聚维酮碘操作规程

1、山东裕欣药业有限公司文件文件名称聚维酮碘检验操作规程文件编码：02SOP014-01文件级别：出级起草人：日期：审核人：日期：批准人：日期：生效日期：颁发部门：质量保证部制作备份：2发文号：分发部门：QC1份，存档1份1、目的：依据中国药典2010年版二部，内控质量标准【YL-QS-004-01，制定聚维酮碘检验操作规程，确保操作人员依法检验。2、范围：适用于聚维酮碘分子式【C6H9I2NO】，分子量364.95检验。3、职责：3.1 QC检验人员：负责本规程的严格执行。3.2 QC管理人员：负责本规程的监督实施。4、内容4.1 性状：黄棕色至红棕色无定形粉末。4.2 鉴别：4.2.1 鉴别（

2、1）:4.2.1.1 试药与试液：淀粉指示液。4.2.1.2 检验方法：取本品约0.5g,加水5ml溶解后取溶液一滴，加水9ml与淀粉指示液1ml,即显深蓝色。4.2.1.3 结果判定：内控标准：显深蓝色；法定标准：显深蓝色。4.2.2 鉴别（2）4.2.2.1 仪器与用具：分析天平。4.2.2.2 检验方法：取本品约0.5g,加水5ml溶解后，取溶液0.5ml,涂布在面积约为7.5cm*2.6cm的玻璃板上，与低湿度室温下放置过夜使干燥。4.2.2.3 结果判定：内控标准：形成一棕色、干燥的薄膜，易溶于水。法定标准：形成一棕色、干燥的薄膜，易溶于水。4.3 检查4.3.1 干燥失重4.3.1

3、.1 仪器与用具：分析天平、电热恒温干燥箱。4.3.1.2 检验方法：取本品约5g,精密称定，在105c干燥4个小时，称重，以后各次均在干燥1小时后称重，直到连续两次干燥后的重量差异不超过5.0mgo4.3.1.3 结果判定：内控标准：8.0%。法定标准：8.0%。4.3.2 炽灼残渣：4.3.2.1 仪器与用具：分析天平、高温炉。4.3.2.2 试药与试液：硫酸。4.3.2.3 检验方法：取本品1.0g,置已于500C600c炽灼至恒重的培竭中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；加硫酸0.5-1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，放在500C600c炽灼至恒重，即得。4.3.2.4

4、 结果判定：内控标准：W0.1%。法定标准：W0.1%。4.3.3 重金属4.3.3.1 仪器与用具：量筒。4.3.3.2 检验方法：供试品溶液：取炽灼残渣项下的残渣，用加硝酸0.5ml,蒸干至氧化氮蒸汽除尽，加盐酸2ml,置水浴上蒸干后，加水15ml,滴加氨试液至对酚吹指示液显中性微粉红色，加醋酸盐缓冲溶液（pH3.5）2ml,微热使溶解，移置25ml纳氏比色管中加水稀释成25ml。对照溶液：取配制供试品溶液的试剂，置瓷培竭中蒸干后，加醋酸盐缓冲溶液（pH3.5）2ml,加水15ml,微热使溶解，移置25ml纳氏比色管中，加标准铅溶液2ml,加水稀释成25ml。再在两管中分别加硫代乙酰胺试液

5、各2ml,摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视4.3.3.3结果判定：内控标准：20ppm。法定标准：20ppm。4.3.4 种盐4.3.4.1 试药与试液：醋酸铅棉花、澳化汞试纸、氢氧化钙、盐酸。4.3.4.2 检验方法：测试时，于导气管中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为6080mm）,再于旋塞的顶端平面上放一片澳化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖并旋紧，即得。取本品1.3g,加氢氧化钙0.5g,混匀，加水适量（约2ml）,搅拌均匀，干燥后，先用小火烧灼使炭化，再在600°C炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水23ml。对照溶液：取标准种溶液1

6、ml,加氢氧化钙0.5g混匀，加水适量（约2ml）,搅拌均匀，干燥后，先用小火烧灼使炭化，再在6000C炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水23ml。再在A、B瓶中分别用5ml刻度吸管加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g,立即将照上法装妥的导气管密塞于A、B瓶上，并将其瓶置2540c水浴中,反应45分钟，取出澳化汞纸试，比较，即得。4.3.4.3 结果判定：内控标准：0.00015%法定标准：0.00015%4.3.5 含氮量4.3.5.1 仪器与用具：分析天平。4.3.5.2 试药与试液：硫酸钾、硫酸、40%氢氧化钠溶液。4.3.5.3 检验方法：取本

7、品约0.5g,精密称定，置于干燥的500ml凯氏烧瓶中；然后依次加入硫酸钾（或无水硫酸钠）10g和硫酸铜0.5g,再沿瓶壁缓缓用20ml量筒加硫酸20ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使凯氏烧瓶成45。斜置，用直火缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，强热至沸腾，待溶液成澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷。沿瓶壁缓缓加水250ml,振摇使混合，放冷后，用100ml量筒加40%氢氧化钠溶液75ml,注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液层。加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接；另用50ml量筒取2%硼酸溶液50ml,置500ml锥形瓶中，加甲基红澳甲酚绿混合指示液10滴；将冷凝管的下端插

8、入硼酸溶液的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸储，至接受液的总体积为250ml时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸储；储出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于1.401mg的N。4.3.5.4 结果判定：内控标准：9.5%-11.5%;法定标准：9.5%11.5%。4.3.6 碘离子4.3.6.1 仪器与用具：分析天平。4.3.6.2 试药与试液：硝酸银滴定液（0.1mol/L）、亚硫酸氢钠试液。4.3.6.3 检验方法：本品约0.50g,精密称定

9、,置250ml锥形瓶中，加水100ml溶解后，滴加亚硫酸氢钠试液数滴使溶液颜色消失，加硝酸10ml,精密加入硝酸银滴定液（0.1mol/L）25ml,摇匀后，加硫酸铁俊指示液0.5ml,用硫氟酸俊滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显淡砖红色，并将滴定的结果用空白试验校正，每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于12.69mg的I。计算得总碘的百分含量减去含量测定项下有效碘的百分含量，即得碘离子的百分含量。4.3.6.4 结果判定：内控标准：6.6%;法定标准：6.6%。4.3.7 微生物限度检查4.3.7.1 简述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法

10、。检查项目包括需氧菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度C级背景下的局部洁净度A级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。4.3.7.2 仪器与用具：a净化工作台、生化培养箱（30-35C）生化培养箱（20-25C）,数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、电冰箱、立式压力蒸汽灭菌器、分析天平、酸度计等b玻璃器皿锥形瓶（250-300ml）、培养皿、量筒（100ml,500ml）、吸管（1ml分度0.01,10ml分度0.1）玻

11、璃器皿用前应洗涤干净，无残留抗菌物质，若用振荡器制备混悬液时，尚用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于180c干燥灭菌2h或高压蒸汽121c灭菌30min,烘干备用。4.3.7.3 消毒齐1J75%乙醇等。4.3.7.4 对照菌液：试验菌金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102铜绿假单胞菌CMCC（B）10104等，取相应的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，培养1824小时后，用pH7.0氯化钠蛋白冻缓冲液制成每1ml含菌数为不大于100cfu的菌悬液。4.3.7.5 稀释剂D/E中和肉汤、吐温80。4

12、.3.7.6 培养基营养琼脂、沙氏琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、曙红亚甲基蓝琼脂、乳糖胆盐发酵培养基，葡萄糖肉汤、营养肉汤等。4.3.7.7 试验准备a培养基的准备一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，在121c蒸汽灭菌15min备用。b将灭菌的琼脂培养基，置45c水浴中，备用。4.3.7.8 用具的洗涤与灭菌a培养皿使用过的培养基均须经规定条件灭菌后再用洗涤剂溶液浸泡洗刷，用水及纯化水冲洗干净，培养皿配对，分别置不锈钢筒内，于电热鼓风干燥箱180c干热灭菌2小时。b量筒、三角瓶等浸泡在洗涤剂溶液中，洗刷，用水冲洗干净，再用纯化水冲

13、洗干净，晾干，凡无菌操作过程中所用器皿，都应灭菌后使用。c使用过的吸管，用水冲洗干净，经重铭酸钾洗液浸泡，再分别用水及纯化水冲洗干净，装入不锈钢筒内，放烘箱180c灭菌2小时。d进入无菌室的供试品容器外部消毒处理：用75%酉精等消毒剂擦拭4.3.7.9 供试品的制备：取原液5g,置250ml的灭菌三角瓶中，加入45mlD/E中和肉汤和30%的吐温80作用10分钟后，作为供试品溶液。a需氧菌菌落总数：吸取上述供试品溶液1ml,置直径90mm的无菌平皿中，注入1520ml温度不超过45c熔化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。平行制备5个平板。b真菌菌落总数：吸取上述供试品溶液1ml,置直径9

14、0mm的无菌平皿中，注入1520ml温度不超过45c熔化的沙氏琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。平行制备5个平板。c需氧菌阴性对照的制备：同需氧菌培养平板制备方法不加供试品作阴性对照。d真菌阴性对照的制备：同真菌培养平板制备方法不加供试品作阴性对照。e培养：需氧菌计数平板倒置于3035c培养箱中培养3天,逐日观察菌落生长情况，真菌计数平板倒置于25C±2C培养7大。分别3d、5d、7d观察，点计菌落数。4.3.7.10 需氧菌菌数报告：a当总菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如果样品菌落总数超过标准值，按下述方法进行复检和结果报告。b复检方法，取复检样品

15、依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定者，则判定被检样品合格，如其中仍有1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。4.3.7.11 真菌菌数报告：a菌落呈片状生长的平板不宜采用，计数符合要求的平板上的菌落，按Xf=(Nt/5)*k式中Xf为样品真菌菌落总数，Nt为5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数；k为稀释度b当总菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如果样品菌落总数超过标准值，按下述方法进行复检和结果报告。c复检方法，取复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定者，则判定被检样品合格，如其中仍有1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不

16、合格。4.3.7.12 大肠菌群检查取样品5ml接种50ml的乳糖胆盐发酵管，置35c±2C培养24小时，若不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙红亚甲基蓝琼脂培养基的平板上，培养18-24小时。若平板上无菌落生长，或生长的菌落与表1所列的菌落形态特征不符或为非革兰氏阴性无芽抱杆菌，判该管未检出大肠菌群。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似，且为革兰氏阴性无芽抱杆菌，应进行确证实验。表1大肠菌群菌落形态特征/口加小菌落形态曙红亚甲基曲琼脂紫黑色、紫红色、红色或粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润。确证试验

17、从上述分离平板上挑选4-5个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养24-48小时。若产酸产气，判断乳糖胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。4.3.7.13 铜绿假单胞菌检查拉曾菌培养：取胆盐乳糖培养基3份，每份各50ml。1份加入供试液5m1,1份加入供试液及阳性对照菌，1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。培养1824小时，必要时可延长至48小时。阴性对照应无菌生长。b分离培养：轻轻摇动上述增菌培养液，以接种环沾取1-2环培养液（如有菌膜应挑选之），划线接种于澳化十六烷基三甲俊琼脂培养基的平板上，培养1824小时。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的典型菌落呈扁平、无定形、周边扩散、表

18、面湿润，灰白色，在菌落相邻处常有融合现象。周围时有蓝绿色素扩散。但亦有不产生色素的菌株。菌落还有粗糙型和粘液型等，应注意挑选。c纯培养:如平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落形态特征不符，判供试品未检出铜绿假单胞菌。如平板生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选23个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养1824小时。取斜面培养物进行镜检、氧化酶试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42C生长试验。d氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性

19、，不变色者为阴性。e绿脓菌素t佥：取23个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35c±2C培养24小时，加入三氯甲烷35ml,充分震荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1ml,震荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。f硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐膘水培养基中，置35c±2C培养24小时，培养基管中有气者即为阳性。g明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35c±2C培养24小时，取出放于410C,如仍呈液态为阳性，凝固者

20、为阴性。h42c生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42c培养2448小时，有铜绿假单胞菌生长为阳性。结果报告：被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌，如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42C生长试验三者均为阳性时，仍可报告检出铜绿假单胞菌。4.3.7.14 金黄色葡萄球菌的检查a增菌培养：取营养肉汤培养基3份，每份各50ml。1份加入5ml供试液，1份加入供试液及阳性对照菌；1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。培养1824小时，必要时可延长至48小时。阴性对照应无菌生长。b分离培养：将

21、上述增菌培养液，以接种环沾取1-2环培养液，划线接种于血琼脂平板上，置35C±2C培养2448小时。在血平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表所列特征，可报告未检出金黄色葡萄球菌。若平板上生长的菌落与表所列的菌落特征相符或疑似，应挑选23个菌落，涂片作革兰染色镜检，符合菌落特征的应进行下列试验。c甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置35c±2C培养24小时，发酵甘露醇产酸者为阳性。d血浆凝固酶试验：取灭菌小试管3支，各加入血浆和无菌水混合液（1：1）0.5ml,再分别加入可疑菌株的营养肉汤培养

22、物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml,即为试验管、阳性对照管和阴性对照管。将3管同时培养，3小时后开始观察直至24小时。阴性对照管的血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固，若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性，否则为阴性。如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时，应另制备血浆，重新试验。若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。结果报告：凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品中检出金黄色葡萄球菌。4.3.7.15 溶血性链球菌检查a取50ml葡萄糖肉汤培养基3份，1份加入5ml供试液，1份加入供试液及阳性对照菌；1份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。35C±2c培养24小时，阴性对照应无菌生长。b分离培养：将上述增菌培养液，以接种环沾取1-2环培养液，划线接种于血琼脂平板上，置35C±2C培养24小时观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表所列特征，可报告未检出金黄色葡萄球菌。若平板上生长