第四章菌种生产

1、第4章 食用菌菌种生产第一节 菌种概述第二节 菌种生产设备 第三节 菌种培养基第四节 接种 第五节 菌种培养与质量鉴定第六节 菌种保藏与复壮 第一节 菌种概述一、菌种概念二、菌种类型三、菌种生产程序返回本章一、菌种概念菌种担孢子或子囊孢子野生扩大繁殖后的纯次生菌丝体栽培来历野生菌驯化原菌株改良生物技术创新优良菌株扩大繁殖用于生产实行纯培养不含任何杂菌基本要求返回本节二、菌种类型一级菌种二级菌种三级菌种级别按保藏用种实验用种生产用种目的状态：固体菌种、液体菌种返回本节（一）级别不同的菌种1.一级种（母种）用分离法首次得到的纯次生菌丝体 概念概况培养环境 试管、斜面培养基用途 再生母种扩大原种保藏

2、用种菌丝弱而少、不可直接栽培特点返回本节返回本节2.二级种（原种）将母种扩大至粗放培养基上形成的菌种概念概况培养环境菌丝较多而壮、适应性较强特点用途 扩大栽培种大口瓶、较粗放的液体或固体培养基返回本节返回本节3.三级种（栽培种）将原种扩大至粗放培养基上形成的菌种概念概况培养环境菌丝多而壮、适应性强特点用途栽培生产菌种袋、较粗放的固体培养基返回本节返回本节生产总过程母种栽培种栽培原种子实体返回本节返回本节（二）状态不同的菌种用固体基质培养的菌种1.固体 菌种概念特点设备、工艺简单菌龄长而不一发酵率较低用液体基质培养的菌种2.液体 菌种概念特点设备、工艺较复杂菌龄短而一致发酵率高易老化和自溶返回本

3、节生 长 势 的 区 别液体菌种固体菌种返回本节返回本节三、菌种生产程序四大步骤制培养基灭菌培养接种返回本节第二节 主要生产设备一、制培养基设备二、灭菌设备三、接种设备四、培养设备五、保藏设备六、菌种厂布局返回本章一、制培养基设备（一）原料处理设备切片粉碎两用机切片粉碎两用机铡草机粉碎机返回本节拌料机返回本节装袋机（二）培养基分装设备返回本节装瓶机挖瓶机返回本节菌种袋颈圈返回本节菌种瓶返回本节二、灭菌设备高压锅外锅：装水内锅：装物（有壁管）锅盖安全阀排气阀压力表返回本节常压返回本节密闭性好要求1.接 种 箱用法清洁、放物品 消毒喷雾熏蒸紫外灯特点简易、利移动对人体低害效果好、工效低 三、接种设

4、备（一）接种环境返回本节观察窗紫外灯 操作孔接种箱返回本节2.接种室缓冲间：23m2接种间：56m2面积79m2高2.22.5m要求 6个面平滑两门错开、平拉式顶装紫外灯清洁物品放缓冲间消毒 移物至接种间 喷消毒液 10min 后接种消毒液清洁 使用返回本节返回本节返回本节使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器3.超净工作台双人单人返回本节要求:前端为导热性好的金属材料枪匙钩铲镊耙针环接种4.接种工具返回本节固体菌种接种枪液体菌种接种枪返回本节四、菌种培养设备1.培养箱培养少量菌种的恒温电器（2040）返回本节2.培养室培养大量菌种的恒温房要求光线暗密闭好、通风性强能升温、降温（空调机）有培

5、养架返回本节贮藏室远离污染源低温（48）干燥、通风、遮光 用前要严格消毒杀虫地面常撒石灰粉保藏原种、栽培种：五、菌种保藏设备保藏母种：冰箱（4）左右返回本节六、菌种厂的布局根据菌种生产流程合理设置仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场返回本节第三节 菌种培养基一、概述（一）概念及要求（二）培养基的类型二、各级菌种的培养基（一）母种培养基（二)原种、栽培种培养基三、培养基的灭菌返回本章一、培养基的概述（一）概念及要求概念人工配制的适于菌种生长的营养基质要求营养种类、比例、水分、pH适宜； 保持无菌状态。返回本节类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：？原料来源状态液体：营

6、养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%2%琼脂表面形状斜面培养基平板培养基（二）培养基的类型返回本节粉状条状属天然植物多糖 融点96以上凝点40 以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用特性返回本节返回本节二、各级菌种的培养基（一）母种培养基1.通用配方2.配制过程PDA马铃薯200g、葡萄糖20g琼脂1520g、水1000m1返回本节煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调解pH勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌扎捆10%NaOH或HCL返回本节返回本节（二）原种、栽培种培养基主料棉籽壳87，麦麸10辅料白糖1，石灰1，过磷酸钙1配方（%）棉壳、

7、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量配制(1)棉籽壳培养基 返回本节主料 麦粒、玉米粒等98.5%辅料 石膏粉1%,碳酸钙0.5%调pH与分装 pH：一般为8.0左右原种培养基装大口瓶栽培种培养基装菌种袋 配方（%）颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料配制(2)颗粒培养基返回本节返回本节栽培种的装袋返回本节三、培养基的灭菌（一）母种培养基的灭菌无菌检验约30条件下空白培养23天灭菌与摆斜面摆斜面摆斜面1kg/cm2(103kpa、121）2030min返回本节母基灭菌与摆斜面返回本节（二）原种、栽培种培养基的灭菌高压灭菌1.5kg/cm2（152kpa、1

8、28.1）灭菌12h 返回本节常压灭菌100灭菌10h左右再闷12h要求攻头、控中、保尾 返回本节第四节 菌种的接种一、无菌操作二、母种的接种 (一）分离法 1.组织分离 2.孢子分离（二）转管法三、原种、栽培种的接种返回本章概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作接种在严格消毒灭菌条件下进行的操作概念一、无菌操作接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快，接种时间勿太长要点必备返回本节返回本节u特点简便，易成功保持原菌种性状重复多易退化不适于耳类1.组织分离组织PDA次生菌丝培养（一）分离法u步骤返回本节步骤选种菇外观典型、大小适中、无病虫害、

9、八成熟、第12茬的子实体取接组织纵剖（撕）菇体尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织放入新斜面中部种菇消毒用燃烧的酒精棉球迅速擦拭返回本节2.孢子分离(有性繁殖）孢子特点菌龄小生命力强变异率高孢 子分离法难度较大单孢分离多孢分离较简易单孢分离的菌落返回本节多孢分离概念使许多孢子在同一培养基上，萌发后自由交配成次生菌丝的方法步骤种菇消毒采收孢子接种孢子整菇插种法钩悬法孢子印法返回本节(1)种菇 消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新洁尔灭浸23min无菌纱布吸干表面水分 无返回本节(2)采收孢子整菇插种法种菇插在孢子收集器中使孢子散落于培养皿内的方法用前灭菌25、24h现孢子粉取出分离材

10、料培养皿盖严返回本节钩悬法25、24h现孢子粉取出分离材料返回本节孢子印法返回本节(3)接种孢子用接种环蘸孢子液或孢子粉涂布于平板上返回本节返回本节（二）转管法注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多将母种移入新的过程概念过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部返回本节转管返回本节三、原种、栽培种的接种接原种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上返回本节返回本节接栽培种用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及老种块勿接入返回本节栽培种接种返回本节第五节 菌种培养与质量鉴定一、菌种培养（一）培养条件（二）技术环节二、菌种质量鉴定（一）母种质量鉴定（二）原种和栽培种质量鉴定返

11、回本章(一)培养条件场所清洁空气清新光线暗空气湿度60%70%温度约25返回本节（二）技术环节1.母种培养及时挑拣污染管分离的母种要纯化出菇试验 使用控制菌龄（即将长满斜面）培养时间510天返回本节母种培养返回本节2.原种栽培种的培养培养时间：约30天勿堆放过挤及时挑拣污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满后710天使用）返回本节返回本节刺孔点返回本节返回本节二、菌种质量的鉴定形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等鉴定项目（一）母种质量的鉴定、菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等1.外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等返回本节退化母种好母种返回本节2.鉴定耐干湿性试

12、验接入母种正常生长原种培养基含水量50%70%耐高温性试验仍正常生长适温培养7天 3035 锻炼24h 再适温培养返回本节出菇试验栽培出菇快产量高品质好抗逆性强返回本节（二）原种、栽培种质量的鉴定具有菌丝白（符合该菌种的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快菌种种类品种名称菌种级别代 时生产厂家接种日期用于生产没有无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象返回本节产生原基返回本节黄水污染返回本节第六节 菌种保藏与复壮一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意二、菌种复壮 (一）菌种的衰退 （二）复壮方法 （三）防衰措施返回本章一、菌种保藏（一）保藏目的及原理目的

13、原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。使菌种不生长不死亡不污染不降低或不丧失其优良性以尽量延长使用时间返回本节低温干燥无氧缺营养不利条件返回本节（二）常用保藏法以母种形式保藏特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类 1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（36个月）返回本节返回本节2.矿油保藏法无菌检验 ？注入种管淹没斜面约1cm矿油处理灭菌：152kpa、30min去水：4050烘至无色透明 口堵胶塞用时转管再转管返回本节返回本节3.自然基质保藏法基质的处理麦粒浸透、煮熟麸皮拌湿装管防衰老保藏时间长转接后生长旺易污染，灭菌要彻底特点灭菌接种培养干燥器去水返回本节（三）保藏

14、注意u用保种培养基u及时保藏（菌丝占斜面2/3）u最好换胶塞u用时活化u严防棉塞受潮返回本节二、菌种的复壮概念 确保或恢复菌种优良性能的措施 （一）菌种的衰退形态改变、生长慢、抗逆性差、产量及质量下降表现根源内因 菌种的遗传物质发生了负变 外因 传代过多，条件不适宜返回本节（二）复壮法1.繁殖交替法2. 经常改变培养条件 3.转管时只取尖端菌丝组织分离母种孢子分离再生母种栽培子实体返回本节（三）防衰措施保证菌种的纯培养严格控制传代次数用适宜菌龄的菌种用适宜培养条件及保藏条件返回本节本章主要内容1.菌种类型（母种、原种、栽培种的作用）2.高压锅、接种箱、接种室的构造及使用3.培养基（PDA、颗粒培养基的配制方法）4.接种（无菌操作、各级菌种的接种法）5.菌种保藏（目的与原理、3种方法）6.菌种复壮（简易复壮法、防衰措施）返回本节1.设计菌种厂的依据是什么？2. 怎样防止菌种的衰退？3.怎样判断菌种的衰退？4.自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？1.黄毅.食用菌栽培. 北京：高等教育出社，19982.中国食用菌菌种网http:/作业题1.栽培时为何不用母种作菌种？2.母种扩成原种的目的是什么？3.怎样使用接种箱？4.菌种的基本要求是