石蜡包埋技术要点总结

1、组织石蜡包埋和切片技术在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片，用、火棉胶、炭蜡、明胶等作；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。 1程序（一）材料的采集与分割 采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固定）。为使固定液能迅速的渗透材料，材料

2、要进行分割。分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。2（二）杀死与固定 利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。（三）脱水 脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。脱水采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。3（四）透明 透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因为究竟不能

3、溶解石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯。4（五）浸蜡 浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。 5（六）包埋（埋蜡、沉床） 材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后将材料和石蜡一起倒入提前叠好的包埋模具中，用加热的镊子迅速将材料按一定的间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热的镊子赶走材料周围的气泡，待模具表面的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石蜡迅速凝固。最后从模具中取出蜡块，以便保存。注意将样品编号

4、封于蜡块上，以免样品混淆。6（八）切片 用切片机（如旋转切片机）将蜡块切成连续的蜡带。切片时先把切片刀夹在刀架上，再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切刀的角度，刀口运行方向与材料切面平行），然后调整好所需厚度，一般可在714微米，视材料和所需观察对象而定，转动切片机切片。7具体流程1 脱水：多聚甲醛中取出组织，流水冲洗数分钟70% 乙醇（2h,可延长过夜）85%乙醇(2h) 95%乙醇 (1h)95%乙醇(1h) 无水乙醇 (30min)无水乙醇 (30min)。注：1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右） 2脱水的体积至少为组织体积的5倍 3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬 4 最好能搅拌，使脱水充分。82 透明：二甲苯 二甲苯 ，每步15min.注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。3 渗透：石蜡 (15-20min)石蜡 (20-30min)石蜡(包埋),62。94 包埋：将组织放入盛有石蜡