蛋公鸡人工感染艾美耳球虫病模型的建立(共6页)

1、蛋公鸡人工感染(gnrn)艾美耳球虫病模型的建立 王丽荣，陈雷(chn li)，秦波，林显华，谷巍（山东宝来利来生物工程股份(gfn)有限公司，山东泰安，271000）摘要：为建立人工模拟自然感染途径诱发蛋公鸡艾美耳球虫病病理模型，本试验对14日龄蛋公鸡人工接种不同量的柔嫩艾美耳球虫卵囊，使其感染发病。攻毒后每日观察鸡只精神、食欲、粪便变化及死亡情况，并对死亡鸡随时进行剖检记录，观察病变，进行粪便记分、病变计分，并计算病变值、克粪便卵囊数和卵囊值。结果表明：攻虫量为3104个/只时，鸡只感染球虫病最明显，主要病理变化为排稀粪带血丝或血块，或排血样稀粪。临床症状与卵囊值均与自然感染基本一致，可以

2、用作蛋公鸡艾美耳球虫病病理模型。关键词：柔嫩艾美耳球虫；人工发病；感染模型；病理变化；攻毒途径前言鸡艾美耳球虫病是由孢子虫纲(Sporzoa)真球虫目(Eucoccida)艾美耳科(Eimeriidae)艾美耳属(Eimeria)的原虫在鸡肠道上皮细胞内寄生而引起的一种原虫病。柔嫩艾美耳球虫寄生于盲肠，其卵囊大小为 2219，裂殖体很大，直径可达54，第一代裂殖体包含的裂殖子可达900个，第二代为350个，孢子化时间为18，潜隐期为138。雏鸡感染球虫后，大量肠上皮细胞受损出血，甚至死亡。鸡球虫病现已成为现代养鸡业中最常见的疾病之一1，此病主要危害3月龄内的雏鸡，以1550日龄的雏鸡发病率最高

3、，死亡率可达80%以上。随着规模化、集约化养鸡业的高速发展，鸡球虫病对养鸡业的危害越来越严重，据资料显示，美国一年的损失可达45亿美元2，我国每年因该病的损失也高达618亿元3。鸡球虫病对养鸡业危害十分严重，在过去几十年中，各国对鸡球虫病的研究不断深入，目前，对鸡球虫病的防治主要采用药物防治和疫苗预防两种方法。由于疫苗防治还不够成熟，存在某些安全隐患及成本过高，所以药物预防仍为主要的预防手段，随着抗药性的产生，长期高剂量用药现象严重，导致大量耐药虫株的出现4-5，而研制新药费用不断提高，以及药物残留等问题的存在，驱使人们探寻更经济可靠的途径来防治鸡球虫病6。本研究旨在建立蛋公鸡人工感染艾美耳球

4、虫病的模型，并对其病理变化进行观察，为鸡球虫病的药物防治研究提供理论依据，对我国养鸡业的健康可持续发展具有十分重要的意义。1 材料(cilio)与方法收稿日期(rq)作者简介王丽荣(1985-），女，汉，硕士(shush)研究生，山东莱阳人，主要研究方向：禽病学、中药发酵。1.1 实验动物及饲料选用1日龄海兰褐健康蛋公鸡雏鸡300只，购于本市某种鸡场。饲料按雏鸡饲料配方配制，不含任何饲料添加剂及抗球虫药物。基础日粮组成见表1。表1 510基础日粮配方及营养水平日粮组成 百分比（）营养水平百分比（）玉米56.6代谢能 ME（MJ.kg-1）12.06豆粕36.0粗蛋白(%)21.6豆油3.0钙

5、(%)0.98磷酸氢钙1.8总磷 (%)0.68石粉1.3有效磷 (%)0.49食盐0.3蛋氨酸 (%)0.47预混料1.0蛋胱氨酸 (%)0.78合计100赖氨酸(%)1.151.2 毒株 柔嫩艾美尔球虫纯种卵囊，由山东农业大学预防兽医教研室惠赠，并由山东宝来利来生物股份有限公司生物研究院保存，经29恒温孵育培养48h，当有90%以上的卵囊完成孢子化时停止培养。1.3 实验方法1.3.1 试验分组鸡只所用饲料、饮水器、料盘等均在80干燥箱中烘烤0.5h以上，以确保外界环境无球虫。在感染前对雏鸡进行检查及分组，并进行粪便检查挑选个体大小基本一致且无球虫感染的8日龄雏鸡，将雏鸡分成5组，分别为A

6、组，B组，C组，D组和E组（阴性对照组）。每组为20只，分别设立三个平行组。A组，B组，C组，D组分别接种0.5104个/只，1104个/只，3104个/只，5104个/只球虫卵囊，E组为对照组。感染方法为口服接种孢子化卵囊，感染后第8d剖杀全部雏鸡，取盲肠分离柔嫩艾美耳球虫虫卵。实验分组及球虫卵囊的接种量见表2。表2 510 实验(shyn)分组及球虫卵囊的接种量分组及只数处理方法接种量（个/只）A20口服孢子化卵囊0.5104B20口服孢子化卵囊1104C20口服孢子化卵囊3104D20口服孢子化卵囊5104E20口服蒸馏水01.3.2 接种(jizhng)后排卵囊情况与病理观察感染卵囊后

7、逐日观察(gunch)并记录各组鸡的精神、食欲、粪便变化和死亡情况，并对死亡鸡随时进行剖检及实验室检查。试验结束称重后，各组鸡全部扑杀，观察内脏病变，摘取盲肠，刮取粪便检查球虫卵囊数，冲洗盲肠，检查病变情况，记录病变和病变值。1.3.3 判定标准临床症状：凡表现精神萎靡，羽毛蓬乱，双目闭合，食欲不佳，嗉囊有积食，排稀粪带血丝或血块，甚或排血样稀粪则初步判定为球虫病鸡。尸体剖检及实验室检查：凡见肠道外观呈棕红色或暗红色，肠管肿胀，肠壁增厚且呈炎症表现，内容物稀软混有血液或血凝块或干酪样夹杂血液的坏死物质，经取肠内容物抹片镜检，发现球虫卵囊值达到20，则判定为鸡球虫病1。研究报道，人工感染球虫卵囊

8、后鸡只死亡率达到10%-20%，所建立的球虫病模型较理想，适合用于科研研究。1.3.4 数据处理 粪便记分：0分，正常；1分，有少量血便；2分，中等量血便；3分，有许多血便；4分，无正常粪便。病变记分和病变值：0分，肠道中无眼观异常；1分，肠道充血或增厚；2分，肠道增厚，有少量出血和渗出；3分，肠道弥漫性出血；4分，肠道严重出血或有肠芯。病变值=每组鸡肠道平均(pngjn)病变记分10克粪便卵囊数(O.P.G)：每组鸡的粪便，充分搅匀后称取1 g加水10 mL，充分混匀后用血球(xuqi)计数板计数，参照角田清方法计算卵囊数。卵囊值：当卵囊比数(b sh)为0%1%时，卵囊值为0；2%25%时

9、为5；26%50%时为10；51%75%时为20；76%100%时为40。2 结果与分析2.1 临床症状感染球虫孢子化卵囊后第5 d，A、B、C、D组均不同程度出现血便，鸡只表现为精神萎靡、食欲减退、羽毛松乱、翅膀下垂，缩颈闭眼等症状，而E组粪便正常，无血便，鸡只采食正常，精神状态良好。第6 d、7d，除E组粪便正常外，各组都出现血便。说明A、B、C、D组均感染了艾美耳球虫病。 血便计分血便计分是一个评判球虫病发生及发病程度的指标，由表3可知，阴性对照组E组，血便值为0，而A、B组血便值较低，D组较高，只有C组血便值居中。表3 血便值组别5 d6 d7 d平均血便计分A0100.333B011

10、0.666C1211.333D2322.333E0000注：表中数字表示每d每羽血便计分2.3 相对增重率、死亡率、病变值和卵囊值 由表4可以看出，C组的死亡率在10%-20%之间，且相对增重率、病变值、卵囊值均介于A、B、D组之间，阴性对照组E组为正常。说明，C组更适合作为球虫模型。表4 评定(pngdng)结果组别相对增重率%死亡率%病变值卵囊值A90.1095B85.43.332510C79.511.61720D56.223.332340E100.00003 讨论(toln)鸡球虫病是养禽业中重要的常见的一种疾病，它对养鸡生产的危害(wihi)十分严重，在生产实践中，球虫病流行的鸡群生长

11、严重滞后，它不仅引起雏鸡的大批死亡（盲肠球虫死亡率超过80%），而且明显降低鸡只生产性能（如鸡肉品质、死淘率、增重率、饲料报酬等），造成重大经济损失，严重危害养禽业发展。鸡球虫寄生于肠道上皮细胞，在肠道内繁殖，破坏肠粘膜的完整性，引发粘膜上皮细胞崩解，使肠道内离子和渗透压失去平衡，营养物质不能吸收，且大量出血，由于肠道黏膜遭到破坏，造成黏膜免疫抑制，成为免疫失败的一大因素，而且随之诱发其他疾病，如大肠杆菌病、支原体病等，成鸡多为带虫者，临床症状往往不明显，但是增重和产蛋会受到一定影响。临床上发病鸡表现为精神沉郁、下痢、贫血等症状，甚至死亡7。自上世纪40年代磺胺类药物用于养鸡生产以来，已先后有

12、30多种药物投入临床应用，给现代养鸡业带来空前的发展，然而，随着药物的广范应用，球虫抗药性问题日趋普遍和严重。多药抗性或交叉抗药性的产生大大缩短了药物的商业使用年限。鸡球虫病的药物防治及免疫将是未来防治该病的发展趋势，各国学者开始把研究重点转向中草药8、复方中草药9、中西药结合10及疫苗等方向，而鸡球虫病模型的建立则为研究鸡球虫病提供有利基础。 本研究通过对蛋公鸡人工感染艾美耳球虫致使发病，并对其死亡率等指标进行对比试验，从而得到适合用来临床试验用的蛋公鸡人工感染艾美耳球虫病的体内模型，为鸡球虫病的进一步研究提供了便利，对我国养鸡业的健康可持续发展具有十分重要的意义。参考文献1 索勋,李国清.

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