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1、T4DNALigase使用说明书TaKaRaCode：D2011A包装：T4DNALigase(350U/pl)25,000Units10XT4DNALigaseBuffer1ml保存：-209制品说明本酶催化相邻DNA链的5-P末端和3-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶。本酶不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。酶贮存溶液Tris-HCl(pH7.5)10mMKCl50mMDTT1mMEDTA0.1mMGlycerol50%起源：Escherichiacolicarryingtheplasmidthatena

2、blehighlyexpressionofT4DNALigasegene。活性定义在20卩1的连接反应体系中，6pg的入DNA-HindIII的分解物在16C下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。本酶的1U相当于ATP-PPi交换反应中0.008WeissUnit。纯度2,000U的本酶和1pg的入-HindIII片段在37C下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。2,000U的本酶和1pg的SupercoiledpBR322DNA在37C下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。2,000U的本酶和1pg的16S，23SrRNA在37C下

3、反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。用途DNA片段和载体DNA的连接。DNA片段和Linker或AdaptorDNA的连接。使用注意连接反应因末端碱基顺序的不同而反应速度各异，一般有下列倾向突出末端：HindIIIPstIEcoRIBamHISalI平滑末端：HaeIIIAluIHincIISmaIEcoRVScaIPvuIINruI其中连接HindIII末端的速度约为连接SalI末端速度的1040倍;而连接HaeIII末端的速度约为连接SmaI末端速度的510倍。添附Buffer组成(保存：-20C)10XT4DNALigaseBufferTris-HCl(pH7.6)660mMMgC

4、l266mMDTT100mMATP1mM*Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请于37C保温溶解后使用。使用例DNA片段和载体DNA的连接1.在微量离心管中制备下列连接反应液。10XT4DNALigaseBuffer2.5p!DNA片段*约0.3pmol载体DNA*约0.03pmolT4DNALigase1pldH2Oupto25pl*DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的310倍。*平滑末端的载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。169过夜反应。加入2.5pl(1/10量)的3MCH3COONa(pH5.2)。加入62.5pl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-209放置3060分钟。离

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