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文档简介

1、实验六 胰蛋白酶活力的测定(先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度)一、实验目的二、实验原理 三、实验用品四、实验步骤五、实验内容六、实验报告1一、实验目的掌握蛋白酶活力测定的原理与基本方法。了解紫外分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法2二、实验原理1蛋白酶是一种水解酶，它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。2用紫外分光光度计可以定量的比较颜色的深浅，从而推导出酪氨酸的量，根据生成物的含量可以计算蛋白酶的活力。3.蛋白酶活力单位定义：在40C，pH11的条件下，每ml水解液分解产生的酪氨酸的量。3三、器材仪器和主要试剂 紫外分光光度计 0.5% 酪蛋白 100 g/mL Tyr 溶液 4四、

2、实验操作1、酪氨酸标准曲线的制作以酪氨酸浓度g/ml数为横坐标， A275nm为纵坐标，作出标准曲线。 52、蛋白酶活力的测定管号酶液（ml）酪蛋白（ml）三氯醋酸（ml）40水浴准确保温10分钟三氯醋酸（ml）酪蛋白（ml）40水浴保温10分钟，过滤得滤液 1号(样品)12-3-2号(对照)1-3-26酶活力单位定义：规定在 40 ， pH11 的条件下，水解酪蛋白每分钟1 ml水解液产生酪氨酸的量： K （ A 样 A 对 ） N /（t V）1. K ：标准曲线上光吸收为 1 时的酪氨酸微克数； A 样 ：样品液光吸收值； 2. A 对 ：对照液光吸收值； 3. N ：本次实验酶液的稀释倍数，54. t ：酶促反应的时间（分），本实验 t =10 ； 5. V ：酶促反应管的总体积（毫升数），本实验 V =5 ； 7五、思考题酶的试验为何设对照又要设空白

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