凯式定氮装置

1、仪器使用- 凯氏定氮装置凯氏定氮仪由蒸汽发生器、反应室、冷凝管三部分组成（见下图）。11凯氏定氮蒸馏装置示意图电炉2.蒸气发生器3.安全管4.橡皮管5.碱液室6.反应室7.加样口 8.安全管9.冷凝管10.接受瓶棒状玻塞12.夹子仪器原理：含氮有机物与浓硫酸共热，有机物中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧 化钠碱化后，释出氨，随水蒸馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验 校正。使用方法：定氮仪的构造和安装蒸汽发生器包括一个电炉（1）及一个35升容积的烧瓶（2）.蒸汽发生器借橡皮管（4）与反应室相连。反应室上 边有二个小烧杯，一个叫加样口（7）

2、上面有棒状玻塞（11）供加样用；一个叫碱液室（5）盛放液。样品和碱液 由此可直接到反应室（6）中。反应室中心有一长玻璃管，其上端通到反应室外层，下端靠近反应室的底部。反应室外壳下端底部有一开口，连有橡皮管和管夹（12），由此放出反应废液。反应所产生的氨可通过反应室 上端气液分离器（8）经冷凝管（9）通入收集瓶（10）中。反应室与冷凝管之间由橡皮管相连。样品的处理固体样品随机取一定量研磨细的样品放入恒重的称量瓶中，置于105C的烘箱中干燥4h用坩锅钳将称量瓶取 出放入干燥器内，待降至室温后称重，随后继续干燥样品，每干燥1h，称重一次，恒重即可。血清样品取人血（或猪血）放入离心管中，于冰箱中放置过

3、夜。次日离心除去血凝块，上层透明清液，即为 血清。吸出1ml血清加到50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀备用。消化取3支消化管并编号，在1、2号管中各加入精确称取的干燥样品0.51g，加催化剂6.4g，浓硫酸10ml和2 粒玻珠，在3号管中各加相同量的催化剂和硫酸（若样品是液体时，还要加与样品等体积的蒸馏水）作为对照， 用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。摇匀后，将瓶口上放一小漏斗，再把烧瓶斜置铁筐内放在通风厨内 的电炉上消化。通常消化需要13h （对于那些赖氨酸含量较高的样品需要更长的间）。直到消化液由淡黄色 变成清晰的淡蓝绿色，消化即告成功。为了保证消化彻底，再继续加0.5h。消化

4、完毕，取出消化管冷却至室 温。加入20ml蒸馏水，无损的转入100ml溶量瓶中，用蒸溜水定容至刻度，混匀，作为试样分解液。蒸馏取3个100ml锥形瓶，分别加入2%硼酸20ml，混合指示剂2滴，溶液呈紫红色，用表面皿覆盖备用。 洗涤、加样：先煮沸蒸汽发生器，器中盛有2/3体积的用几滴硫酸酸化过的蒸馏水，样品杯中也加入2 /3体积蒸馏水进行水封。关闭夹子（12）使蒸汽通过反应室中的插管进入反应室，再由冷凝管下端逸出。在 冷凝管下端放一空烧杯以承受凝集水滴。这样用蒸汽洗涤5min左右，在冷凝管下口放一个准备好的盛有硼酸- 指示剂的锥形瓶，位置倾斜，冷凝管下口应完全浸泡于液体内，继续用蒸汽洗涤12mi

5、n，观察锥形瓶中的溶 液是否基本上不变色，若不变色，则证明蒸馏器内部已洗涤干净。下移锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管口约 1cm，继续通蒸汽1min。（2）加样前先撤火，务必打开夹子（12）（这是本实验的关键，否则样品会倒抽到反应室外，准确移取试样分 解液10ml，打开样品杯的棒状玻塞，将样品放入反应室，用少量蒸溜水冲洗样品杯后也使之流入反应室，将 夹子（12）夹紧。盖上玻塞，并在样品杯中加蒸馏水进行水封。将装有硼酸-指示剂的锥形瓶放在冷凝管口下方， 打开存放碱液杯下端的夹子，放10ml 40%氢氧化钠溶液于反应室后，立即上提锥形瓶，使冷凝管下口浸没在 锥形瓶的液面下，目的是保证放出的氨全部被硼酸吸收。滴定全部蒸馏完毕后，用0.0100mol / L标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸-指示剂混合液由绿 色变回淡紫色，即为滴定终点。计算粗蛋白质=(V 2V1)XcX0.0140X6.25mXV/VX100% 式中：V2滴定试样时所需标准酸溶液体积(ml)。V1滴定空白时所需标准酸溶液体积(ml)。c盐酸标准溶 液浓度(mol/L)。m试样质量(g)。V试样分解液总体积(m