抗狂犬病血清生产简介

1、 抗狂犬病血清 生产简介 2006年5月1 抗狂犬病血清 系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、胃酶消化、纯化制得的液体或冻干免疫球蛋白制剂。 用于狂犬病的预防。 2一、免疫血浆 为获抗毒效价高的免疫血浆 ，马匹、免疫原及免疫方法是重要的条件。3（一）马匹的选择 制造抗毒素所用马匹应健壮(过幼者免疫器官发育不健全，过老者免疫机能衰退，最好是48岁)。 无传染病(包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病)和恶性肿瘤等。4 由液体石蜡与羊毛脂配成“油包水” 的不完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能最好的佐剂。（二）免疫原长期反复地给马进行免疫，在马体内将产生高效价的抗血清。

2、5(三)免疫方法 基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激，到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免疫应答阶段。 超免疫：基础免疫以后的强化免疫。6 有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会急剧上升。 对超免成功的马匹予以采血并开始再次免疫注射，如此反复的每一循环通称“1程”、“2程”超免疫。7(四)采血及血浆的分离 免疫血清效价不低于100IU/ml时即可采血。 ( 2005年版药典三部 ) 采血有 “部分采血”与“全采血”两种方式。前者指每程超免疫后由颈静脉采血l3次，每次5000m1左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死亡。8二、抗血清的精制 抗血清制造方法的

3、改进与制品质量的提高大体经历了三个历史阶段。9 最初的阶段是“原制血清”即不做加工处理，仅加防腐剂、除菌过滤。 其次是应用适宜的理化方法(主要是硫酸铵盐析法)去除血浆中的大部分非特异性蛋白(包括白蛋白、纤维蛋白等)，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所含抗毒素单位数量显著提高，称为“浓制血清”。 蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方法跨入了一个新的历史阶段。 10纯净度：含杂蛋白的程度。 提纯系数：通称R值，即精制品每g蛋白 所含单位数与原血浆每g蛋白所含单位数的比值。 收获率：精制品总单位数与原血浆总单位数的比值(%)。 前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺上予以适度调节而兼顾。 衡量

4、精制效果优劣的主要指标11质量的要求及检定 抗毒素除做预防用外还常被用于治疗，而且治疗剂量往往很大。 制造工艺比较复杂，生产周期较长，容易被污染。121安全性 主要指制品污染的杂质引起的副作用。例如细菌、热原质、类A血型物质以及其它毒性物质等， 2005年版药典三部中都有具体的检定方法并规定有最低要求标准(参阅2005年版药典三部)。132纯度及比活性 由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的改进，抗血清的纯度(免疫球蛋白的纯一性)与比活性(每g蛋白所含单位数)均有显著的提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要指标，2005年版药典三部中均有检查方法及要求标准的规定。14精制工艺改进 抗血清制造工艺的改

5、进很大的提高了临床应用于治病防病的免疫血清制品的质量。 15蛋白酶精制法 马血清抗体的分子结构与人的IgG基本相同，分子量184KD，大小427.7nm。 马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血清的球蛋白。 随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向球蛋白转移，从属于与两球蛋白之间新出现的免疫球蛋白，被称为T球蛋白或2球蛋白(此时原球蛋白称作1球蛋白)。 16 抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。30一50饱和沉淀物几乎全是2 (T)球蛋白部分。此部分经胃酶处理后，又在2与之间出现一个新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新峰乃被提纯成精制抗血清。17 经胃酶处理，IgG分子在重链间的二硫键的c端侧被切断。切下的Fc片段无抗毒活性，不耐热，经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球蛋白抗毒素，分子量98KD，分子大小4.113.6nm，电泳位置在2与两球蛋白之间。1819层析技术抗血清纯度提高 从 50%-60% 提高到80%以上。 比活性 从 10000 IU/g以上。20抗狂犬病血清工艺流程 免疫血浆 马匹检疫、免疫、基免、超免、 采血、血浆分离 血浆精制 去除杂蛋白 胃酶消化 切去Fc端 第一次沉淀