实验一、分子生物学的基本操作及常用仪器的介绍

1、一、实验目的一、实验目的 1、掌握分子生物学实验的基本方法和技能、掌握分子生物学实验的基本方法和技能 2、熟悉分子生物学常见实验仪器的基本操作、熟悉分子生物学常见实验仪器的基本操作 3、了解分子生物学实验的特点、了解分子生物学实验的特点 4、学会正确书写定量实验报告、学会正确书写定量实验报告二、分子生物学实验的特点二、分子生物学实验的特点 1、分子生物学实验主要应用化学原理和方法所设计、分子生物学实验主要应用化学原理和方法所设计的科学实验，也渗进了一些相关学科的理论知识与的科学实验，也渗进了一些相关学科的理论知识与方法。方法。 2、由于研究对象为生物体，所以标本的来源不易，、由于研究对象为生物

2、体，所以标本的来源不易，微量微量和和定量定量是分子生物学实验的一大特点。是分子生物学实验的一大特点。 3、分子生物学实验往往涉及生物大分子和生物材料、分子生物学实验往往涉及生物大分子和生物材料的检测，因此取材常为生物体的组织器官，甚至是的检测，因此取材常为生物体的组织器官，甚至是活的生物体。所以活的生物体。所以很难保证样品、标本的无菌性很难保证样品、标本的无菌性，要注意作好自身防护要注意作好自身防护。 4、与临床医学关系密切、与临床医学关系密切三、分子生物学实验室规则三、分子生物学实验室规则 1、实验室、实验桌凳勿乱涂写刻画；上课须统一穿白、实验室、实验桌凳勿乱涂写刻画；上课须统一穿白大衣。这

3、也是为了同学门自身的卫生与安全，因为实大衣。这也是为了同学门自身的卫生与安全，因为实验过程中会用到一些有毒或危险试剂等。验过程中会用到一些有毒或危险试剂等。 2、每次实验课前均要清点实验桌上自己面前的一套试、每次实验课前均要清点实验桌上自己面前的一套试管架上各种仪器是否齐备，如有破损，及时提出更换。管架上各种仪器是否齐备，如有破损，及时提出更换。 3、实验过程中，注意节约药品试剂，节约水电。药品、实验过程中，注意节约药品试剂，节约水电。药品试剂用后即盖上，废弃物品不能乱丢，需由值日生统试剂用后即盖上，废弃物品不能乱丢，需由值日生统一收集。一收集。 4、实验课后均要将用过的仪器试管进行清洗，并整

4、理、实验课后均要将用过的仪器试管进行清洗，并整理台面。台面。 四、基本操作四、基本操作 （一）仪器的清洗（一）仪器的清洗 1、一般玻璃仪器：如试管烧杯量筒三角瓶等，先用自、一般玻璃仪器：如试管烧杯量筒三角瓶等，先用自来水洗刷，用毛刷沾少许肥皂粉或去污粉洗刷；再用自来水洗刷，用毛刷沾少许肥皂粉或去污粉洗刷；再用自来水反复冲洗，去尽肥皂水或去污粉直至无泡沫，最后来水反复冲洗，去尽肥皂水或去污粉直至无泡沫，最后用蒸馏水淋洗用蒸馏水淋洗23次，干燥备用。次，干燥备用。 2、做定量实验或要求严格时，除了用去污剂外，还需、做定量实验或要求严格时，除了用去污剂外，还需以热洗液洗涤一次（或冷洗液浸泡过夜），而

5、后再用蒸以热洗液洗涤一次（或冷洗液浸泡过夜），而后再用蒸馏水淋洗馏水淋洗23遍。洗液由浓硫酸遍。洗液由浓硫酸重鉻酸钾重鉻酸钾水按一定水按一定比例根据不同需要配成。比例根据不同需要配成。3、比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗，洗不干净、比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗，洗不干净时，用稀盐酸冲洗，再用自来水冲，勿用试管刷或时，用稀盐酸冲洗，再用自来水冲，勿用试管刷或粗糙的布或纸擦。粗糙的布或纸擦。4、对于新使用的玻璃仪器，其表面附有碱质，可先、对于新使用的玻璃仪器，其表面附有碱质，可先用肥皂水刷洗，再用自来水冲净后，需用用肥皂水刷洗，再用自来水冲净后，需用12稀稀盐酸浸泡过夜，再用自来水反复冲洗，蒸

6、馏水淋洗。盐酸浸泡过夜，再用自来水反复冲洗，蒸馏水淋洗。5、上述所有玻璃一起清洗干净后，以倒置后器壁不、上述所有玻璃一起清洗干净后，以倒置后器壁不挂有水珠为干净标准。挂有水珠为干净标准。（二）吸量管的使用与选择（二）吸量管的使用与选择1、吸管为精密吸量器，其规格有：、吸管为精密吸量器，其规格有：0.1ml、0.25ml、1ml、2ml、5ml、10ml等，有的吸量管上有两个环，上面的数字标示最等，有的吸量管上有两个环，上面的数字标示最大体积，下面的是最小分刻度体积。根据实验需要，选择合大体积，下面的是最小分刻度体积。根据实验需要，选择合适规格的吸量管。如吸取适规格的吸量管。如吸取1.5ml溶液

7、，以选溶液，以选2 ml为宜；若用为宜；若用1 ml吸两次，则会增大误差。另外还应注意，在一组实验中，吸两次，则会增大误差。另外还应注意，在一组实验中，吸量同一种试剂，应尽量选用一支移液管，以减少系统误差。吸量同一种试剂，应尽量选用一支移液管，以减少系统误差。2、注意吸量管刻度方向，有读数从上而下，也有从下而上的。、注意吸量管刻度方向，有读数从上而下，也有从下而上的。3、执吸量管时，不要触及吸管尖端，尽量拿上部，刻度朝向自、执吸量管时，不要触及吸管尖端，尽量拿上部，刻度朝向自己，以食指堵住管口（手指不能沾水），控制流量。己，以食指堵住管口（手指不能沾水），控制流量。4、要将吸量管插入到适当深度

8、，以免溶液吸入吸耳球内或吸空，、要将吸量管插入到适当深度，以免溶液吸入吸耳球内或吸空，不可用嘴吸。不可用嘴吸。5、读数时，使视线、刻度线及液面凹面三者在同一水平面上。、读数时，使视线、刻度线及液面凹面三者在同一水平面上。6、移液时，将吸管从液体中取出时，尤其是粘滞性大的液体时，、移液时，将吸管从液体中取出时，尤其是粘滞性大的液体时，必须用滤纸将吸管外壁擦干，放液时，将管尖轻抵容器内壁，必须用滤纸将吸管外壁擦干，放液时，将管尖轻抵容器内壁，慢慢放入。慢慢放入。7、对于管尖液体的处理是吸量误差的主要来源之一：一般、对于管尖液体的处理是吸量误差的主要来源之一：一般1ml以下的均要用吸耳球将管尖的液体

9、吹入容器中。而以下的均要用吸耳球将管尖的液体吹入容器中。而1ml以上以上的只有标有的只有标有“快、吹快、吹”字样，才需要用吸耳球吹。字样，才需要用吸耳球吹。8、为了避免管尖残液处理所带来的误差，在吸取溶液体积小于、为了避免管尖残液处理所带来的误差，在吸取溶液体积小于吸量管最大吸量体积时，一般先吸到最大体积，然后放液到吸量管最大吸量体积时，一般先吸到最大体积，然后放液到适当体积刻度。适当体积刻度。9、一支吸量管只能吸一种溶液。、一支吸量管只能吸一种溶液。10、吸过浓硫酸等有腐蚀性液体的吸量管要在用后及时清洗；、吸过浓硫酸等有腐蚀性液体的吸量管要在用后及时清洗；吸过血液、血清等粘稠性液体的吸量管，

10、用后也要及时冲洗，吸过血液、血清等粘稠性液体的吸量管，用后也要及时冲洗，以免凝固而日后不易清洗。以免凝固而日后不易清洗。（三）溶液的混匀（三）溶液的混匀1、旋转混匀法：旋转混匀法：手持容器作离心旋转。该法适用于未盛满液体手持容器作离心旋转。该法适用于未盛满液体的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管时宜用手腕旋转。的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管时宜用手腕旋转。2、指弹混匀法：指弹混匀法：用手持容器，手腕用力前后摇动使内容物混匀；用手持容器，手腕用力前后摇动使内容物混匀；还可用左手持试管上端，用右手指轻弹试管下部，使管内溶还可用左手持试管上端，用右手指轻弹试管下部，使管内溶液作旋涡运动；或用左

11、手持试管上端，在右手掌上打击的方液作旋涡运动；或用左手持试管上端，在右手掌上打击的方法以混匀内容物。法以混匀内容物。3、颠倒混匀法：颠倒混匀法：适用于有塞的容量瓶及有塞试管内容物的混匀。适用于有塞的容量瓶及有塞试管内容物的混匀。一般试管内容物混匀时，可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按一般试管内容物混匀时，可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口颠倒混匀。住管口颠倒混匀。4、吸量管混匀法：吸量管混匀法：用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。适用于量少且无沉淀的液体混匀。适用于量少且无沉淀的液体5、搅拌混匀法：搅拌混匀法：适用于大口径容器烧杯、量筒等所盛溶液的混

12、适用于大口径容器烧杯、量筒等所盛溶液的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。匀，如固体试剂的溶解和混匀。五、分光光度计的使用五、分光光度计的使用 1、通电源，打开比色槽暗盒（关闭光门），电表、通电源，打开比色槽暗盒（关闭光门），电表指针处机械指针处机械“0”位，预热位，预热20分钟。分钟。 2、选择所需单色光波长和相应放大灵敏挡（均已、选择所需单色光波长和相应放大灵敏挡（均已调好，勿动），调好，勿动）， 3、比色槽盖打开时调、比色槽盖打开时调“0”。 4、盖上比色槽暗盒，调、盖上比色槽暗盒，调100%（用空白对照管）。（用空白对照管）。 5、拉动比色槽拉杆，读取一系列、拉动比色槽拉杆，读取一系列A值。

13、值。分光光度计使用时注意事项：分光光度计使用时注意事项：1、拿比色杯时，应取比色杯两毛面，用完后及时清洗、拿比色杯时，应取比色杯两毛面，用完后及时清洗比色杯，避免用手指直接接触或用粗糙的纸擦拭透光比色杯，避免用手指直接接触或用粗糙的纸擦拭透光面，以免弄脏或磨毛。面，以免弄脏或磨毛。2、向比色杯中倒液体时，注意勿过多或过少，一般占、向比色杯中倒液体时，注意勿过多或过少，一般占2/33/4体积，以和槽架的横档持平为准。比色杯倒体积，以和槽架的横档持平为准。比色杯倒完液后，用擦镜纸将外杯身液体擦干。（由下往上，完液后，用擦镜纸将外杯身液体擦干。（由下往上，以免将杯口液体带出）。以免将杯口液体带出）。3、不准将比色槽拿出。比色时不要将比色杯放置在仪、不准将比色槽拿出。比色时不要将比色杯放置在仪器上，以免液体漏出腐蚀仪器。器上，以免液体漏出腐蚀仪器。4、不测量时要打开暗室盖，以确保光门关闭，以、不测量时要打开暗室盖，以确保光门关闭，以免加快光敏元件的老化（比色计暗