有机氯类农药残留量测定法标准操作规程

1、有机氯类农药残留量测定法标准操作规程编制/修订人：部门审核人：分管负责人：质量审核人：企业负责人：实施日期：日期：年月日日期：年月日日期：年_月_一日日期：年_月_一日日期：年_月_一日年月日文件类别：管理标准技术标准受控状态生产部采购部商务部质量部1 物资部存档1 V工作标准本文件由质量部颁布，根据需要分发于以下部门:行政人事部工程部计财部【目的】规范有机氯类农药残留量测定法检验的程序和方法，确保有机氯类农药残留量测定法检验结果准确可靠。【适用范围】适用于本公司有机氯类农药残留量测定法的检验。【职责】1 QC 检验人员负责起草，按审批后的标准执行。2 质量部经理、质量负责人负责审核、监督执行

2、。3 总经理负责审批。【内容】1 简述有机氯类农药是农药史中使用量最大，使用历史最长的一类农药，其化学性质稳定，脂溶性强，残效期长（可达3050年之久），易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康。本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，电子捕获检测器测定。2 仪器与用具2.1 气相色谱仪，带有63Ni-ECD电子捕获检测器，载气为高纯氮，必须安装脱氧管。2.2 超声波处理器。2.3 离心机。2.4 旋转蒸发仪。2.5 色谱柱：SE-54或DB-1701弹性石英毛细管柱（30mX0.32mm 0.25 m）2.6 具塞刻度离心管（10ml）,刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶

3、（100ml）,移液管等。3 试药与试液3.1 丙酮、石油醴（6090C）和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸储装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。3.2 无水硫酸钠和氯化钠均为分析纯，硫酸为优级纯。3.3 农药对照品：六六六（BHC 包括a-BHC, B-BHC, 丫-BHC和6-BHC四种异构体,滴滴涕（DDT）包括pp-DDE, pp-DDD , op-DDT和pp-DDT四种异构体及五氯硝基苯（PCNB ,由中国计量科学研究院提供标示含量 （浓度）的农药标准品，也可采用国 际认可的农药标准品自行配制。4 9 种有机氯类农药残留量测定法4.1 色谱条件与系统适用性试验以

4、 （ 14%-氰丙基-苯基） 甲基聚硅氧烷或（ 5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25um）6,3 Ni-ECD 电子捕获检测器。 进样口温度230，检测器温度300，不分流进样。程序升温：初始温度100，每分钟10升至220，再以每分钟8升至250，保持10 分钟。 按上述条件操作，理论板数以a -BHC峰计算应不低于1 X 10 6,两个相邻色谱峰白分离度应大于 1.5。4.2 操作方法4.2.1 对照品贮备液的制备 精密称取六六六（BHC） （a-BHC 0 -BHC 丫-BHC, 6 -BH。、 滴滴涕（DDT）P, P-DDE, P, P-D

5、DD, O, P-DDT, P, P-DDT及五氯硝基苯 （PCNB/药对照品溶液适量，用石油醴（6090C）分别制成每1ml约含45用 的溶液， 即得。4.2.2 混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品贮备液 0.5ml,置10mI量瓶中，用石油醚60 90 ）稀释至刻度，摇匀，即得。4.2.3 混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚（6090C）制成每 1L 分别含 0ug, 1 g, 5g, 10Ng, 50仙 g, 100 仙 g 和 250 仙 g 的溶 液，即得。4.2.4 供试品溶液制备方法1（药材或饮片）取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约2 g,精密

6、称定， 置100 ml具塞锥形瓶中，加水20 ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml, 称定重量，超声处理30 分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6 g,精密加二氯甲烷30 ml,称定重量，超声处理15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100 ml 具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml,于40c水浴上减压浓缩至近干，加少量石油 醚 （6090 ） 如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（6090 ） 溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醴（6090C）精密稀释至5ml,小心加入硫酸1 ml,振摇1

7、分钟，离心（3000转/分钟）10分钟，精密量取上精液2ml,置具刻度浓缩瓶中，连接旋 转蒸发器，40c下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至 1 ml,即得。同法制备空 白样品。4.2.5 方法2（制剂）取供试品，研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称取 适量（相当于药材2g）,以下按方法1,制备供试品溶液。4.2.6 测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1仙1,注入气象色谱仪，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。5 22种有机氯类农药残留量测定法5.1 色谱条件与系统适用性试验 分析柱：以50%苯基50%C甲基聚硅氧烷为固定液 的弹性石英毛细管柱（3

8、0mX0.25mmX0.25um）O佥柱：以100万甲基聚硅氧烷为固定液的 弹性石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25um） 63 Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度240 C ,检测器温度300 C,不分流进样，流速为恒压模式（初始流速为 1.3ml/min ）。 程序升温：初始70 C,保持1分钟，每分钟10c升至180C,保持5分钟，再以每分钟 5c升至220C,最后以每分钟100c升至280C,保持8分钟。理论板数以a -BHC计算应 不低于1 X 10 6,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。5.2 操作方法5.2.1 对照品储备液的制备 精密称取表1中农药对照品适量，用异

9、辛烷分别制如表 1中浓度，即得。5.2.2 混合对照品储备液的制备 精密量上述对照品贮备溶液各 1ml,置100ml量瓶 中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。5.2.3 混合对照品溶液的制备分别精密量取上述对照品备贮溶液，用异辛烷制成每1L分别含10 pg、20 pg、50 pg、100 pg、200仙g、500仙g的溶液，即得（其中B - 六六六，异狄氏剂、P, P-滴滴滴、O, P-滴滴涕每1L分别含20/、40/、100/、 200 pg、400仙 g、1000 p g）05.2.4 供试品溶液制备取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约1.5 g ,精密称定，置于50 ml聚苯乙烯具塞离

10、心管中，加水 10 ml,混匀，放置2小时，精密加入乙月青15ml,剧烈振摇提取1分钟，再加人预先称好的无水硫酸镁4g与氯化钠1 g的混合粉末，再次剧烈振摇1 分钟后，离心(4000 转 / 分钟) 1 分钟。精密吸取上清液10ml， 40减压浓缩至近干，用环己烷- 乙酸乙酯(1:1) 混合溶液分次转移至10ml 量瓶中，加环己烷 - 乙酸乙酯(1 :1) 混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入1g 无水硫酸钠的离心管中，振摇， 放置 1 小时 ， 离心 (必要时滤过) ， 取上清液5ml 过凝胶渗透色谱柱( 400mmX25mm , 内装 BIO-Beads S-X3 填料；以环己烷- 乙酸乙

11、酯(1 : 1 ) 混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml) 净化， 收集 18? 30 分钟的洗脱液， 于 40水浴减压浓缩至近干，加少 量 正 己 烷 替 换 两 次 ， 加 正 己 烷 1ml 使 溶 解 ， 转 移 至 弗 罗 里 硅 土 固 相 萃 取 小 柱 1000mg/6ml, 用正己烷-丙酮( 95 : 5) 混合溶液10ml 和正己烷10ml 预洗 上 ，残渣用正己烷洗涤3次，每次1ml,洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷 -丙 酮 ( 95： 5) 混合溶液10ml 洗脱，收集全部洗脱液, 置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至1ml,涡旋使溶解，即得。5.

12、2.5 测定法分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1ul ，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氯农药残留量。5.2.6 限度 除另有规定外，每1kg中药材或饮片中含总六六六(a- BHC,B -BHC , 丫-BHC, 6 - BH和)不得过 0.2mg;总滴滴涕(P, P-DDE, P, P-DDD, O, P-DDT, P, P-DDT之 和)不得过 0. 2mg ；五氟硝基苯(Quintozene)不得过 0.1m g;六氯苯 ( Hexachlorobenzene) 不得过 0,1mg; 七氯( Heptachlor) 、顺式环氧七氯(HeptachI orex

13、o-epoxide)和反式环氧七氯(Heptachlor*endo-epoxide) 之和不得过 0.05mg;艾氏剂(AIdrin) 和狄氏剂(Dieldrin)之和不得过0. 05mg;异狄氏剂(Endrin)不得过0.05mg;顺式氯丹Chlordane) 、反式氯丹(trans-Chlordane) 和氧化氯丹(oxy-Chlordane) 之和不得过 0.05mg; a-硫丹(a-Endosulfan)伊硫丹(伊Endosulfan) 和硫丹 硫酸盐 ( Endosulfan sulfate) 之和不得过3mg。【 附注】(1) 当供试品中有农药检出时, 可在验证柱中确认检出的结果，

14、再进行定量。必要时 ,可用气相色谱一质谱法进行确证。(2) 加样回收率应在70%? 120%之间表1 22种有机氯类农药对照品贮备液浓度、相对保留时间及检出限参考值序号中文名英文名对照品贮备液(ug/ml)相对保留时间（分析柱）检出限（mg/kg）12345678910111213141516171819202122六氯苯Hexachlorobenzene1000. 5740. 001a- 六六六a- B H C1000. 6010. 004五硝基苯Quintozene1000. 6450. 007T-六六六y -B H C1000. 6670. 003，六六六,B H C2000. 7050

15、.七 MHeptachlor1000. 7130. 007A六六六8 - BHC1000. 750艾 氏 剂Aldrin1000. 7600. 006氧化氯丹Oxy-Chlordane1000.8160. 007顺式环氧七氟 Heptachlor-exo-epoxide1000. 833反式环氧七氟 Heptachlor-endo-epoxide 1000. 844反式氯丹trans-Chlordane1000. 8540. 005顺式氯丹cis-Chlordane1000. 8670, 008a-琉丹a-Endosulfan1000. 8720.01p,p /滴滴伊p,p/-DDE1000. 8920狄 氏 剂Dieldrin1000. 9010. 005异 狄氏剂Endrin2000. 9320. 009o,p /滴滴涕o , p / f-DDT2000.p,p /滴滴滴p , p / f-DDD2000.3-硫丹的Endosulfan1000. 9560p, /p -滴滴涕 p , p/-DDT1000. 9700.硫丹硫酸Endosulfan sulfate1001.0000. 0040