五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究

1、五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实行研究席萍黄耀海黄月纯蔡庆群曹艳芳【摘要】目的创立五指毛桃药材的高效液相(HPL)指纹图谱。要领接纳高效液相色谱法，选用XDB18色谱柱4.6250,5。柱温25；检测波长246。活动相为甲醇-水。梯度洗脱：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545，40in；甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585。流速1l/in；运行时间50in；检测波长为246n。结果五指毛桃药材共有9个共有峰。结论实行要领可行，可为检测五指毛桃药材质量操纵尺度提供参考。【关键词】五指毛桃指纹图谱高效液相色谱法五指毛桃RadixFii为桑科植物粗

2、叶榕FiushirtaVahl.的枯燥根。最早称为无爪龙，纪录于清代的?生草药性备要?，如今临床利用习称五爪龙，很多当代大型中药东西书称之为五指毛桃，商品名亦称五指毛桃1。2022年版?广东省中药药材尺度?将其以五指毛桃的名称列入尺度中2。本品为华南地域常用中药材，味甘，性平，有健脾补肺、利湿舒筋成效，主治脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、冷汗、带下、产后无乳、风湿痹痛、水肿、肝硬化腹水、肝炎、跌打损伤，临床疗效明显。梅州地域宜将其作为食疗常用品，家喻户晓。研究表白五指毛桃药材的化学身分重要是补骨脂素以及佛手内酯、油酸、亚油酸、十六酸、十八酸等身分，这些身分在沸水中煎出均能产生香气,民间风俗以其香

3、味的浓重程度来断定其质量的优劣。据文献检索有关五指毛桃的种植技能研究3，构造造就研究4、挥发油身分的阐发5，6、以及测定其身分含量的薄层扫描法研究7等均有报道。但对五指毛桃药材指纹图谱的研究却未见报道，为更好地评价五指毛桃药材质量的匀称性和不变性，进步其质量操纵尺度，我们网络了差异产地五指毛桃药材，接纳高效液相色谱法，创立了五指毛桃药材的指纹图谱阐发要领。1东西1.1仪器高效液相色谱仪(HP-1100，安捷伦)；二极管阵列检测器DAD；色谱柱：XDB184.6250,5，安捷伦。1.2试药甲醇(色谱试剂,批号051105101,天津市四友生物医学技能)；水为超纯水；补骨脂素比拟品739-200

4、209(由中国药品生物成品检定所提供)；样品：五指毛桃药材共9批见表1，均为当年奇怪网罗晒干，托付广州致信中药饮片公司在各地网络并断定。见表1。表1五指毛桃药材泉源略2要领2.1色谱条件色谱柱为Hypersi1DS(2504.0；5)；活动相，甲醇-水；梯度洗脱条件：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545；40in，甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585；流速，1l/in；柱温为室温；进样量，10l；检测波长246n。2.3供试品溶液的制备称取五指毛桃药材粉末约5，置锥形瓶中，参加甲醇50l，浸泡留宿，超声处置惩罚30in，滤过。滤液蒸干，残渣加

5、甲醇溶解，定容至1l。2.4测定要领别离细密汲取比拟品溶液及供试品溶液各10l，注入高效液相色谱仪，纪录50in的色谱图。3结果3.1细密度实行取同一份供试品溶液，一连进样5次，其色谱峰保存时间的RSD均在0.3%以内，峰面积的RSD均在5%以内。保存时间和峰面积根本无显着变革，切合指纹图谱技能要求。3.2不变性实行取同一份供试品溶液，别离在0，2，4，6，12h处检测，其色谱峰保存时间的RSD均在0.2%以内，峰面积的RSD均在5%以内。表白样品溶液在12h内不变。3.3重复性实行取同一批样品如法制备供试品5份检测，其色谱峰保存时间的RSD均在0.3%以内，峰面积的RSD均在5%以内。保存时

6、间和峰面积根本无显着变革，表白要领重现性较好。3.4重要色谱峰的创立别离细密汲取比拟品溶液及供试品溶液各10l，注入高效液相色谱仪，纪录50in的色谱图。检测指认结果9批五指毛桃药材的指纹图谱，与参照物补骨脂素的色谱峰S相对应的位置上，有一重要色谱峰，其占总峰面积的百分比约为50.2662.27。50in内有9个色谱峰是9批五指毛桃共有的。其在5号峰和6号峰保存时间约在23.5in和27in的位置更具有特性性，为重要共有峰，5号峰对应为补骨脂素的色谱峰S。因此，终极确定9个色谱峰为共有指纹峰见图1，共有指纹峰的保存时间见表2，峰面积百分含量见表3。图1五指毛桃药材色谱峰图略表29批五指毛桃样品

7、共有指纹峰的保存时间略表3指纹图谱重要共有峰的峰面积百分含量略3.5样品指纹图谱相似度阐发五指毛桃9批药材样品指纹图谱与相似度盘算机软件SPSS得出的共有形式比拟力，其相似度结果见表4。4讨论由于五指毛桃药材身分庞大，实行中选择单一活动相无法到达很好的分散结果，而接纳梯度洗脱可以在整个阐发时间段50in内，各色谱峰峰形锋利，并能尽大概多地对各组分举行很好的分散，到达较好分散结果。我们观察了甲醇水差异比例以及差异洗脱梯度的试验，结果表白，本实行所接纳的活动相：0in，甲醇-水1585；20in，甲醇-水5545；40in，甲醇-水8515；45in，甲醇-水1000；50in，甲醇-水1585。

8、其分散结果较好。在检测波长的选择中，接纳二极管阵列检测器DAD检测，在215，246，270，290和320n中的色谱图举行比力，结果在246n处的色谱图中出峰较多，峰形较好，并且是五指毛桃药材重要身分补骨脂素的最大汲取波长,因此我们拔取246n作为其指纹图谱的检测波长。表4与共有形式比力的五指毛桃样品相似度评价SPSS软件略实行中制备五指毛桃样品液，我们选择7种提取溶剂体系即50%甲醇，甲醇，乙醇，醋酸乙酯，乙醚，氯仿，石油醚举行观察。结果表如今同样超声30in的环境下，以甲醇的提取结果最正确。而对提取要领的观察，以甲醇为提取溶媒，别离接纳浸泡24h，加热回流2h，索氏提取4h和超声提取30

9、in等4种提取要领的提取服从，创造甲醇热回流和甲醇超声提取对五指毛桃药材举行处置惩罚所得色谱图峰数较多，更能表现药材原有的面目。颠末实行比力，用甲醇超声提取30in的操纵相对简朴，结果较佳，末了选定其作为本实行的提取要领。实行结果表现，五指毛桃17号样品相似度均到达95%以上，说明其指纹图谱具有较高的相似性。89号样品相似度偏低，与其药材中参杂较多的茎枝部门有关。五指毛桃的药用部位重要是根，但据市场环境来看，差异地域接纳根茎混用的环境是存在的。测定结果表白，差异产地的五指毛桃药材指纹图谱的9个共有峰保存时间，均具有较好的重现性；此中，1号样品各号峰均齐备，共有峰面积大，5号峰和6号峰的峰面积百

10、分含量高，开端以为它的质量最好，这与有关河源产地的五指毛桃质量检测最正确的研究报道符合8；同样源于河源产地的2号样品，其各号峰也较齐备，但与样品1比拟，其4号峰非常的高，且缺少8号峰，由于它们别离购于差异的时间段，毕竟是何缘故原由造成这种差异，有待日后的观察研究。因实行条件限定，我们没能在各个产地网罗多批次的样品举行试验，本实行也只是对五指毛桃药材指纹图谱作开端的探究研究，为进步其质量操纵尺度提供检测要领。【参考文献】1钟小清,徐鸿华.五指毛桃品种考据J.中药材，2000,23(6)：361.2广东省食品药品监视办理局.广东省中药药材尺度,第1册S.广州：广东科技出书社,2022:35.3钟小清,徐鸿华,陈安琴.五指毛桃种植技能J.中药研究与信息，2000,2(7):17.4蒋林,黄清春,等.五指毛桃构造造就研究J.中药材，2022,27(8)：547.5林励,钟小清,魏刚.五指毛桃挥发性身分的G-S阐发J.中药材，2000,23(