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实验三、植物NR活力测定体内法目的:掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法,明确诱导酶含义。原理:植物细胞NO3NO3NO2NADH2 NADNO2外界溶液1原理:NO2+磺胺+ 萘基乙烯二胺红色化合物540nm最大吸收峰测定OD2材料:在15-25 蒸馏水培养一周小麦苗,实验前一天分两组,一组加KNO3,一组加NH4Cl,在白天置光照下处理。方法:取各组苗地上部0.5g,切成合适长度,放入烧杯中,用玻璃压住材料,加酶促反应液15ml,真空泵抽气10min,加盖后置恒温箱30 20min,取出后立即去除材料。取4ml反应过的液体,加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml,室温放置15min后测540nm OD.显色、比色测定NR活力。同时作空白:4mlH2O +磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml 室温放置15min测540nm OD.3制作NO 2标准曲线。结果计算:NR活力(NO2生成nmol/g鲜重.h)=根据OD值从标准曲线上查得的NO2(nmol) 3 15/4/(?)结果分析和讨论:1、比较KNO3诱导和加NH4Cl的NR活力大小,诱导时如用NaNO3 替代KNO3结果会如何,为什么?如不进行光照,结果会怎么样,为什么?42、亚硝酸是过多施用氮肥后蔬菜中积累的致
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