酸性药物在微乳液相色谱体系中的保留行为

1、酸性药物在微乳液相色谱体系中的保存举动【摘要】以酸性药物萘普生、布洛芬、双氯芬酸、苯丙氨酸和2，4-二氯苯氧基乙酸为研究工具，探究了酸性药物在微乳液相色谱体系中保存机理，创立了酸性药物的容量因子(k)与外貌活性剂浓度、助外貌活性剂浓度、亲脂性有机溶剂浓度以及活动相ph值之间的相干模子。效果表白，外貌活性剂、助外貌活性剂和亲脂性有机溶剂的浓度以及活动相ph值的变革对酸性药物的容量因子的影响完全与理论模子相符合。所创立的保存模子能较好地反响在微乳液相色谱体系中微乳液构成和ph值对酸性药物保存举动的影响。【关键词】微乳液相色谱；保存模子；保存举动；萘普生；布洛芬；双氯芬酸；苯丙氨酸；2，4-二氯苯氧

2、基乙酸retentinbehavirfaiddrugsinireulsinliquidhratgraphyshijie-hua*，liting，zhuxia-hui(llegefpharaeutialsienes，statekeylabratrybreedingbasefgreenheistrysynthesistehnlgy，zhejianguniversityftehnlgy，hangzhu310032)abstrattheretentinehanisfaiddrugssuhasnaprxen，ibuprfen，dilfena，phenylalanineand2，4-dihlrphenxy

3、aetiaidinireulsinliquidhratgraphyhasbeendisussed.theretentindelingbeteenapaityfatrs(k)faiddrugsinireulsinliquidhratgraphyandnentratinfsurfatant，surfatantandlipphilirganislventandphvalueasset.theresultsshedtheeffetfhangefnentratinfsurfatant，surfatantandlipphilirganislventandphvaluenapaityfatrsfaiddru

4、gsinireulsinliquidhratgraphyasfullynsistentiththetheretialdeling.theretentindelinganbetterreflettheeffetfpsitinfireulsinslutinandphvaluenretentinbehavirfaiddrugsinireulsinliquidhratgraphy.keyrdsireulsinliquidhratgraphy；retentindeling；retentinbehavir；naprxen；ibuprfen；dilfena；phenylalanine；2，4-dihlrph

5、enxyaetiaid1弁言微乳液由外貌活性剂、助外貌活性剂(醇)、亲脂性有机溶剂(油)及水构成的，粒径为纳米级的液滴(疏散相)疏散到另一种不相混溶的液体(一连相)中所形成的胶体疏散体系。微乳液相色谱(el)是以微乳液为活动相的高效液相色谱体系13。el与传统高效液相色谱(hpl)比拟具有奇特的选择性及高效性，已担当到了越来越多的存眷412。本实行研究了在十二烷基硫酸钠sds-异丁醇-异辛烷-磷酸盐缓冲溶液构成的/微乳液作为活动相的微乳色谱体系中，微乳构成的变革对酸性药物萘普生、布洛芬、双氯芬酸、苯丙氨酸、2，4-二氯苯氧基乙酸(见表1)的保存举动的影响；以溶质在三相中的平衡为根据，创立微乳色

6、谱体系中酸性药物的保存模子，为微乳液相色谱的生长提供理论基矗表1酸性药物的分子布局及醇-水分派系数(lgp)略table1leularstruturesandtanl-aterpartitineffiients(lgp)faididrugs2实行部门2.1仪器与试剂alliane2695型高效液相色谱仪和2996型二极管阵列检测器(美国aters公司)，eper化学事情站(美国aters公司)；zy1104型18液相色谱柱(1004.6，10，北京阐发仪器厂)；电子天平(上海梅特勒-托利多仪器)。萘普生、布洛芬、双氯芬酸、l-苯丙氨酸、2，4-二氯苯氧基乙酸(浙江产业大学药学院药物阐发实行室提

7、供)；十二烷基硫酸钠(化学纯，广西汕头市西陇化工场)；异丁醇(阐发纯，上海化学试剂采购供给联化工场)；异辛烷(阐发纯，上海凌峰化学试剂)；甲醇(色谱纯，上海陆都试剂)；和(阐发纯，浙江湖州化学试剂厂)；3(阐发纯，浙江新安化工团体股份)。2.2拟三相图制作助外貌活性剂(异丁醇)/外貌活性剂(sds)按必然质量比混淆，然后外貌活性剂混淆液与油(异辛烷)的质量比别离为100，9.80.2，9.50.5，91，82，73，64，55，46，37，28，19混淆，搅拌匀称，各混淆液在25下滴加水或磷酸盐缓冲溶液。根据相变和溶液电导率的变革制作拟三相图。2.3样品溶液和活动相的配制别离称取适量的萘普生、

8、布洛芬、双氯芬酸、苯丙氨酸、2，4-二氯苯氧基乙酸置于10l容量瓶中，用微乳液溶解并稀释至刻度，配制成1g/l的样品溶液，利用前经0.22纤维素膜过滤。称取适量sds置于500l容量瓶，参加25l/lkh2p4(或k2hp4)溶液，超声至sds溶解，再参加适量的异丁醇和异辛烷，并用25l/lkh2p4(或k2hp4)稀释至刻度，超声处置惩罚2in后，用稀h3p4调治至所需ph值。利用前用0.45微孔滤膜真空过滤。效果与讨论3.1/微乳液地区简直定微乳液是由外貌活性剂、助外貌活性剂、油和水按得当比例自觉形成的无色透明、各向同性、低粘度的热力学稳定体系。当构成比例差异时，微乳液布局也不雷同。为了猎

9、取稳定的/微乳液，通过拟三相图的制作确定/微乳液地区，如图1所示。从图1可知，随着sds-异丁醇-异辛烷-磷酸盐缓冲溶液的比例的改变，微乳布局产生显着变革。在微乳区中，归属于稳定的/微乳地区较小，且该地区的巨细随着异丁醇/sds比例的增大抵有缩校别的，水相中离子强度和ph值的巨细，对稳定的/微乳地区的影响较校当异丁醇sds31，(异丁醇+sds)异辛烷31，磷酸盐缓冲溶液(异丁醇+sds)2.11时，可得到较稳定的/微乳液。3.2溶质的保存模子的探究微乳液是一种亲脂性有机溶剂(油)修饰的胶束溶液，亲脂性有机溶剂疏散在胶束相内，形成微乳液滴。因此溶质在微乳色谱体系中的保存模子可以按亲脂性有机溶剂

10、修饰的胶束色谱(l)体系举行处置惩罚。如今，普及以为溶质在胶束液相色谱(l)中的保存重要取决于溶质在水相、胶束相和修饰后结实相三相之间的平衡14(见图2)。图1sds-异丁醇-异辛烷-磷酸盐缓冲溶液体系的相图略fig.1phasediagrasfsdiuddeylsulfate(sds)-isbutanl-istane-phsphatebufferslutinsystesa乳浊区(eulsin)；b液晶区(liquidrystalregin)；/微乳区(/ireulsin)；d共存区(existeneregin)；e/微乳区(/ireulsin)；f多相区(ultiphase)。图2溶质在el

11、中三相间的平衡表示图略fig.2sluteequilibriaangbulkslvent，ireulsindrpletandsurfatant-difiedstatinaryphaseinel：sds；：异丁醇(isbutanl)；s：溶质分子(sluteleule)。假定在所观察的微乳构成范畴内，微乳构成的变革及溶质不影响外貌活性剂(sds)的临界胶束浓度()；在所观察的助外貌活性剂(异丁醇)及外貌活性剂(sds)浓度范畴内，sds对结实相的结合修饰到达饱和的稳定状态；亲脂性有机溶剂(异辛烷)只存在于微乳液滴相内部。那么按照arstrng等14提出的在胶束液相色谱体系中，溶质的保存和选择性重

12、要取决于溶质在水相、胶束相和结实相之间的三相分派平衡。对付酸性溶质分子在微乳液相色谱体系中存在着以下分派平衡干系：1酸性溶质(ha)在水相中的电离平衡；2ha和a-在水相与微乳液滴()间的分派平衡；3ha和a-在水相与修饰的结实相(s)之间的分派平衡；4微乳液滴()相中的ha和a-与修饰的结实相之间的分派平衡。对付酸性药物溶质的分子(ha)而言，在微乳液相色谱体系中的容量因子(k)可界说为：k-根据溶质在三相间的平衡干系，式1可形貌为：kaha，a式中，h为活动相中的浓度，ka为溶质的电离常数。as和a-别离为以去质子溶质情势存在于修饰结实相和水相中的浓度；has和ha别离为溶质存在于修饰结实

13、相和水相中的浓度；a和ha别离为在微乳液滴相中去质子溶质和溶质的浓度；为外貌活性浓度；为比拟(结实相体积与活动相体积之比)。和表现溶质a-和ha在水相与结实相间的分派常数，该常数的巨细受微乳色谱体系中助外貌活性剂的数目()影响；，和，为溶质a-和ha在水相与微乳液滴相间的分派常数，该常数受微乳色谱体系中助外貌活性剂的数目()和微乳液滴中的亲脂性有机溶剂数目()影响。按照文献15，16提出的外貌活性剂、助外貌活性剂(醇)浓度对溶质在胶束液相色谱体系中的保存模子。在微乳色谱体系中，外貌活性剂、助外貌活性剂(醇)以及亲脂性溶剂(油)的浓度对酸性溶质的保存模子可形貌为：k=aah+ka1+kadad(

14、1+khad)a(1+khad)3式中，kas和khas表现纯胶束体系中溶质a-和ha在水相与结实相间的分派常数；ka和kha为纯胶束体系中溶质a-和ha在水相与胶束相之间的分派常数。kasd，khasd，kad，khad，kad，khad和kasd别离为助外貌活性剂对分派系数影响的修正系数，kad和khad别离是微乳液滴中的亲脂性有机溶剂对分派系数影响的修正系数。3.3外貌活性剂浓度对溶质保存举动的影响由式3可知，当微乳色谱体系中助外貌活性剂浓度、亲脂性有机溶剂的浓度和活动相ph值一按时，酸性溶质的容量因子(k)与外貌活性剂浓度()间的干系可形貌为：/k=ab(4)也就是说，在必然的助外貌活

15、性剂浓度、亲脂性有机溶剂的浓度和ph值条件下，酸性溶质的容量因子的倒数(1/k)与外貌活性剂浓度()呈正比。实行效果表白，酸性溶质的容量因子的倒数(1/k)与外貌活性剂浓度()之间具有精良的线性干系，见表2。这表白了所创立的保存模子式3或式4能较好地反响活动相中外貌活性剂浓度对酸性药物在微乳色谱体系中保存举动的影响。3.4浓度对溶质保存举动的影响当微乳色谱体系中sds、助外貌活性剂和亲脂性有机溶剂浓度一按时，酸性药物的保存模子(式3)可简化为：k(b+h)/(1+ah)(5)式中，a，b和别离是与溶质在三相分派系数相干的常数。实行效果表白，酸性药物的容量因子(k)与活动相中h之间能较好地切合的

16、酸性药物在微乳色谱体系中保存模子式3或式5)，如表3所示。这表白了创立的酸性药物在微乳液相色谱体系中的保存模子式3或式5)能较好地反响了活动相中或ph值对酸性药物在微乳色谱体系中保存举动的影响。表2容量因子与sds浓度间的相干性略table2relatinshipsbeteenapaityfatrandnentratinfsds*zy110418lun；活动相(bilephases)：0.08840.2063l/lsds，1.01l/l异丁醇(isbutanl)，65.7l/l异辛烷(istane)，25l/l磷酸盐(phsphates)，ph=3.0；流速(lrate)：1.0l/in；柱温

17、(lunteperature)：30。表3容量因子与氢离子浓度之间的相干性略table3relatinshipsbeteenapaityfatrandnentratinfhydrgenin活动相(bilephases)：0.1474l/lsds，1.01l/l异丁醇(isbutanl)，65.7l/l异辛烷(istane)，25l/l磷酸盐(phsphates)；别的条件同表2thethernditinsarethesaeasintable2。实行表白，当活动相ph值小于酸性药物的水相中的pka值时，其容量因子根本稳定；当ph值大于酸性药物的pka值时，随着活动相ph值的增长，其容量因子随之减

18、校这是由于活动相ph值小于pka值，酸性药物重要以游离酸情势存在；当活动相ph值大于pka值，部门酸电离形成负离子，使其疏水性削弱，同时，sds修饰的结实相外貌带负电荷，带负电荷的溶质与sds修饰的结实相之间的静电斥力使酸性药物的容量因子减校当ph值增大到必然值后，酸性药物完全电离，容量因子又渐渐趋于安稳。artin等17指出，在hpl体系中化合物的容量因子对数(lgk)与其相应的lgp间具有线性相干性。实行效果表白，酸性药物的容量因子对数(lgk)与其相应的lgp间无相干性。这是由于酸性药物的保存不但取决于疏水作用还与其离子化程度严密相干。经多元线性阐发创造，在微乳色谱体系中酸性药物的lgk

19、与lgp、ka和氢离子浓度h间具有较好的线性干系，其线性回归方程为：lgk=0.0831lgp+0.906ka-0.517h+1.001(r=0.908，sd=0.60)6回归方程中系数绝对值越大，相应的参数对容量因子的影响越大。通过式(6)中3个参数的系数绝对值巨细比力可知，影响酸性药物容量因子巨细的序次为：kahlgp。3.5助外貌活性剂浓度对溶质保存举动的影响当ph值一按时，将酸性药物的游离态和离子态视为团体溶质，那么保存模子式(3)可改写为：k=kad+kad1+kad(7)式中，和别离为溶质在水相与结实相间的表不雅分派常数；和为助外貌活性剂对表不雅分派系数影响的修正系数，为亲脂性溶剂

20、对表不雅分派系数影响的修正系数。从式(7)可知，当亲脂性溶剂异辛烷、sds浓度一按时，溶质的容量因子倒数(1/k)与助外貌活性剂浓度()成正比，即随着微乳活动相中助外貌活性剂浓度的增大，溶质的容量因子随之减校实行效果证明了酸性药物在微乳色谱体系中的容量因子倒数(1/k)与活动相中助外貌活性剂异丁醇的浓度呈正比，且两者间具有精良的线性干系，如表4所示。这说明白酸性药物在微乳色谱体系中的保存模子式3和式6)能较好地反响活动相中助外貌活性剂浓度对酸性药物在微乳色谱体系中的保存举动的影响。表4容量因子与助外貌活性剂异丁醇浓度之间的相干性略table4relatinshipsbeteenapaityfa

21、trandnentratinfisbutanlassurfatant活动相(bilephases)：0.1474l/lsds，0.6751.52l/l异丁醇(isbutanl)，65.7l/l异辛烷(istane)，25l/l磷酸盐(phsphates)；别的条件同表2thethernditinsarethesaeasintable2。3.6亲脂性有机溶剂浓度对溶质保存举动的影响实行效果表白，当微乳体系中sds浓度、异丁醇浓度和ph值一按时，酸性药物容量因子随微乳液中亲脂性溶剂异辛烷的量增长而减小，并且酸性药物容量因子倒数(1/k)与亲脂性溶剂异辛烷的浓度间出现精良线性干系，如表5所示。这是由

22、于微乳体系中亲脂性溶剂异辛烷浓度增长，即微乳液滴中亲脂性溶剂异辛烷浓度增长，使疏水性物质在活动相中的溶解度增大，导致其在结实相上的保存本领落落，容量因子减校该效果与其保存模子式(3)和式(6)完全同等，这意味着保存模子式(3)和式(6)完全可以或许反响亲脂性溶剂异辛烷浓度对酸性药物在微乳色谱体系中的保存举动的影响。表5容量因子与异辛烷浓度之间的相干性略table5relatinshipsbeteenapaityfatrandnentratinfistane活动相(bilephases)：0.1474l/lsds，1.35l/l异丁醇(isbutanl)，21.9131.3l/l异辛烷(ista

23、ne)，25l/l磷酸盐(phsphates)；别的条件同表2thethernditinsarethesaeasintable2。3.7柱温对溶质保存举动的影响在色谱法疏散历程中，溶质的容量因子(k)与柱温的相干性可用vanthff方程表现：lnk-ln(8)式中k为溶质的容量因子，h和s别离为保存历程中溶质的焓变和熵变，r为气体常数，t为柱温(k)，为比拟(结实相体积与活动相体积之比)。以lnk为纵坐标，1/t为横坐标作图，得到vantthff曲线，其回归方程如表6所示。从表6可知，酸性药物的lnk与1/t之间具有精良的线性干系。线性vantthff曲线表白，在所观察的温度范畴内，酸性药物在微乳色谱体系中的保存机理不随柱温的变革而改变，即分派历程中的h和s不受温度的影响。从直线歪率可以求得酸性药物在微乳色谱体系中溶质从活动相分派到结实相历程中的焓变值，在所观察的温度范畴内焓变值(h)均为负值，这说明溶质从活动相(微乳液)分派到结实相是一个放热历程。表6酸性药物在微乳液相色谱体系中lnk与t的相干性略table6relatinshipbeteenlnkfaididruginireulsinliquidhratgraphyandt活动相(bilephases)