免疫沉淀类实验-实验一水质的微生物检测ppt课件

1、免疫沉淀类实验南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心.教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：6学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人.实验目的与要求掌握单向琼脂分散实验、双向琼脂分散实验、对流免疫电泳的原理、结果分析及运用； 熟习火箭免疫电泳、免疫电泳的原理及运用。 .实验内容单向琼脂分散实验双向琼脂分散实验对流免疫电泳示教：火箭免疫电泳免疫电泳.一、单向琼脂分散实验.实验原理： 将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板，打孔，在孔中参与一定量的待测抗原，抗原向周围呈辐射状分散，与抗体相遇，在比例适宜时构成白色沉淀环沉淀环直径的大小与抗原含量成正比，可从用不同浓度规范抗原制

2、成的规范曲线上，查出待检样品中抗原的含量。 一、单向琼脂分散实验.试剂与器材商品IgG、IgM、IgA单向琼脂分散板；37恒温箱、湿盒、可调微量加样器等；待检血清。方法分别取商品IgG、IgM、IgA单向琼脂分散板1块，按阐明书操作。用微量加样器分别准确汲取不同稀释度待测血清10mL加于孔内。将琼脂板放入湿盒中，置于37恒温箱分散24小时。一、单向琼脂分散实验.本卷须知：加样量一定要准确，并且不同逸出孔外，否那么结果不好察看；实践检测过程中，规范曲线必需与样品测定同时制备。一、单向琼脂分散实验 结果察看分别量取各孔样品沉淀环的直径，从相应阐明书提供的参考规范曲线，计算待检血清中各种免疫球蛋白的

3、含量。.二、双向琼脂分散实验. 实验原理：在含有电解质的琼脂中，抗原抗体分子相互弥漫分散，当比例适宜时可出现肉眼可见的白色沉淀线。沉淀线的外形、位置，与抗原的浓度、分散速度相关。 二、双向琼脂分散实验.试剂与器材含15g/L生理盐水的琼脂糖待检血清、抗人血清载玻片、湿盒、吸管、打孔器、37恒温箱、可调微量加样器等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理盐水的琼脂糖，于一干净的载 玻片；打孔：待琼脂板凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，每孔之间的间隔约4 5mm，根据需求，可打成呈梅花状、三角状的孔；加样：用可调微量加样器根据需求在不同孔内参与待检血清和抗人血清10mL；分散：将琼脂糖

4、凝胶板放湿盒中，置37温箱中24h后，取出察看结果。二、双向琼脂分散实验.本卷须知：加样量一定要准确，并且不同逸出孔外，否那么结果不好察看；制板时，玻片要清洁，边缘要整齐，加琼脂糖时要防止产生气泡；打孔时留意防止产生裂痕或将琼脂与玻片脱离。二、双向琼脂分散实验结果察看：沉淀线的位置、数目与外形等。图4 抗原特异性与沉淀线外形的关系a、b：抗体 A、A、B：抗原A、B完全不同 A、A部分一样.三、对流免疫电泳建立在双向琼脂分散实验的根底上，经过电流，使蛋白质抗原、抗体在电场中作定向加速度双分散，从而加速沉淀的构成。 . 实验原理：在一定的离子强度、pH8.4以上的缓冲液中，大多数抗原解离带负电，

5、在电场中向阳极挪动，而抗体大部分是IgG，其等电点与环境中的pH接近，很少解离。另外，由于分子量大，加上电渗作用缓慢向阴极挪动，在短时间内，在两孔之间或抗体另一侧构成沉淀线。 三、对流免疫电泳.试剂与器材1.5%巴比妥缓冲液琼脂糖 待检血清、抗人血清 0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液 载玻片、吸管、打孔器、可调微量加样器、电泳仪、电泳槽等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理盐水的琼脂糖，于一干净 的载玻片；打孔：待琼脂板凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，每孔之间的间隔约 45mm，根据需求，可打成呈梅花状、三角状的孔；加样：在孔中相向参与10mL抗原和抗体 ；电泳：将

6、抗原置于阴极侧，抗体置于阴极侧， 以4V/cm电压电泳30min1h。 三、对流免疫电泳.结果察看：封锁电源，翻开电泳槽，察看沉淀线的位置、数目与外形等。本卷须知：加样量一定要准确，并且不同逸出孔外，否那么结果不好察看；制板时，玻片要清洁，边缘要整齐，加琼脂糖时要防止产生气泡；孔距约0.5cm左右，太远看不到实验景象。三、对流免疫电泳.示 教火箭免疫电泳 将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板，冷凝后，在琼脂板的一端打一排小孔，分别参与一定量的待测样品进展电泳。抗原在电泳过程中，与抗体相遇，在比例适宜时可构成锥形沉淀峰，其外形如火箭，故名火箭电泳。火箭峰的高度与抗原含量成正比，以峰高为纵坐标，知的抗原浓度为横坐标，绘制规范曲线图，就可知待检样品中抗原的含量。.示 教免疫电泳： 免疫电泳技术是利用蛋白质分子量以及其所带电荷的不同，在电场作用下，