非常8.在形成细胞外基质的两大部门即基底膜和间质中以IV型胶原为重要身分的基底膜组成一道停滞屏蔽，IV

10、型胶原酶P2)可以作为血管内皮细胞的“开路前锋落解基底膜.体外实行研究也证明了IV型胶原酶到场微血管基底膜的落解代谢历程6.因此Bishp7就指出假设我们能加深对IV型胶原即基底膜胶原的落解等血管形成的早期运动的明白将会更有大概给我们提示以寻到新的治疗要领.【参考文献】1KernTS,EngeranRL.parisnfretinallesinsinallxandiabetiratsandgalatsefedratsJ.urrEyeRes，1994,13:863-867.2Siinesu,PpvD,SiaA,etal.Pathbiheistrybineddiabetesandatherslers

11、isstudiednnvelanial:ThehyperlipeihyperglyeiahasterJ.AJPathl,1996,148:997-1014.3郭立新，汪恕萍.基质金属卵白酶与糖尿病血管病变J.外洋医学内排泄分册，2000,20(3)：120-122.4SethiS，BaileyTA，LuthertPJ，etal.atrixetallptEinasebilgyappliedtvitreretinaldisrdersJ.BrJphthall,2000,6(84)：654-666.5SalzannJ，LibGA，KhaPT，etalatrixetallprteinasesandthe

12、irnaturalinhibitrsinfibrvasularebranesfprliferativediabetiretinpathyJBrJphthall,2000,10(84)：1091-1096.6LareauxJ，FitzgeraldE，ReinerA，etal.VasularendthelialgrthfatrinreasereleasefgelatinaseAanddereasereleaseftissueinhibitrfetallprteinasesbyirvasularendthelialellsinvitJ.irvasRes，1998,55(1)：29-42.7BishpP.atrixetallprteinasesandt