金盏菊快繁体系的初步探讨

1、. .5/7园林职30801 20号长江大学毕业论文开题报告题目名称 金盏菊快繁体系的初步研究 院（系） 园艺园林学院专业班级 园林职30801班学生姓名 明涛指导教师 周明芹开题报告日期2011-11-5金盏菊快繁体系的初步研究学生：明涛，园艺园林学院指导教师：周明芹，园艺园林学院1 题目来源来源于教师指定的科研项目。2 研究的目的与意义金盏菊又名金盏花，为菊科金盏菊属植物，是早春园林和城市中最常见的草本花卉，其广泛用于家庭小花园和盆栽观赏，在城市街旁的栽植槽和零星墙角花坛中，金盏菊是早春主角之一1。它是地中海地区的本土植物，在欧洲和北美地区作为装饰和医药植物而广泛种植2。从12世纪起人们就

2、已经将它作为外敷药来治愈伤口3，除了具有观赏价值和药用价值外，还可以用来提取香精，在化汝品制造行业有着不可低估的作用，因此大力推广种植金盏菊，可带来可观的经济效益4。随着市场需求的日益增大，传统的繁殖方法和品种选育技术已经不能满足市场日益发展的需要，通过使用现代生物技术手段来进行金盏菊的快速繁殖将是势在必行5。植物快繁技术是利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖方法，是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以与原生质体培养在人工控制的培养基上， 给予适当的培养条件，使其快速生长形成完整的植株6。植物快繁技术是依据植物细胞“全能性”与植物的“再生能力”发展起来的一项新技术7。它的研究始于二

3、十世纪初，尽管历史不长，但八十年来的发展很快，至今在农业 、园林方面都已成为占有重要地位的技术8。是农业高新技术中最重要、最活跃的领域之一，它不仅是农业持续发展的基础，而且是生物技术中应用最广、最具现实意义的领域，被誉为农业发展史上的第4次绿色革命9。传统的无性繁殖方法常因气候、季节和土地等环境限制，费工费时，繁殖系数低，生长周期长，对于一些难以生根、短时无法大量繁殖的名贵品种和母株来源不足的品种，更不能与时满足生产和市场的需要10。利用植物快繁技术不仅确保优良性状不丢失，也能解决用分株的无性繁殖方法周期长和市场供应与需求的矛盾11。目前，国对金盏菊组织培养的研究并不多，Anna Grzela

4、k和Wirginia Janiszowska利用金盏菊种子和生长部分进行悬浮培养，发现最适合愈伤组织生长的培养基配方2，4-D 0.4mg/L +KT 0.4mg/L或2，4-D 0.1 mg/L +2IP（6-BA）0.5mg/L。Scocu等人利用金盏菊的子叶下轴子叶和子叶节点等部分进行生根和快繁得到新的植株12，但他们都没有运用金盏菊茎段进行快繁。国学者嘉宝用金盏菊叶片组织培养获得新植株1314，他也没有运用金盏菊茎段进行快繁，梅秀等人利用金盏花茎段快繁得出金盏菊培养适宜的培养基是MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.2mg/L1317，但他并没有对金盏菊培养基进行比较，而是用这个培养

5、基直接进行诱芽和生根。本次试验以金盏菊带芽茎段为外植体，研究茎段的消毒方法以与拟以MS为基本培养基，通过设置系列6-BA与NAA的浓度组合，筛选出诱导产生丛生芽的经济有效的培养基配方，旨在为菊花苗的工厂化生产提供更可靠的技术依据，对满足市场需求，取得更大的经济效益，具有重要的现实意义。3 阅读的主要参考文献与资料名称1包满珠. 花卉学J.2011.01:1911932孟淑娥，胡海威，车力华，庚义. 一二年生草花使用育苗技术. 2006.113立磊，保印，郭巧玲，樊亚. 彩叶植物金叶绣线菊组织培养研究. 2005.014余树勋，吴应祥. 花卉词典M.:农业，1993，3125Corr，B.E.Z

6、antedeschia research in the United States:past，present and future.Acta Hort.1990，337: 1771896周 涤，吴丽芳. 马蹄莲研究进展J. 园艺园林科技2006，(9)：2842907受金. 球根花卉在园林中的应用J. 现代园艺2006，(1):21238田英翠，柳青球根花卉在园林绿化中的应J农业科学，2006，34(22)：585359459嘉宝，建华，建伟. 金盏菊叶片组织培养再生植株. 1994.0510王伯初，万钱，段传人. 紫锥菊的组织培养与其实用快速繁殖. 2005.0511 Shams H.C S

7、ingh SK，Goswami AM，eI a1Plant tissue culture andbioteehnofogy：emerging trendsCProceedings ofasymposiumheld at hyderbab，29-31Januaryl9971999：15115512王爱勤，何龙飞，王彦红，周琼，黎桦. 马蹄莲块茎试管培养研究J. 农业科学，1998（2 ），92 9313 英，德祥， 樊广俭.激素在菊花组织培养中应用的研究初报J.职技师院学报:1987，15(1)，242814Roche T，D Long RD，Sayegh AJCommercialscale p

8、hotoautotrophie micropropagations in irish agriculture，horticulture andforesJActaHort，1996，44(1)：51552015LeffrtC WaltesWMCamottaHetalLaetobaeiUusp antamm：adeleterious contamination ofplanttissue culture JJoumal ofApplied Bacteriology，198967(l)：3633701416天琪，荣旗，王玉忠，王华芳. 细胞分裂素诱导彩色马蹄莲试管微型种球. 林业大学学报，2005

9、， 717黄作喜，熊丽，伟，树发，吴学尉.生长调节剂促进3种球根花卉开花的研究J.西南林学院学报，2002.22(1):131518恩青，云. 城市花坛周年布置的花卉品种筛选与茬口模式研究. 2011.0719俊杰，袁艺，王小娟，何兵. 洋甘菊组织培养与植株再生. 2009.1220林贵美， 小泉，韦华芳，朝生，进忠，牟海飞. 栝楼组织培养与快繁研究. 2011.0221雷亚灵，周岐. 八仙花茎段组织培养技术研究. 2008.0422玉萍，莉莉，王春彦，罗凤霞. 风信子组织培养研究进展. 2009.0523向太和. 菊花组织培养植株再生与其后代的变异. 2006.0124鸿有，义荣，翁玉辉，华

10、家平，君佩. 菊花快速繁殖组培技术的研究. 1998.034 国外现状和发展趋势与研究的主攻方向4.1 国外现状和发展趋势菊科， HYPERLINK :/baike.baidu /view/8637.htm t _blank 双子叶植物纲，是双子叶植物中种类最多的一个科，约有1100属，2000025000种，广泛分布在全世界，但 HYPERLINK :/baike.baidu /view/43791.htm t _blank 热带地区较少，其中中国约有220属近3000种。金盏菊原产 HYPERLINK :/baike.baidu /view/3622.htm t _blank 欧洲南部，现

11、世界各地都有栽培。 HYPERLINK :/baike.baidu /view/3565.htm t _blank 英国的汤普森摩根公司和以色列的丹 HYPERLINK :/baike.baidu /view/1615585.htm t _blank 齐杰花卉公司在金盏菊的育种和生产方面闻名于欧洲18。近年来金盏菊花卉在世界围售量呈现快速增长的势头。近十多年国外金盏菊研究活跃，特别是新西兰和美国，在育种、栽培、开花调节方面做了大量工作。目前世界上主要的金盏菊生产国是美国、新西兰、荷兰。由于研究时间不长，科研投入有限等原因，中国马金盏菊花卉相关研究滞后。所以，我们应加大该领域研究的投入和多学科的

12、合作，进行不懈的研究探索，缩小与世界先进国家的差距，这对金盏菊花卉真正实现国产化，摆脱对国外金盏菊花卉生产的依赖，具有重大意义19-20。4.2 研究的主攻方向在进行组培实验时，最主要因素之一就是要配制一种适合外植体生长的培养基，首先选用一种已被广泛采用的基本培养基(如MS或B5培养基)开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足植物生长需要的新培养基。要严格按照培养基配方中的各成分比例与排列次序进行配置，并用高压灭菌锅对其进行灭菌21。注意植物生长调节物质的种类和浓度对外植体的分化和增殖起到重要的作用，不同的植物种类对其浓度要有差别的，在实验中

13、要对其做进一步的改良和探讨22-24。5 主要研究容、需重点研究的关键问题与解决思路5.1 主要研究容不论是消毒方法还是植物生长调节剂都是植物生长得关键因素，本次试验以金盏菊带芽茎段为外植体，研究茎段的消毒方法以与拟以MS为基本培养基，通过设置系列6-BA与NAA的浓度组合，筛选出诱导产生丛生芽的经济有效的培养基配方，旨在为菊花苗的工厂化生产提供更可靠的技术依据，从而确定最适合金盏菊茎段快速繁殖的培养基配方。5.2 需重点研究的关键问题（1）外植体的消毒时间。（2）不同浓度的激素组合。5.3 解决思路5.3.1查阅文献到图书馆、电子阅览室查阅相关的文献资料以与向导师请教、与同学讨论等，以此来充

14、实部分理论知识。5.3.2试验方法（1）实验材料的处理选取金盏菊生长旺盛的嫩枝，除去叶片，剪成带 2个饱满芽的 1.5cm左右的茎段，放入大烧杯中，加入洗衣粉洗净，清洗 20 min，再在流水中冲洗干冲洗2 h，接着在超净工作台上，先用 75%的酒精处理30秒，无菌水冲洗2-3次，接着用 0.1%的升汞分别处理 6min、8min、10min，无菌水冲洗3-4次，用无菌滤纸吸干外植体上的水分，分别接种于 MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0. 5 mg/L的培养基上，每个处理 10 个外植体，重复 3 次。然后将其放于培养室进行培养，7天后统计污染率，萌芽率。（2）初代培养试验

15、采用双因素设计，以 MS 为基本培养基，附加A因素（6-BA）三个水平浓度A1(1.0 mg/L)、A2(2.0 mg/L)、A3 (3.0mg/L)，B因素（NAA）两个水平浓度分别为B2(0.5mg/L) 、B3 (1.0mg/L)，共 6个处理组合。用最佳消毒方案处理后的带芽茎段分别接种到6个处理组合中：（1）MS+ 6-BA1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L；（2）MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L；（3）MS+ 6-BA 2.0mg/L+ NAA 0.5 mg/L；（4）MS+ 6-BA2.0 mg/L+ NAA1.0 mg/L；（5）MS+ 6

16、-BA 3.0 mg/L+ NAA 0.5mg/L；（6）MS+ 6-BA 3.0mg/L+ NAA 1.0mg/L。每瓶接1个外植体，每个组合处理10瓶，重复3次，生长30 d。调查萌芽率和腋芽增殖数，筛选适合做增殖培养的培养基。（3）继代增殖培养利用初代培养中增殖效果比较好的培养基进行进一步继代增殖培养，培养20 d后观察腋芽和不定芽发生状况。（4） 生根培养 在继代丛生芽中选取生长良好，长度在2cm以上的嫩枝，切去基部愈伤，将其接入以1/2MS为基本培养基，同时分别附加IBA 0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L三个浓度，或NAA 0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.

17、0 mg/L三个浓度的培养基中进行培养诱导生根。培养30d后统计生根率和根长。（5）生根苗的驯化、移栽将生根苗进行驯化后，移栽到穴盘中。5.3.3 数据观测与统计分析 自接种当天起记录下原始数据，包括茎段株高、芽点数、芽的生长状况等。15天后开始每隔三天做一次相关记录，且保证接种期间注意观察污染情况并记录污染数量，50天后分析数据，统计污染率，腋芽增殖倍数等试验数据采用Excel2003软件进行分析：污染率(%)：污染的外植体数/外植体总数100%；萌芽率(%)：腋芽萌发外植体数/外植体总数100%；增殖倍数=芽增殖数目/接种芽个数； 5.3.4 撰写毕业论文。6 完成毕业论文所必须具备的工作条件与解决的方法6. 1 实验环境在干净、无菌的接种室的超净工作台上接种，在恒温（251）、光照强度和光照时间恒定的培养室进行植株的培养，最后在温室或大棚里进行组培苗的移栽。6.2 实验条件 干净、无菌、整洁、恒温（251）、光强1 500 Lx，每天光照12 h。长江大学园艺园林学院植物组织培养实验室已俱备所有条件。6. 3 实验药品 葡萄糖、