细胞培养技术入门

1、会计学1细胞培养技术入门细胞培养技术入门1.1.培养室和超净台的消毒培养室和超净台的消毒 培养室培养室 无菌培养室每天都要用速消净或无菌培养室每天都要用速消净或0.20.2的的新洁而灭（苯扎溴铵）拖洗地面一次（拖布要新洁而灭（苯扎溴铵）拖洗地面一次（拖布要专用），紫外线照射消毒专用），紫外线照射消毒303050min50min。 湿热消毒：一般使用高压蒸汽灭菌器进行湿热消毒：一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒，要求是：消毒，要求是： 不能装太满，保持消毒器内气体流通。不能装太满，保持消毒器内气体流通。 在加热升压之前，打开排气阀门，使加在加热升压之前，打开排气阀门，使加热后消毒器内的残留冷空气排出

2、。热后消毒器内的残留冷空气排出。 关闭排气关闭排气阀门，开始升压，待达到所需要的压力时，开阀门，开始升压，待达到所需要的压力时，开始记录时间，并控制压力恒定。始记录时间，并控制压力恒定。 4.4.细胞培养用液及培养基（液）细胞培养用液及培养基（液）: : （1 1）水：）水：双蒸水、三蒸水，可高压除菌。双蒸水、三蒸水，可高压除菌。 （2 2）平衡盐溶液（）平衡盐溶液（PBS)PBS)：PHPH为为7.27.27.47.4，不，不含钙镁离子含钙镁离子 ，可高压除菌。，可高压除菌。（3 3）消化液）消化液 ： 胰蛋白酶液：胰蛋白酶液：常用胰蛋白酶的浓度为常用胰蛋白酶的浓度为0 025 25 ，pH

3、pH值值7.27.2左右。需过滤除菌。左右。需过滤除菌。（4 4）l640l640培养液培养液( (常用常用) )（5 5）DMEMDMEM、F12F12培养液培养液 （6 6）HamHam培养液培养液 ( (无血清培养中常用的无血清培养中常用的基础培养基基础培养基) )（7 7）HepesHepes：具有较强的缓冲能力，能具有较强的缓冲能力，能常时间恒定缓冲液的常时间恒定缓冲液的PHPH值。使用浓度可根值。使用浓度可根据缓冲要求而定。据缓冲要求而定。3737培养箱（或培养箱（或5%CO5%CO2 2培养箱）中培养培养箱）中培养2424小时后换液小时后换液去处对细胞生长有毒物质，如去处对细胞生

4、长有毒物质，如DMSODMSO、细胞组织残渣、细胞代谢产物、细胞组织残渣、细胞代谢产物 贴壁细胞贴壁细胞 悬浮细胞悬浮细胞直接去掉上清液直接去掉上清液 离心去掉上清液，必要时做细胞饲离心去掉上清液，必要时做细胞饲养层以净化细胞养层以净化细胞 传代传代 细胞生长细胞生长8080以上覆盖培养瓶底，根据细胞生长周期不同而异，以上覆盖培养瓶底，根据细胞生长周期不同而异， 2 23 3天或天或1 1周左右一代周左右一代 贴壁细胞贴壁细胞 悬浮细胞悬浮细胞. .消化法，用胰酶消化法，用胰酶EDTANa2EDTANa2消化，消化， 直接吹打或离心法、自然沉淀法直接吹打或离心法、自然沉淀法， 时间根据细胞而定

5、时间根据细胞而定 吸一半液到另一瓶吸一半液到另一瓶 冻存冻存四、细胞计数要点：四、细胞计数要点： 1.1.要求悬液中细胞数目不低于要求悬液中细胞数目不低于10104 4个个/ml/ml，如，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；液中； 2.2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。影响计数准确性。 3.3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更意每次取样都要混匀，以时多次取样计数时更意每次取样都要混匀，以求计数准确；求计数准确； PC-3ECVLNCaPLNCaPCHO80以上sp20sp20HL-60 HL-60442 2 3h3h冰箱冰箱弃上清弃上清混匀混匀HeLa4（4 4）l640l640培养液培养液( (常用常用) )（5 5）DMEMDMEM、F12F12培养液培养液 （6 6）HamHam培养液培养液 ( (无血清培养中常用的无血清培养中常用的基础培养基基础培养基) )（7 7）Hepe