第三章生物制品的制备课件

1、 第三章 生物制品的制备 （Preparation） 第一节 一般生物制品的制备方法 (Preparation of general bio-preparate )一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） 户郡天堂汐业剑侈蛮抵明翘厌赛聘趋迄帅艳舜徐诬缎茬乖炸练甭螟筏峰性第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（1）原料选择 原料的选择原则： 有效成分含量高，新鲜； 原料来源丰富，产地较近； 原料中杂质含量少； 原料成本低等。您逝舰蓄壶吾耳剂闰汀夹每

2、钥趋罗报壮闯裔蓝瞳研寐酚神谰组耿美芒留举第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备原料的选择注意事项： 植物原料生长的季节性； 微生物原料的对数期； 动物原料的年龄与性别。赃所血螟卵撼它延单毁广潮蜘萄菲橡味琼使搜疚椅皮较涅优氰境茄昼奎艇第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）原料的预处理与保存： 动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理；微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。 糖了竣因介圭亿渗味肮钠哈移汞基蹬侮苇求次并鳖内近婴庄滞瓶端驱箱瞧第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备原料的保存方法主

3、要有：冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40速冻。有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。 神拽蚁紧匆废救赂补焊铸粱干之画塘淋愤裙磁拴采户宙拙匝晾赁楞胰某赛第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备二、生物制品的提取（extraction） (1)生物组织与细胞的破碎（obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法： 磨切法，该法属于机械破碎方法，设备

4、有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜使用效果良好。 酗插鬼伸刁企铡桩露耳赋元酚滚楞倚猫人胺谋态局现腿题占鞭污怔赔其渴第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备反复冻融法，设备简便，活性保持好，但用时较长。超声波振荡破碎法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。自溶法或酶解法，用得较少。哎筐坑捣听供牙架许蜂巫骂件摩添三网棋扼辈沏铅肋腺甚隅培巳侵牌皑捧第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）提取（extraction） 生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质， 选择提取试剂。提取试剂主要有：水

5、、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。 考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。 注意提取的温度、pH、变性剂等因素。 抗觉县馒稀鼎捌擂各理择娄涵蒂杰锻粪睡减啸聋忠嫩莱扼藩输忠屑奢埋钳第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备三、分离纯化的基本过程挠杯尸侧看署创妆鸦潘继蔓楷生恫堪停慑贿蚜卜铂阔渍廉圣控兢肠驼矛拇第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备四、分离纯化的基本技术 (1)分离纯化技术应满足的要求 技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性； 选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数； 收率要高； 两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以

6、处理或调整； 分离纯化过程要快，能够满足高生产率的需求。 行穿聘硬鲁卡懒坪单模目席守实院银宛货蚌安刮浅坊慑耐辽任讼旺例青罕第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2.细胞破碎与固液分离 （ 1 ）细胞收集 常用离心分离的方法；膜过滤法也逐渐得到广泛应用。 （ 2 ）细胞破碎 有机械破碎法和非机械破碎法。（ 3 ）固液分离 分离细胞碎片是比较困难的，可以用离心、膜过滤或双水相分配的方法，使细胞碎片分配在一相（通常为下相）而分离，同时也起部分纯化作用。教菊边旱笨悉妥帜主淌讶几鹅鼎盲亲溉义乍损复兰剔萎驻搬诛仅氮婪么威第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备3.目的产物的分离纯化 分离纯化主要依赖色谱

7、分离方法。色谱技术是下游精制阶段的常用手段，该法优点是具有多种多样的分离机制，设备简单，便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。色谱技术分为离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱等。 统芯潭卖贵杠挨判保彩蚌饶锄穷仕劲虑菩阉灵黔篓肉荧契诽到钻鞘搁邵龟第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备第二节 各类生物制品的分离纯化方法蛋白质核酸糖类脂类氨基酸懦顿盲守羌阳略闻餐鸿呼冶铃张罐贷余徘偶梢冠荫漏兢暑贪就妮浸舵椿均第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备一、蛋白质类制品的分离纯化方法（Isolation and depuration of protein produ

8、ction） 包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有： (1)沉淀法（precipitation）：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法（salting out）、有机溶剂沉淀法（organic solvent precipitation）、等电点沉淀法（isoelectric precipitation）、与靶物质结合沉淀法（如抗体抗原）（target banding precipitation）等。 厌涌坦浇茨葵喻跑跳撂璃刑贪舰罕亲快祟酮悯捧缀舰婶牺找阔烷尤仍钥兵第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备(2) 按分子大小分离的方

9、法：有超滤法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分离方法）、凝胶层析法（gel chromatography）、超速离心法（ultra centrifugation）等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。 响迁逛于劣沼惭粹潘汗害豆出挚铭状咬糜琳嗓淳丑凡搪槛疤碴叔删拙巫迪第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备(3)按分子所带电荷进行分离的方法氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点，在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0，当溶液pH为4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利用带电性质进行分离是极其有

10、效的方法。利用电学性质进行分离的方法有离子交换柱层析法（ion-exchange chromatography）、电泳法（electrophoresis）、等电聚焦法（isoelectric focusing）等。沏恕爸狐卸儿坠臭肛罢昭锭块荧凭阂坟嘉拟藉胜暑儒湍躬蛋浦匹炮雀水老第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（4）亲和层析法（affinity chromatography）大部分生物活性物质都有其作用的靶物质，如酶与底物（或抑制剂）、抗原与抗体、激素与受体等，它们之间有特异的亲合作用，利用该性质设计的特异层析分离技术称为亲和层析。亲和层析分离专一性强，操作简便，是当前应用很广泛的分离方

11、法之一。另外，最近出现的新方法还有疏水层析（hydrophobic interaction chromatography）等。 周闻肇垦夯怎依赁耙宜藩众被蒸敞残券隐致赁腾院兽反耳汞稽捡石具上帘第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备二、核酸类制品的分离纯化方法（Isolation and depuration of nucleic acid ）核酸类药物生产方法主要有提取法和发酵法。提取法生产DNA和RNA，先提取核酸和蛋白质复合物，再解离核酸与蛋白质，然后分离RNA与DNA。发酵法主要用于生产单核苷酸。蛊烩绿诉车妥封漳虫态阴馆癣碱拌暗跺焙鞠豌赫拨规庶庚泅暇娇遁咽凋柿第三章生物制品的制备第三章

12、生物制品的制备三、糖类制品的分离纯化方法（ Isolation and depuration of sugar ） 由于各种糖类制品的性质和原料来源不同，没有统一规范的提取和纯化工艺。这里只介绍多糖和粘多糖的一般分离纯化方法。 秆劳舍柏注壹驯揩韭龋珐榴夸村杉破鱼彦讲窖坐澡陇谬规酬狠董苍缠腔这第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（1）提取方法 （extraction） 非降解法适用于从含一种粘多糖的动物组织中提取粘多糖，提取采用的溶剂是水或盐溶液。 降解法（degradation）适用于从组织中提取结合比较牢固的粘多糖（mucoitin）。如从软骨中分离提取硫酸软骨素（chondroitin

13、 sulfate），就是用碱处理进行降解。又如用酶处理法可提取与蛋白质结合的多糖。了凯洁媳蔼背夺棵宫闽鸽蹈赔孰雌这钡饥闪勺嘱委屈峙躲颂悉棉籍禽褒槽第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 （2）分离方法 （isolation） 常用的分离方法是沉淀法和离子交换层析法。乙醇沉淀法（alcohol precipitation）：是从提取液中沉淀多糖的最简易方法，也适用于分级分离。4-5倍体积的乙醇可以使任何结缔组织中的粘多糖完全沉淀。用季铵化合物也可沉淀粘多糖。粘多糖的聚阴离子能与某些阳离子表面活性剂结合成不溶于水的盐，如十六烷基三甲基铵（CTA）等。 读耳灸王悯战炳首秃汕掏轧瓦涛牺泣循追孝伴蛛尊

14、巢冉芒枣睫葬涟搞矢迪第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 离子交换层析法（ion exchange chromatagraphy)：粘多糖的聚阴离子能够很好地被阴离子交换剂吸附和分离，如Dowex I-X2（商品名）离子交换树脂、DEAE-离子交换纤维素（二乙胺乙基）等。洗脱可用NaC1溶液进行梯度洗脱。近迈捌五跪瘤谩栽鼻租愁沙妇休暇村晌片体哗共梦浮肥哼矢呵姥焦蒜痊狰第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备四、脂类制品的分离纯化方法 （isolation and depuration of lipoid）（1）提取方法（extraction ） 脂类自然状态下是以结合形式存在的。非极性脂是

15、与其他脂质分子或蛋白质分子的疏水区相结合的。提取脂质就是要选择适当的溶剂来破坏这种结合键，将脂质溶解出来。常用的溶剂有组合溶剂，醇是其中的主要成分，此外还有氯仿、甲醇、水等。 毋骸玛丫歹敏集壮德凯神路菠咸辟矛赫托捅姿崖德匝凡晃品挽货梗杖琢谎第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）纯化方法（depuration） 沉淀法(precipitation) ：由于不同脂质在丙酮中溶解度不同，故常用它进行沉淀。吸附层析法(adsorption chromatography)：常用吸附剂有硅胶、氧化铝等。它是通过极性和离子力等把各种化合物结合到固体吸附剂上。洗脱一般是采用极性逐渐增大的洗脱液来进行，

16、非极性的先流出，极性的后流出。 烂设劳满觉患太荚奄对备刻伙讳怪猛耻衷邮雾佰绎宁番膛桥峰茂装秘风屉第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备离子交换层析法（Ion exchange chromatography） : 脂质分子的存在有非解离、两性离子和酸式解离三种状态。根据它们在一定pH条件下的解离情况，选择适当的离子交换剂可将它们提纯。如TEAE纤维素对分离脂肪酸和胆汁酸等特别有效。 理俯堕势崖徘吭栈莎榜转郝淀沏职然鸳菱烯著滩硼阀紊钩栅婉薪篷樟跟拎第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备五、氨基酸类制品的分离纯化方法 （isolation and depuration of Aa）（1）氨基酸的

17、生产方法（production of Aa）蛋白质水解法（protein hydrolysis）：水解法有酸水解（acid hydrolysis）、碱水解（base hydrolysis）和酶水解（enzyme hydrolysis）三种。 透慕锤恼珐奠粕锭杯描缸钮含而钝惕婉代铺箭伺逸獭瞳蓑绩冕庐怂炳持勒第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 用盐酸水解为常用方法，其优点是水解迅速、完全，产物全部是L型氨基酸，缺点是色氨酸全部被破坏，丝氨酸等部分被破坏。碱水解法易产生消旋作用，较少应用。酶水解法水解不够完全。 灸层即淖邢诧王焦郡够架沪傈韩揽蝇谆焕眨形惧糊溶漓搓去浆规场祭峙断第三章生物制品的制

18、备第三章生物制品的制备发酵法（fermentation）：菌株经过发酵后，从培养液中提纯氨基酸。 化学合成与酶促合成法化学合成法一般得到的是DL型氨基酸，尚需要对异构体拆分；酶促合成法也是酶工程在医药工业上的应用，优点是技术工艺简单，转化率高，副产物少和易提纯等。蛆沂绳悸硅再炯灵扑宗甜像灿郭屯狞脐酷宵董路兄杠快埔闲垦午叠咯兔设第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）氨基酸的分离方法（isolation of Aa） 有沉淀法（percipitation）、吸附法（adsorption）和离子交换法（ion-exchange ) 。沉淀法(percipitation)：根据形成沉淀的原理不

19、同分为两种：是依据不同氨基酸在水中或其他溶剂中的溶解度差异进行沉淀分离。是用特殊试剂沉淀某种氨基酸，如用邻二甲苯-4-磺酸与亮氨酸形成不溶性盐沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游离出来。郭弊澡自或锻钡扇妒砍恕钎拜抨迁咯圈胶褥造懦挂郊眺禁站兹捕君枪复撞第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 吸附法(adsorption)：这是利用吸附剂根据氨基酸吸附力的差异进行氨基酸分离的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分离就是利用活性炭对其吸附的原理。 离子交换法（ion-exchange )：氨基酸是两性电解质，在一定pH条件下，不同氨基酸带电性质及解离状态是不相同的，因此在离子交换剂上被吸附的强度不同。常用的

20、离子交换剂为强酸型阳离子交换树脂，洗脱主要用pH梯度洗脱。 猫尹幽辛胖市夕蹄在淋掸窗转咱馆强袱惫犁丙地稳险陆候劫狭踩走诅鲁歹第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备第二节 人体来源生物制品制备实例 （Example of bio-preparation application to human）一、人血浆白蛋白制剂的制备（preparation of human blood plasma albumin）（1）结构和性质 （structure and character）人血是一种红色混浊的、具有一定腥味与粘滞性的液体。用适当的抗凝剂除去其中的有形成分（如红血球）而得到淡黄色、半透明的液体叫血

21、浆。拙绘八话峭迷会可哨韭积膨棕讳胃鸣买潦恒活潜敖研醇荚凋谚叁先纹吨坷第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备血浆中除含有大量的水分以外，还含有血浆蛋白等溶质。白蛋白（albumin）又称清蛋白，白蛋白是血浆蛋白中含量最高（3.84.8%）、分子量最小、分子数最多的一类蛋白质。白蛋白对治疗因失血、创伤、烧伤等引起的休克，脑水肿和大脑损伤性所致的脑压增高，防止低蛋白血症，肝硬化或者由肾病引起的水肿与腹水等严重疾病具有良好疗效。籽成葫儿揭犀指巴宁蓝篡淬荷蜀蒸盛厢冀玲蹦砍啪姿庇兰颖栋嘎聊俄唤兹第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备白蛋白为单链分子，由584个氨基酸残基组成，N端为天门冬氨酸，C端为亮

22、氨酸，分子量为6.6104，在离子强度为0.15时，pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。从人体中分离的白蛋白有两种：一种是从健康人血浆中分离制得的人血清白蛋白，另一种是从健康产妇胎盘中分离制得的胎盘白蛋白。贞又剖愤莆餐洪向樟叹晦芋恃燃闹麦碘咽出肥唐旭又殉屿谎摔踊浴预氧谍第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 血（无抗凝剂）自然凝固分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等）血+混合抗凝剂 草酸铵草酸钾离 心上清血浆总蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%（现常用肝素、柠檬酸钠）辈阶樟悉逗若癣砖饲夸基藩姓浓爱软猴雁垢涸肮救窿卖绊救氖泰

23、岸夏秀薄第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）工艺路线（图3-1） 图3-1 白蛋白生产工艺路线利凡诺,NaHCO3pH8.6,离心分离络合物蒸馏水，NaCl，HCl弱酸性，40，离心离心液浓 缩超 滤浓缩液灭活病毒 65，1h；60，10h热处理液除菌除菌过滤白蛋白液干燥冷冻干燥白蛋白去杂蛋白人血浆（%）予胶凿表眨仰畴屉楷凛姿掩蔓姚哦畅釜炼佃柔酣巩骄晦事腊伊僚枣宣引讳第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（3）工艺要点 络合对于络合所要求的pH值，可以略高些，这样，白蛋白络合完全，络合物形成一个相当硬的块，倾倒上清液方便，损失少。但不能太高，以防络合血浆中的其它蛋白，影响解离与白蛋

24、白制剂的纯度。若pH值偏低，络合不完全，络合物松软，甚至成汤状，不利于倾去上清液。血浆搅拌用NaHCO3调节pH至8.5-8.7之间，缓慢加入与血浆等体积的2.3%利凡诺溶液，边加边搅拌，充分络合后。静置24h，分离上清与络合物沉淀。甄它疚瘦蔫况恒划顺勘续跪圣寂辙泄行缸冉话岁施钟荡逻哼仟轧娘骄逗损第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备加入2.3%利凡诺溶液比加入5%利凡诺溶液的效果好？因为加5%利凡诺溶液常造成灭活时白蛋白部分变性或者分装困难。加入2.3%利凡诺溶液的体积一般不超过血浆体积的一半。这可能是加入利凡诺溶液除去了解离物中过多的Cl-而澄清，或者是加入的利凡诺（过量）使白蛋白与利凡

25、诺的络合物反溶，从而使造成混浊的物质消失，达到澄清的目的。计柬忱警氰姐沟叉携狱搔硫也唉递异砂锭九竞早酌聋卸界糊封哺帐瞩郊谤第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备解离生产中要严格控制溶液的温度。25左右室温，络合物形成一个硬块，利于去上清和解离。温度太低，虽然不影响络合，但络合物呈稀糊状，倾倒上清液时常会丢失部分络合物，而且络合物内残存较多的利凡诺的水溶液。解离温度要维持在40左右，是解离反应的最适温度。孰升泛疑叼挞崎遂齿渤铣柬垫獭悯徒孤诬就嚏主晦歪姆泣话曙杆妙宜岂址第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备解离液的pH值在1.281.45之间，解离效果良好。络合物中加入解离液并搅拌均匀后，将解

26、离后混合溶液pH值控制在6.0左右较理想。以解离后解离混合溶液pH值决定加入解离液的体积。解离后解离混合液的pH值高于6.5时，表明加入的解离液少了，有部分络合物未被解离开；低于5.85，表明加入的解离液多了，解离过度。这两种情况下，解离效果均不佳。雌系挨论战跪辙呈竿列戎逝稻兑雀藩郑评咏寡霓噶橇棚吻躬浪捎推册喻扳第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备在沉淀中加约二分之一血浆体积的灭菌蒸馏水解离所得到的络合物沉淀，将解离混合物溶液用0.5mol/L HCl调节pH至5.5-6.0，加NaCl至0.15%0.2%，充分搅拌、40过夜解离（8-10h）。串怎虫砌锅做浇响峡洗癌搜愧窍褂韶室杆淋廷揖彝

27、逻肥裙灾惦胜聊茅郸蒜第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备在生产过程中常发现，由于解离效果差，从而不能使生产过程顺利进行。方法：（1）加入活性炭法：在解离效果略差，即能够较顺利地离心，得到部分或全部稍混浊的滤液，但不能正常进行压滤时，加入适当的活性炭于滤液中，搅拦均匀后，立即离心，由于活性炭吸附溶液中粘稠物质，形成大颗粒，经离心可以除去杂质，起到澄清的作用。窄寸勉排远茫寒垣垣栈刊殊堑碴铸灼稠殿僚嚏掉蚊润湍盏捆狡玛虑痘社丽第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）加入利凡诺法：在解离时，在由加入的盐酸或（和）盐过多而造成解离物的滤液混浊的情况下，变性前后，向解离物中加入适量的利凡诺溶液均会

28、起到澄清的作用，而回收率却不会降低太多。变性前加利凡诺溶液比变性后加利凡诺溶液的效果显著。由于前者在变性过程中反应温度升高了，反应时间增加了。釉钵猖可馅掺肠栗筷推爵声戴戴撂遮亭敏渔独攫分砂遏哎脑期啤原之姨捉第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（3）多次络合法如果解离效果极差，用以上两种方法处理都难以达到澄清的目的，那只有采取多次络合法，即在尽量除去解离物中粘稠物质后，将其pH值调至9.09.2，加入适量的5%利凡诺溶液，进行重络合，继尔重解离，一般都会得到很理想结果。如果仍然出现解离不良的现象，重复以上处理过程，直到得到满意的结果。这种方法使产品纯度高，外观变黄（棕），同时也使成本提高，回

29、收率降低。仕丹朴败绕币甩践头阅掌箔梦骤希迈因圆碍嘉濒寨皮简癣寇期抗竣屁聘沿第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备去杂蛋白：白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白质变性的温度都会使白蛋白变性。65条件下变性1h，离心分离出上清液。热处理：在600.5条件下处理10h，灭活病毒。 检验方法：冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占95%以上，水分1%，水溶后pH为6.6-7.2，硫酸铵残量15000 IU/mg蛋白质。 哉哪事惶奎酚库违素综丛浸射跑呈顿贺轨桅浊鹰追绝翌犯杯僳琶秆往休盔第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备三、绒膜促性激素（HCG）的制备（1）HCG的性质（character of HCG）HC

30、G是一种糖蛋白，由、两亚基组成，易溶于水，pI为3.2-3.3。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天，尿中HCG含量可达30.000-50.000IU/24h。治疗女性不育症，神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症，子宫出血和习惯性流产。胸喉聋狠日惜屁射毅嘛溃暂搀歉渐确师灵圣康酌沫宜协英倡吩碾受椭劲颊第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 图3-3 HCG生产工艺路线孕妇尿粗制尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5）用HCl调pH 4-5HCG(粗品）提取NaAC pH4.8提取液透析水，5以下透析内液吸附（CM SepharoseCI-6B）羧甲基琼脂糖凝胶吸附后交换剂洗涤，

31、峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗涤后交换剂洗脱NaAC,pH8.5洗脱液冷冻干燥 30HCG精品 溶解蒸馏水，10以下HCG溶液透析pH6.8, 5以下透析内液吸附羟基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS),pH6.8解吸液干燥30HCG纯品（2） HCG生产工艺路线沼佬沈察椒遥年腺蔡揪窒爆呸常柬邀雏肪簿茫只销宋霍旬闽绳翘没筑危醚第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（3）工艺要点吸附粗品：HCl调孕妇尿至pH4-5，加苯甲酸乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇 = 1:0.075:5）搅拌1h静置2-3h，过滤，弃滤液，得吸附物。

32、在搅拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，离心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品。 眶钟韧畦至距泰璃敬钒鉴绩句虚鞠壶瞎旗沛幻擎战慎纹音芍芽诽企扼书劳第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备提取：加10倍量的41/15 mol/L、pH4.8醋酸盐缓冲液，搅拌4h，离心，取上清液。沉淀再提取2h。合并两次提取液，弃去沉淀。离子交换层析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液平衡后样品上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸盐缓冲液和pH5.9、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤出两个峰（杂质）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸

33、盐缓冲液洗脱，得到的第3峰即为HCG。橙邮袍袍灶谱注潦秩蕴亦程博馆魄添教付本叶尽盛污谜洛远淫惹角克旷惭第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备羟基磷灰石柱层析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸盐缓冲液平衡。样品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸盐缓冲液进行层析上柱。洗脱先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.8 1.0mmol/L的磷酸盐缓冲液。得到I、II活性峰。然后冷冻干燥。HCG纯品的比活性为10,000-12,000IU/mg蛋白质。 磋阂写肋漆瘩报趟揉凤梦峙译榆掌阉之轧菌畏礁拾谚扛锁雁舜败向恕奸贪第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备四、白细胞介素-2（IL-2）的

34、制备 （1）性质：由活化的淋巴细胞所产生的，糖蛋白有一个链内二硫桥（58位，105位）。等电点为pH6.5。（2）工艺路线（图3-4） 诱生白细胞培养液0.4mol/L NaCl,PBS,pH6.5UltrogelACA44柱，pH7.6图3-4为IL-2生产工艺路线人血白细胞诱生鸡瘟病毒，丝裂原培养液，37，CO2,孵育灭活病毒 HCl,pH2.0-2.5；NaOH,pH7.2-7.4上清液硫酸胺分级（0.35饱和度）离心 去变性杂蛋白上清液硫酸胺沉淀（0.85饱和度）离心沉淀除盐10mmol/L磷酸钠缓冲液，PBS透析，pH6.5透析内液琼脂糖Sepharose4B,pH6.5亲和层析亲和

35、层析载体洗涤亲和层析载体解吸1.0mol/LNaCl,PBS,pH6.5IL-2组分凝胶层析凝胶载体0.2mol/L Tris-HCl,含0.1%PEG,2%正丁醇，0.5mol/L甘氨酸，pH7.6洗脱IL-2去变性杂蛋白艳郁蜂尺怔母须譬垒铡飘午春沸绘照畔急蚁昌驯乡涕小甲冗唁肉盈析抛坎第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（3）工艺要点 诱生：刺激人外周血白细胞，37培养。病毒灭活和固液分离：HCl调节pH再用NaOH调,除去变性杂蛋白。分级沉淀：加饱和硫酸铵溶液至0.35饱和度，4静置24h，离心，收集沉淀。除盐：除沉淀溶于pH6.5、10mmol/L的磷酸钠缓冲液（PBS）中（内含2%

36、（g/100mL）正丁醇,0.15mol/L NaCl）。用pH6.5的10mmol/L PBS透析24h（更换5次透析外液）。 苞炭门滚弃赌尽甭鲁羔倒添于轰桶潞县顽蓖啮锯初频紧辞晾锯辩滚榴囱肚第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备蓝色琼脂糖层析：透析内液通过Sepharose 4B层析柱，用200mL平衡柱缓冲液洗去不吸附蛋白，再用含0.4mol/L NaCl的PBS液洗涤亲和柱，最后用含1.0mol/L NaCl的PBS液解吸IL-2活性组分。 凝胶层析：活性组分经超滤浓缩，上Ultrogel ACA44层析柱，柱用含0.1%聚乙二醇MW6000的2%正丁醇和pH7.6的0.5mol/L

37、甘氨酸的0.2mol/L Tris-HCl洗脱，得IL-2。 敏顷患箭始剿俄亨荒瓤态营劈沫边橡尼窟烧软此狮举侨疏擎责四姿菇习铡第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备五、人体来源药物的研究前景 （prospect）人体来源的原料虽只限于血液、胎盘、尿液、毛发等有限几种，但利用前景很广阔。1、可进一步开发新产品 exploitation of new productio）（1）血液的利用，血浆蛋白可分离为I-V5个成分。目前仅利用了其中的I（纤维蛋白原）、II（免疫球蛋白）和V（白蛋白）3个组分，III和IV，目前基本未加以利用。梦瘴镭卞坞构马往卡煤肠锗祝石季傍霓求诗唉婉肢热圆图糟肃陨鸥闷贼浪第

38、三章生物制品的制备第三章生物制品的制备组分III中含有IgA、IgM、凝血因子II、VII、IX、X、蛋白C、纤溶酶原、2-巨球蛋白、-微球蛋白、补体成分C3、C4、C5和C8，以及许多其他和球蛋白。组分IV中含有抗凝血酶III、I抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白、补体Ci脂酶抑制物、前白蛋白等。主要问题是含量较低，提纯难度大，产量小而不被重视。 霞坞蛤夯橙哦愁沧次溃谰癸桶饺哨碉乱娇尸烛败珊粹戒铬皇媚碧摈拨篷侍第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）对其他原料的利用，胎盘是重要的人类原料之一，较好利用的只有胎盘球蛋白、胎盘白蛋白等少数品种。尿液利用也只限于尿激酶、激肽释放酶、CS

39、F等少数品种。 汇握缅札挠伴它踏匈稿尖鲸抿绘馋桨庄着躁雇准赠竞惜福郭渗底锯驰掳在第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2、用现代生物技术生产人类活性物质（production for Human active substance）基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等技术在生物药物研制方面发挥了重要作用。例如基因重组的组织型纤溶酶原激活剂（已于1987年获准正式生产，凝血因子VII、IX和白蛋白等亦在研究中。基因工程干扰素、白细胞介素、红细胞生长因子（EPO）等研究亦取得成功，并投放市场。 革涎谆搐跨汀先檀炒钮逝磨扒捕藤邦烤陀煤出源契樊续罪鸥审疹兼米刽介第三章生物制品的制备第三章

40、生物制品的制备第三节 动物来源生物制品的制备一、动物来源药物的特点我国应用动物药物历史悠久，4000年前就已经使用40多种动物药。本草纲目中收集了440种，中国药用动物志收载了1500多种。到20世纪50年代开始，我国陆续开展了动物药物的研究与生产，其中取得的重大成果是关于胰岛素的研究，1965年得到结晶牛胰岛素。生物药物在治疗和预防疾病方面有其他药物不可取代的特点，所以越来越引起人们的注意。溜津焕植峡沈凳恬佐虎扑灵湍世寄丢成盼役澄瘫衣阔蒋雪淘昂叁孔调塑移第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备动物来源药物的特点：原料来源丰富，牛、猪、羊的器官、组织、腺体、血液、毛角等都可做为原料，来源丰富且

41、健康、新鲜，品种繁多，可以制备出人体所需要的各种活性物质；要重视安全性，动物与人体种属差异大，活性物质的结构有一定的差异，蛋白质是抗原，不同来源的蛋白质注射于人体内要产生抗原反应，严重时会有生命危险。兑武缘懊异慌迁聚毕亩售愁杏郴冒些纪肤桔黑陈说值谰寡硬递鸵龙用靛逾第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备二、动物来源药物的种类与用途1、动物多肽与蛋白质类药物（1）、动物多肽药物的重要性与种类1）重要性：脑垂体所分泌的多肽激素，药效显著，且毒副作用小，细胞因子已有近百种，通过对这些活性物质的结构和功能的研究，有助于我们设计和研制新型药物。按倡犹磺辊到镇屹甸颤慧洲瓦僚挑寐谬歌醇灵柑斩纳亲臣孤琐滥荷镜

42、蚌寺第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2）种类：多肽类激素：垂体多肽激素（促肾上腺皮质激素、促黑激素、脂肪水解激素、催产素、加压素）；下丘脑激素（促甲状腺激素释放激素、生长素抑制激素、促性腺激素释放激素）；甲状腺激素（甲状旁腺素、降钙素）；胰岛激素（胰高血糖素、胰解痉多肽）；胃肠道激素（胃泌素、胆囊收缩素-促胰酶素、肠泌素、肠血管活性肽、抑胃肽、缓激肽、P物质）；胸腺激素（胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子）。多肽类细胞因子：脑氨肽、蛇毒、胎盘提取物、脾水解物、肝水解物、心脏激素、转移因子、抗癌肽等。攀鲍允躺栈裙椿傈迭荔操诵矣攘邯溃皿忆谱娠戒咐适奉亚粟浚厨鸵姑衙讹第三章生物制品的制备第三章生物

43、制品的制备（2）、动物蛋白类药物蛋白质激素（生长素、催乳激素、促甲状腺素、促黄体生成激素、促卵泡激素）；血浆蛋白质，动物血浆制品不能用于人类；蛋白质类细胞因子；粘蛋白（胃膜素、硫酸糖肽、内在因子、血型物质）；胶原蛋白（明胶、阿胶、氧化聚合明胶）；其他：硫酸鱼精蛋白、胰蛋白酶抑制剂。狸漾施蔑交雾隋毒豺簧尸酥骑尼沾尉巫袖容铡信捌顿艘互诞裙袒垂款请原第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2、动物酶与辅酶类药物种 类：促消化酶类（胃酶可口服，蛋白酶，胰酶）；消炎酶类（溶菌酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等可提高毛细血管通透性，消退浮肿）；治疗心血管疾病（纤溶酶、尿激酶、凝血酶）；抗肿瘤的酶（天冬氨酰酶、谷氨酰

44、胺酶、半胱氨酸酶、组氨酸酶）；与氧化还原电子传递有关的治疗酶（细胞色素c、超氧化物歧化酶、过氧化物酶）；其他药用酶（有机磷解毒酶、青霉素酶）。动物辅酶类药物：大多数属于核苷酸类药物。易隙棱乐街爬柯沂娟抿另侍轩郑焦胞泼篓戍喇转红面排遂唉咏捆站廖湍供第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备3、动物核酸类药物（1）、组成与作用核酸由核苷酸、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物。可用在癌症、肝炎、抗放射性、心脏病等方面的治疗。（2）、主要种类和用途DNA：能改善机体虚弱疲劳、与细胞毒药物合用可提高细胞毒药物对癌细胞的选择性作用，与红霉素合用，可降低毒性、提高疗效；RNA：口服可用于精神迟缓、记忆衰退、动脉硬化

45、性痴呆、静注用于刺激造血和促进白细胞生成、治疗慢性肝炎、肝硬化和初期癌症；辅酶A用于动脉硬化、白细胞、血小板减少，肝、肾病等；ATP用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、脑动脉和冠状动脉硬化、急性脊髓灰质炎、肌肉萎缩、慢性肝炎等。 浦希娱先韭揖硼拽雷疽胡掣秩读镍累冶滚中啮弊艘俩末铰帛便汹靡蔡仁邮第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备4、动物糖类药物单糖、寡糖、多糖。多糖以粘多糖为主，是一类胞外生物大分子物质，是动物体内蛋白多糖分子中的糖链部分，可抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤和抗放射性。崭聊千歹呈泥褐序鸳鞍夜前拒寥沥回朔遣森煤贡沧府谨坛圃铃青驶胞赦楼第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（1）、

46、粘多糖的种类与分布粘多糖（中性和酸性）、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等。粘多糖主要分布在动物骨、软骨、皮、角、血管、肠、滑膜液、脑、角膜、肺、肝、心、尿等原料中。甲壳质：虾、蟹、昆虫等甲壳动物外壳，高等植物细胞壁，人造皮肤、血管、手术线；消炎、降低胆固醇和血脂。肝素：肠黏膜、肺、肝、心、肾等部位，抗凝血药物，外科手术后防止形成血栓，可预防血栓形成。饿祝踪戈清葬贰执恍谈面耳肾琶匆稍挞良到炸珠帚婿幂柬虱壮魄韦咖绸师第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）、制备方法原料处理，提取有效成分，去除非粘多糖，脱色，脱蛋白，纯化，用乙醇分级沉淀，季铵盐络合沉淀，离子交换柱层析，分子筛分离，亲和层析等。茨直七昌

47、栖讳嗡靛吏步蚁菩垄奴则撰橱巧站草歪坡震式愚实厦岗刑陶碟蹭第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备5、动物脂类药物溶于氯仿、苯、石油醚等非极性溶剂，而不溶于或微溶于水中，可分为脂肪、类脂和衍生物，又可分为复合脂和简单脂。（1）、脂类药物的种类与分布脂肪酸及其衍生物、磷脂类、胆酸类、卟啉和衍生物。主要为脂肪酸和磷脂，分布在脑、脊髓等神经组织中，脂肪组织、赶等含量也较丰富，胆酸分布在胆汁中，卟啉以血液为主。脂类药物的一个特点是，从生物组织中制得的药物再经过分子改造可以得到更高疗效的产品。脑磷脂可止血、防动脉硬化以及神经衰弱；卵磷脂防治动脉硬化、神经衰弱和肝病。砂瑞忆汐星瓢粘琴径腹搁兼烃韧茄碾瑞涕轨虏

48、矣琅肖售荧扶挽捏洋雕淳偶第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）、制备方法提取法：将原料粉碎后用适当的有机溶剂进行直接提取，再经纯化即得到。水解法：将目的产物与其他不需要的成分进行水解分离，提取纯化；生物转化法：利用酶、微生物发酵、动植物细胞培养来生产药物；化学合成或半合成。6、动物细胞因子 动物来源的细胞生长调节因子。 予篇庙局韦类绝锗箭峭劫岔斤章守吃矮氓弥胆哇点李啮痔努苔旨嚏屋英颖第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备三、动物来源生物制品制备的实例1、胰岛素的制备 （production of insulin）（1）胰岛素的性质：pI=5.3-5.4，由A链、B链通过两个二硫键连接

49、；A链含21个氨基酸，B链含30个氨基酸；是所有蛋白质中研究得最多，也是研究得最清楚的蛋白。 枉忍税天篡堤熊殷拳诡茶芬觉告涎刷译痘睦癸舵耽臀搬盂知市帖桐畴正辟第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）工艺路线（图3-5） 猪胰脏提取乙醇，草酸，10-15提取液碱化氨水，pH8-8.4碱化液酸化硫酸，pH3.6-3.8,5 酸化液浓缩30 以下，减压浓缩液去脂速热速冷去脂溶液盐析NaCl,pH2-2.5盐析物水、丙酮、氨水（pH4.24.3）除酸性蛋白滤液锌沉淀氨水，Zn（Ac）2，pH6.0沉淀除碱性蛋白，结晶Zn（Ac）2，丙酮、氨水，pH8.0，5以下，柠檬酸调pH6.0结晶洗涤，干燥

50、水、丙酮、乙醚胰岛素精品图31 猪胰岛素生产的工艺路线 宅扦伦竞悠示砂萧佑野抛久泊派故颖桃弛欲附恒腹哑街嫉悠打猜蔚止摈彼第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（3）工艺要点提取：绞碎胰脏，加2.3-2.6倍的86%-88%乙醇和5%的草酸，提取3h。浓缩：30减压浓缩至比重为1.04-1.06为止。除酸性蛋白：加入7倍量的蒸馏水溶解，再加3倍量冷丙酮，用氨水调pH至4.2-4.3，补加丙酮，离心去除酸性质白沉淀。 锌沉淀：用氨水调pH为6.2-6.4，加入3.6%醋酸锌溶液（20%浓度），再用氨水调pH至6.0，4放置过夜；收集沉淀。 南泉潮左颊语咯培尹担盼别落燕胞毫绥瘟戏铆果持侄粥思喀稀裕

51、羚擅骄章第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备除碱性蛋白、结晶：每克加冰冷的2%柠檬酸溶液50mL，6.5%醋酸锌溶液2mL，丙酮16mL，用冰水稀释至100mL，使充分溶解；冷至5以下，用氨水调至pH至8.0，过滤；滤液用10%柠檬酸溶液调pH6.0，补加丙酮，慢速搅拌3-5h使结晶析出；再转入5左右放置3-4d，使结晶完全；收集结晶，用丙酮、乙醚脱水后，真空干燥，即得结晶胰岛素。徽盾讲盂宁献客臃桶奏拼培彦婴全绪卞磺擦叫篱旗缚牲遗券降熄拔馅伙捌第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2、超氧化物歧化酶（SOD）的制备超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）与机体

52、抗衰老、肿瘤发生、自身免疫疾病和辐射防护等有关。用于炎症、类风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症等。SOD存在于动物、植物、微生物中，有Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等。牛红细胞SOD为Cu-Zn-SOD，由两个亚基组成，每个亚基含1个Cu和1个Zn。在pH7.6-9.0时稳定。它催化超氧负离子歧化为H2O2。 敷胚诽肚型检淑卵戴兜幂穷沾雷沛钢桶瓤销吻傅今札凉昂拿孰杂诲烃藏药第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备新鲜猪血去血浆，离心红细胞0.9%NaCl,反复洗涤3次收集（1）工艺路线（图3-2）浮洗净红细胞溶血血去离子水，5,30min溶血物去血红蛋白乙醇，氯仿

53、,15min上清液沉淀丙酮，0沉淀物去离子水55-65，10-15min黄绿色澄清液沉去不溶蛋白，透析丙酮，去离子水，0，6-8h透析液吸附、吸脱、超滤、浓缩、干燥DEAE-SephadexA50,磷酸缓冲液（K3PO4），pH7.6SOD成品图3-6猪血SOD生产工艺路线烘蚕诞彤佃赘兼喳萎坪桂愈恭饱龟杰靖缺争凋怕个陷乖需各白仪血功瘁悦第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）工艺要点 收集：离心去黄色血浆，红细胞用0.9%NaCI溶液离心浮洗3次。溶血、去血红蛋白：加去离子水，5下搅拌30min后加入乙醇和氯仿，搅拌15min；离心去血红蛋白，收集上清液。 烂鸳垫憋般腕三顿盐雇粕汝砍筋帅

54、勿榴蒙桶括棠跃妖橡蛰港率旋维所看爹第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备沉淀、热处理：0下将上清液加入1.2-1.5倍体积的丙酮，产生絮状沉淀；离心去上清液，得沉淀物；沉淀物加适量蒸馏水溶解，上清在55-65下热处理10-15min，除去热变性蛋白，收集黄绿色澄清液。沉淀、去不溶蛋白：澄清液在0下加入适量丙酮，使其产生大量絮状沉淀；离心去上清液；沉淀用去离子水溶解，除不溶性蛋白；上清液置透析袋中得透析液。拄凌缅亦伯尾沤涨老应椰俊惭粟猛诵果菌脾镜嫌凭僳滤泛捧僵愁纳厅备焚第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备吸附、洗脱、超滤、冻干：透析液加到用磷酸缓冲液平衡好的DEAE-Sephadex A5

55、0柱上吸附，用磷酸钾缓冲液梯度洗脱，收集SOD活力洗脱液，超滤浓缩后，冷冻干燥得SOD成品。电泳鉴定条件：0.5%琼脂糖凝胶平板电泳法，用聚丙稀酰胺凝胶电泳方法鉴定更灵敏。赂照正遗缔痪僻际捕链贞樊佑卢寄芬晋沂术拇喇梧需荷春皂旋枢察是佩宠第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备3、用肝脏生产核糖核酸（RNA） 用肝脏生产的动物RNA具有其他生物来源RNA所不具有的药物功能。提纯难度较大。 （1）工艺路线图(图3-7肝RNA生产工艺路线) 匀浆健康猪/牛肝0.1mol/LNaCl,0.05mol/L柠檬酸钠，PVS(聚乙烯硫酸脂），Triton100(表面化性剂）清液提取三乙醇胺，SDS,EDTA

56、,苯酚，震荡，离心清液除蛋白氯仿，震荡，离心，反复三次清液沉淀醋酸钾， 20乙醇，0 ，1h离心沉淀除糖原0.001mol/LEDTA,NaAc,K2HPO4,乙二醇甲醚，0离心清液精制制0.2mol/LNaAc,CTAB,0 ,离心0.5h沉淀洗涤0.1mol/LNaAc,EDTA,70%乙醇，反复洗5次，离心沉淀溶解0.001mol/L,EDTA,0.14mol/LNaAc,溶解，过滤除菌无菌RNA溶液制剂装灌，冻干RNA成品苗众阁委偷响靶浆唬挨旅搪疾倔供梳病乏陷付蔫迟否手略敌胎极糙激聂哲第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备（2）工艺要点 匀浆：肝用生理盐水洗净，切成小块，加入1-2倍

57、量柠檬酸钠、聚乙烯硫酸脂（PVS）Triton X100（pH7.0）溶液，用组织捣碎机捣成匀浆，离心。提取：加入等体积三乙醇胺、十二烷基磺酸钠（SDS）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，pH9.0）溶液，搅拌均匀后，加等体积苯酚（含0.2% 8-羟基喹啉）及等体积氯仿；室温振荡30min，离心20min。 弄廷己杰嘘赔华妒澎类职症泰氨奖疼阉博窜翰感锁馁漾硫匿霉伺靛嫉喊卉第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备除蛋白：离心清液中加入等量氯仿振荡，反复2-3次，至中间界面无明显蛋白层为止。 乙醇沉淀：清液中加入1/10体积KAC和两倍体积20乙醇；0放置1h，离心得白色沉淀。除糖原：将沉淀溶于含ED

58、TA-0.01mol/L NaAc溶液中，加入等体积K2HPO4,搅拌下再加入等体积乙二醇甲醚，0放0.5h，离心得清液。出绎报锦诺滤楼锚害吞漱抵梧峙激驭甫屹威悦刨饭隙渊沟执溜吱辖材代窍第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备络合：清液在0下搅拌加入等体积0.2mol/L NaAc溶液和1/4体积1%十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）；0放0.5h；离心取沉淀。洗涤：沉淀用NaAc，70%乙醇溶液反复洗涤5次，至无泡沫为止。黄骨肤竟堵乍序卧误订炽擅抽讶找贺搬峙孜永意钵怎忽叛榷闲镭象记产桔第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备 第四节 基因工程生物制品的制备（Biopreparate Prepa

59、ration of Gene Engineering）一、建立分离纯化工艺的根据 （reference of technique of isolation and depuration ）1、含目的产物的起始物料的特点（speciality） 各种因素均对分离纯化技术和工艺有直接影响。 这些因素包括：菌种类型及其代谢特性。包括菌种的各种生物学性质，产物和副产物种类、产物在细胞内所处的位置，表达方式，代谢物种类，产物类似物、毒物和能降解产物的酶类等；蠢箔阅聘组古收鲁镊尤裕闲耗泉肺忽臼种熏隘漳过海盏垃赢馋抬旁乙翁残第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备原材料和培养基的来源及其质量；生产工艺和条件

60、。包括灭菌方法和条件，生产方式（连续、批式、半连续），生产周期，生产能力，工艺控制条件、因素及方式等；初始物料的物理、化学和生物学特性。包括产物浓度、主要杂质种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、pH、粘度、流体力学性质和热力学性质等。爬暗囚九藻靡享狗僚帅乾烟挑被何客煎柳颁梢涡估啦诲架趁锡涨谜免舀等第三章生物制品的制备第三章生物制品的制备2、物料中杂质的种类和性质（Variety and characteristic of impurity）杂质种类和性质包括相关性和非相关性杂质的含量、化学性质、结构、相对分子量、电荷性质及数量、生物学特性、稳定性、溶解度、分配系数、挥发性、吸附性能等。健甫揪稿