大豆异黄酮检测

1、大豆异黄酮检测的研究进展HPLC法测定异黄酮含量1 大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物。大豆异黄酮在通常情况下为固体，熔点在100 以上。常温下性质稳定，呈黄白色粉末状，无毒，有轻微苦涩味，在醇类、酯类和酮类溶剂中有一定的溶解度，不溶于水，难溶于石油醚、正已烷等。2 大豆异黄酮在强酸、高温或酶存在下可水解去掉葡萄糖基而转变成葡萄糖苷配基形式(游离大豆异黄酮)。据报道游离型大豆异黄酮(苷元)约占异黄酮总量的23 ，主要以大豆黄素(Daidzein)、染料木素(Glycitein)和黄豆黄素(Genistein)形式存在。34抗癌作用抗氧化作用具有对骨组织密度的阳性反应，有效防治骨质

2、疏松症；具有弱的雌激素活性，可用于改善妇女更年期症状；具有抗酸化能力，能增强心肌收缩力，增加冠状动脉血流量，对心脏病的危害有良好预防效果；可降低体内胆固醇和脂肪量，并能影响脂肪代谢，防止高血压、高血脂，预防心血管疾症发生。 除上述功能、作用外，异黄酮还具有抗真菌性从而抑制真菌活性的功能。研究表明，大豆异黄酮具有雌激素调节作用，能够改善妇女皮肤(美容)并对糖尿病及其他并发症、肾肝疾病、牙周炎等有预防和治疗的功效。保健作用5 人体资料表明：可刺激绝经前妇女乳腺增生和子宫内膜增生。可能会降低男性血管内皮功能孕妇摄入可致宫内胎儿造血细胞DNA损伤增加子代生殖系统疾病发生的危险性 动物实验表明：致癌作用

3、生殖内分泌毒性其他毒性：可能具有免疫毒性；可能具有神经毒性；可能具有细胞毒性；可能具有潜在的遗传毒性。毒性作用：6测定方法薄板层析法：操作简单，定量检测精度低多用于定性分析，适用于生产过程的中间物料及无精度要求的检测。紫外分光光度法：分为单波长法和三波长法，两者步骤相似，操作简便，重现性好，但特异性较差，主要用于样品中总大豆异黄酮的测定。高效液相色谱法：目前应用最广泛，为测定保健品中大豆异黄酮的国家标准法，分离效率高，准确度精密度高，测定样品范围广，主要用于单个大豆异黄酮样品的检测，如质量检验及科学研究等。7测定方法色相色谱法：进样量少，敏感性、选择性及特异性较高，但需制备衍生物，操作复杂，耗

4、时长，仪器昂贵。毛细管电泳法：快速经济，选择性高，样品前处理简单分离效率高。免疫检验法：以酶联免疫法为基础，测定中根据标记物和干扰物荧光寿命的差异，选择性的测定标记物的荧光信号。8 以下介绍检测保健食品中大豆异黄酮的测定方法 GB 23788-2009-T 高效液相色谱法9 固体样品、半固体样品：固体样品粉碎、磨细（过80目筛）、混匀，半固体样品混匀，称取样品0.05g0.5g（精确至0.1mg），用80%甲醇溶液溶解并转移至50mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。 液体样品：吸取混匀的液体样品0.55.0mL于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液至接近刻度。 将上述样品溶液用超声波振荡器振

5、荡20min，用80%甲醇定容，摇匀。取样品溶液置于离心管中，离心机离心15min（转速大于8000r/min）。取上清液用滤膜过滤，收集滤液备用。样品处理10大豆异黄酮混合标准使用溶液将大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液按1:1:1:1:1:1的比例配成标准混合溶液，待用。 分别吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL标准混合溶液于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液定容，配成浓度分别为0.0mg/L， 8.0mg/L ，16.0mg/L，24.0mg/L，32.0mg/L，40.0mg/L的混合标准系列溶液。11色谱条件色

6、谱柱：C18,4.6mm250mm，粒度5m 不锈钢色谱柱，也可使用分离效果相当的其他不锈钢柱。流动相：A：乙腈 B：磷酸水溶液（pH=3.0） 波长：260nm。进样量：10L。柱温：3012定性 分别将大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素的标准贮备溶液稀释10倍后，按色谱条件进行测定，依据单一标准样品的保留时间，对样品溶液中的组分进行定性。测定13测定定量 将大豆异黄酮混合标准使用溶液在色谱条件下进行测定，绘制以峰面积为纵坐标、混合标准使用溶液浓度为横坐标的标准曲线。将样品溶液注入高效液相色谱仪中，保证样品溶液中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的响应值均在工作曲线的线性范围内，由标准曲线差得样品溶液中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的浓度。14样品中大豆异黄酮各组分大豆苷（X1）、大豆黄苷（X2）、染料木苷（X3）、大豆素（X4）、大豆黄素（X5）和染料木素（X6）的含量分别按下式计算：式中：Xi样品中大豆异黄酮单一组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；Ci根据标准曲线得出的大豆苷（或大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素）的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V样品稀释液总体积的数值，单位为毫升（mL）；m固体、半固体杨南平质量的数值，单位