《卫生化学》课件7-紫外可见分光光度法1

1、第五章 紫外-可见分光光度法一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、双波长分光光度法四、导数分光光度法第四节 分光光度测定方法一、普通分光光度法1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。2.多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。A1= a1bca b1bcb A2= a2bca b2bcb 二、示差分光光度法（示差法） 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。 即提高入射

2、光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则： Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。 示差分光光度法（示差法） x s =b(cx cs ）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。 示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得相应的c值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + c 示差法标尺扩展原理：普通法： cs的T=10%；cx的T=5%示差法： cs 做参比，调T=100%则： cx的

3、T=50% ；标尺扩展10倍三、双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1和2)；以参比波长1处的吸光度A1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 A 2 A 1 （2 1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值与待测组分浓度成正比。 1和2分别表示待测组分在1和2处的摩尔吸光系数。 关键问题:关键问题是测量波长2和参比波长1的选择与组合。以两组分x和y的双波长法测定为例：设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为 x和y，则该体系的总吸光度差x+y为： x+y

4、= x + y如何选择波长1 、2有一定的要求。选择波长组合1 、2的基本要求是： 选定的波长1和2处干扰组分应具有相同吸光度，即：Ay = y2 y1 = 0故： x+y = x=(x2x1)bcx此时：测得的吸光度差只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。 可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。 在选定的两个波长1和2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。四、导数分光光度法 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析： 0 e-bc假定入射光强度0 在整个波长范围内保持恒定： dI 0 /d0则：dI/d0 bc e -bc d/d 0 bc d/d 导数分光光度法 dI/d 0 bc d/d 一阶导数信号与试样浓度呈线性关系； 测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率d/d。吸收曲线的拐点处d/d最大，故其灵敏度最高(见图）。 同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（