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文档简介

1、起草人：起草日期：部门主管：审阅日期：QA：审阅日期：机构：批准日期：1目的规范采用三明治 ELISA 方法去定量 IgG 的操作流程。职责22.12.2规范相关实验操作；保证相关的安全和规范；3使用范围此方法适用于本部门的 IgG 定量分析实验。内容/流程44.14.2将所有试剂放到室温条件下；准备试剂：国产平板；稀释羊抗人 K 链抗体到 2ug/ml；稀释试剂：10mM sodium每孔吸取 100ul；osate, 150 mM NaCl,7.8；在 4 C 或 37 C 条件下孵育 2hrs。孵育结束后，将平板倒置，轻拍去掉多余的液体（无需润洗）准备试剂：国产平板；稀释羊抗人 K 链抗

2、体到 2ug/ml。封闭：准备 5% BSA 溶于 PBS (22 ml 每板)；每孔用 200 ul 的封闭液覆盖；室温条件下震荡封闭至少 1 小时 ；孵育结束后，将平板倒置，轻拍去掉多余的液体（无需润洗）。标准曲线的制定：稀释标准人 IgG 到 250ng/ml；用 PBS 连续按照 1：2 稀释(200l Std + 200l PBS for each serial dilution)。准备样品（溶于 PBS）：依据效价对样品做 3-5 次的稀释；每空吸取 100ul 标样和样品；室温条件下震荡封闭至少 1 小时；平板用 PBST 润洗 3 次（ 250ul/次）。检测抗体的准备：将 HRP 交联羊抗人 IgG 按 1:10000 稀释；每空吸取 100ul 稀释后的抗体；室温条件下震荡封闭至少 1 小时；平板用 PBST 润洗 3 次（ 250ul/次）；加 50ul 的 TMB 底物 A ；加 50ulof TMB 底物 B and 孵育 5 到 10 min；4.34.44.54.64.7加 50ul 终止液；在 450 nm 条件下检测 ；5表格5.1无6参考文献6.1附件7.1无7无

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