课题3　分解纤维素的微生物的分离 (2)

1、课题3 分解纤维素的微生物的分离吴江汾湖高级中学计春娟1简述纤维素酶的种类及作用2说出刚果红染色法及其原理3掌握从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法、了解这类微生物的应用复习目标一、纤维素与纤维素酶纤维素纤维素酶组成分布作用探究活动一由葡萄糖组成的多聚体由C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶组成的复合酶棉花、木材、作物秸秆等微生物细胞内与果胶构成植物的细胞壁水解纤维素【即时训练】下列关于纤维素酶的叙述中，错误的是( )A.纤维素酶只有一种，只能将纤维素分解为葡萄糖B.纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分C.纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质D.分解纤维素的

2、细菌、真菌和放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的A纤维素分解菌二、纤维素分解菌的筛选1.方法： 方法一和方法二各自的优缺点 2.原理：探究活动二方法一中NaCl溶液的作用？二、纤维素分解菌的筛选1.方法： 2.原理：刚果红纤维素分解菌刚果红倒平板红色纤维素分解菌NaCl的作用：漂洗，洗去结合不牢的刚果红染色法优点缺点方法一方法二颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便、不存在菌落混杂问题1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。R代表透明圈的直径r代表菌落的直径一般挑选R/r的比值最大的菌落Rr透明圈大小与纤维素

3、酶的量与活性有关三、实 验 设 计土壤取样选择培养梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落探究活动三三、分离分解纤维素的微生物的实验设计流程： 纤维素纤维素梯度稀释鉴别培养基涂布平板透明圈纤维素分解菌的选择培养基培养基组成提供主要的营养物质纤维素粉 5gNaNO3 1gKCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g酵母膏 0.5g水解酵素 0.5g溶解后，蒸馏水定容至1000mL水碳源氮源、无机盐无机盐碳源、氮源、生长因子氮源、生长因子培养基组成提供的主要营养物质CMC-Na 510g酵母膏 1gKH2

4、PO4 0.25g土豆汁 100mL琼脂 15g上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL水鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠)碳源碳源、氮源、生长因子无机盐碳源、生长因子凝固剂项目物理性质微生物生长情况 目的选择培养基鉴别培养基固体培养基液体培养基增加纤维素分解菌的浓度 鉴别微生物的种类以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长绝大多数微生物都可以正常生长判断某个培养基是否具有选择作用时，应设立基础培养基进行对照。判断所使用的培养基是否被杂菌污染时，应设立不接该菌种的培养基进行空白对照。未接种培养基 接种培养基 无菌落产生有菌落产生课题延伸：(1)为确定透明圈内的菌落是否是纤维素

5、分解菌，需要进行 的实验，纤维素酶的发酵方法有_和_两种。(2)纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解_等纤维素后所产生的_进行定量的测定。 液体发酵固体发酵滤纸葡萄糖发酵产纤维素酶尿素分解菌的分离与鉴定纤维素分解菌的分离与鉴定分离条件 作为唯一氮源 作为主要碳源鉴定方法培养基中加入 ，变在以纤维素为主要碳源的培养基上，利用 法，出现鉴定原理分解尿素的微生物合成 ，将尿素分解产生氨，使PH ，加入酚红变红色分解纤维素的微生物产生 ，将纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤维素-刚果红复合物降解而出现 步骤土壤取样制备培养基样品梯度稀释涂布平板培养观察进一步鉴定土壤取样制备培养基 梯度稀释涂布培养 挑选菌落进一步鉴定尿素纤维素酚红